检索结果-内蒙古大学图书馆

人Hes1-shRNA，Hes5-shRNA慢病毒表达载体的构建、包装及鉴定

医学分子生物学杂志 2010年第1期7卷 54-58页

作者：王春华林玲郑志竑福建医科大学分子医学研究中心福州市350004 福建医科大学附属协和医院神经外科福建神经外科研究所福州市350001

目的构建人Hesl-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体，为Notch—Hes信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人Hes1，Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸，退火后克隆至pENTR／U6入门载体。通过入门载体瞬时转染神经... 详细信息

目的构建人Hesl-shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体，为Notch—Hes信号通路的相关研究奠定基础。方法根据人Hes1，Hes5基因mRNA序列分别设计、合成多对互补的DNA单链寡核苷酸，退火后克隆至pENTR／U6入门载体。通过入门载体瞬时转染神经胶质瘤U251细胞筛选有效干扰序列。将含有效干扰序列的入门载体与pLenti6／BLOCK—iT—DEST载体进行LR重组构建Hesl—shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体，经脂质体介导入293FT细胞，包装成慢病毒。用该慢病毒感染U251细胞，Western印迹法分别检测Hes1，Hes5蛋白的表达。结果分别构建了针对Hes1和Hes5基因的特异性shRNA慢病毒表达载体，其包装获得慢病毒可有效感染U251细胞并分别对HeM，Hes5蛋白的表达有显著抑制作用。结论成功构建了Hesl—shRNA和Hes5-shRNA慢病毒表达载体。

关键词： Notch信号通路 Hes1基因 Hes5基因慢病毒

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Toll样受体与脑缺血

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中国免疫学杂志 2009年第2期25卷 190-192,F0003页

作者：涂献坤杨卫忠福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福州350001

脑缺血是临床上的常见病,在人类各种疾病死因的排序中,脑血管病-直列于前三位之内,成为人类死亡的主要原因之一。脑血管病可分为缺血性脑血管病和出血性脑血管病,其中缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%－80%。脑缺血的病理生理机... 详细信息

脑缺血是临床上的常见病,在人类各种疾病死因的排序中,脑血管病-直列于前三位之内,成为人类死亡的主要原因之一。脑血管病可分为缺血性脑血管病和出血性脑血管病,其中缺血性脑血管病约占全部脑血管病人的70%－80%。脑缺血的病理生理机制比较复杂,主要涉及离子稳态的破坏、自由基的损伤作用、兴奋性氨基酸的毒性作用、免疫炎症作用和细胞凋亡等机制。Toll样受体已发现的共有13种,其中部分Toll样受体与全身多种重要器官的缺血再灌注损伤有关,目前已经明确与脑缺血有关的有Toll样受体2、4、9。[第一段]

关键词： Toll样受体2 脑缺血出血性脑血管病缺血性脑血管病缺血再灌注损伤病理生理机制兴奋性氨基酸脑血管病人

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人良性脑膜瘤细胞热敏感性的实验研究

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中国现代医学杂志 2009年第10期19卷 1506-1510页

作者：王锐杨卫忠石松生倪天瑞任宝刚林于峰王春华福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福建福州350001

目的探讨人良性脑膜瘤细胞的热敏感性及其机制。方法15例人脑膜瘤原代培养细胞进行温水加热体外实验。采用Western blot法检测HSF1蛋白表达;免疫组织化学法检测HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达;MTT法检测细胞增殖抑制率、TUNNEL法检... 详细信息

目的探讨人良性脑膜瘤细胞的热敏感性及其机制。方法15例人脑膜瘤原代培养细胞进行温水加热体外实验。采用Western blot法检测HSF1蛋白表达;免疫组织化学法检测HSF1、HSP27、HSP70和HSP90蛋白表达;MTT法检测细胞增殖抑制率、TUNNEL法检测细胞凋亡率。结果15例人良性脑膜瘤在44℃温水加热60min后细胞增殖抑制率仅为(8.33±0.18)%,凋亡率(%)为(2.4±0.16)%。温水加热后,人脑膜瘤增殖能力没有受到抑制,没有诱导细胞凋亡或细胞坏死(P>0.05)。在热刺激下,HSF1蛋白发生活化,由单体(80kD)转化为三聚体(260kD)。加热后6h出现HSP27、HSP70与HSP90表达明显增加,持续24h高表达,显著高于加热前对照组(P<0.05)。结论人脑膜瘤热敏感性低,单纯温水加热(42～44℃)无抑制细胞增殖和增加细胞凋亡的作用。其机制可能是在加热刺激下,人脑膜瘤细胞HSF1蛋白发生三聚体活化,诱导型HSP27、HSP70和HSP90在加热后24h内持续高表达,保护和修复了热损伤的人脑膜瘤细胞。

关键词：脑膜瘤加热实验热敏感性 HSF1 热休克蛋白 MTT 细胞凋亡

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姜黄素诱导人脑胶质瘤细胞U251分化的实验研究

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中国组织化学与细胞化学杂志 2009年第4期18卷 371-376页

作者：方俊杰杨卫忠陈春美福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福州350001

目的探讨姜黄素对体外培养的人胶质瘤细胞U251的诱导分化作用及其机制。方法将人脑胶质瘤U251细胞分为对照组和药物组,对照组以含10%小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16μmol/L姜黄素(本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251... 详细信息

目的探讨姜黄素对体外培养的人胶质瘤细胞U251的诱导分化作用及其机制。方法将人脑胶质瘤U251细胞分为对照组和药物组,对照组以含10%小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16μmol/L姜黄素(本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48h的半数抑制浓度为16μmol/L)处理。倒置显微镜观察细胞形态学变化;流式细胞仪检测细胞周期变化;免疫细胞化学法检测波形蛋白(vimentin)表达变化;免疫印迹(Westernblot)法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)、磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达变化。结果姜黄素作用96h后,与对照组相比,U251细胞突起明显增多变细长。姜黄素培养48h,S期细胞由28.53%明显降低至20.35%(P=0.015);vimentin强阳性细胞百分率由90%明显降低至50%(P=0.009);GFAP蛋白与内参β-actin表达量的比值由0.22明显升高至0.50(P=0.01)。Westernblot法显示,姜黄素分别作用于U251细胞48和96h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK/ERK分别为0.35和0.22,较对照组明显减少(P=0.03和0.007)。结论姜黄素对体外培养的胶质瘤U251细胞有显著的诱导分化作用,其机制可能与抑制异常激活的ERK信号通路有关。

关键词：姜黄素胶质瘤分化细胞外调节蛋白激酶免疫印迹

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ERK介导姜黄素抑制人脑胶质瘤细胞U251侵袭性

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中国现代应用药学 2009年第S1期26卷 1101-1104页

作者：方俊杰杨卫忠陈春美福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福州350001

目的探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10%小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16μmol·L-1姜黄素(本实验先前的研究结... 详细信息

目的探讨姜黄素对人脑胶质瘤细胞U251侵袭性的影响及ERK/MAPK信号通路在此过程中的作用。方法将人脑胶质瘤细胞U251分为对照组和药物组,对照组以含10%小牛血清的DMEM培养基常规培养,药物组用16μmol·L-1姜黄素(本实验先前的研究结果显示,姜黄素作用于U251细胞48h的半数抑制剂量为16μmol·L-1)处理。Transwell侵袭小室模型法检测细胞侵袭性的变化;免疫细胞化学法检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)蛋白表达变化;免疫印迹(Western blot)法检测细胞外调节蛋白激酶(ERK)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶(pERK)表达变化。结果Transwell侵袭小室模型法显示,在每个高倍镜视野下,对照组穿过微孔膜的细胞数平均值为160个,药物组为42个。免疫细胞化学法显示姜黄素作用后MMP-9蛋白阳性细胞百分率由76%降低至40%。Western blot法显示,16μmol·L-1姜黄素分别作用于U251细胞0、24、48和96h,ERK蛋白水平无明显改变,pERK水平与ERK水平比值(pERK/ERK)分别为0.48、0.42、0.35和0.22。结论姜黄素在体外可有效抑制胶质瘤U251细胞的侵袭性,其机制可能是通过抑制异常激活的ERK信号通路来实现的。

关键词：姜黄素胶质瘤 ERK 侵袭免疫印迹

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伽玛刀双靶点治疗原发性三叉神经痛的临床研究

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中国神经精神疾病杂志 2009年第6期35卷 339-341页

作者：方俊杰赵洪洋杨卫忠福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福州350001 华中科技大学同济医学院附属协和医院神经外科

目的评价使用伽玛刀双靶点治疗原发性三叉神经痛的疗效和安全性。方法对32例原发性三叉神经痛病人采用双靶点治疗,以三叉神经根近桥脑处和近半月节处为照射靶点,中心剂量84～90Gy,周边剂量42～45Gy,桥脑临界剂量<20Gy。结果本组32例... 详细信息

目的评价使用伽玛刀双靶点治疗原发性三叉神经痛的疗效和安全性。方法对32例原发性三叉神经痛病人采用双靶点治疗,以三叉神经根近桥脑处和近半月节处为照射靶点,中心剂量84～90Gy,周边剂量42～45Gy,桥脑临界剂量<20Gy。结果本组32例获随访,均有疼痛缓解,按BNI评分,有效率为96.9%。起效时间平均4.2个月(1d～26个月)。8例(25%)复发,8例(25%)出现并发症。结论双靶点治疗能有效缓解三叉神经痛,提高患者生活质量。

关键词：伽玛刀双靶点原发性三叉神经痛

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NMDAR_1、Caspase-3在脊髓缺血性损伤的表达特点及相关性研究

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国际神经病学神经外科学杂志 2009年第5期36卷 381-385页

作者：杨卫忠贾建文陈春美王春华涂献坤宋启民福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福建福州350001

目的探讨脊髓缺血后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDAR1)、Caspase-3的表达变化规律及意义。方法40只新西兰大白兔采用结扎腰动脉建立脊髓缺血模型,于缺血后6h、12h、24h、48h、72h取缺血脊髓标本,运用反转... 详细信息

目的探讨脊髓缺血后N-甲基-D-天门冬氨酸受体1(N-methyl-D-aspartatereceptor,NMDAR1)、Caspase-3的表达变化规律及意义。方法40只新西兰大白兔采用结扎腰动脉建立脊髓缺血模型,于缺血后6h、12h、24h、48h、72h取缺血脊髓标本,运用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)及蛋白印记技术在基因和蛋白水平检测NMDAR1、Caspase-3在不同缺血时间的表达变化规律,同时运用免疫组织化学技术观察NMDAR1、Caspase-3在细胞中的表达定位情况;用SPSS统计分析。结果RT-PCR、蛋白印记显示缺血组与对照组比较NMDAR1、Caspase-3表达增加,并且有随缺血时间的延长表达逐渐增高的趋势,相关性分析显示NMDAR1、Caspase-3在mRNA(r=0.947,P<0.005)、蛋白(r=0.984,P<0.005)水平呈正相关;免疫组化结果发现,NMDAR1、Caspase-3主要在细胞浆中表达。结论脊髓缺血时NMDAR1、Caspase-3随缺血时间延长表达增加,NMDAR1、Caspase-3共同参与脊髓缺血性损伤过程,其表达与缺血时间有关。

关键词：脊髓缺血性损伤 NMDAR1 Caspase-3 兔

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脑胶质瘤增敏放疗的分子生物学研究进展

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国际神经病学神经外科学杂志 2009年第6期36卷 552-555页

作者：金昌丹石松生陈春美福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福建福州350001

恶性胶质瘤是成人最常见的原发性中枢神经系统肿瘤。平均存活时间少于1年的这种状况在过去的30年里并没有得到显著改善。胶质瘤明显的辐射抗性是其预后差的重要原因之一。对胶质瘤恶性表型及辐射抗性分子机制的深入了解有利于产生新的... 详细信息

恶性胶质瘤是成人最常见的原发性中枢神经系统肿瘤。平均存活时间少于1年的这种状况在过去的30年里并没有得到显著改善。胶质瘤明显的辐射抗性是其预后差的重要原因之一。对胶质瘤恶性表型及辐射抗性分子机制的深入了解有利于产生新的针对性治疗策略。近年对于胶质瘤的分子生物学研究发现了一些其生长和生存途径中共同的畸变位点,并针对这些畸变位点,产生了新的放疗方法,目的是为了提高功效,减少毒性。

关键词：胶质瘤放疗增敏分子生物学

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5-LOX和Caspase-1在大鼠脑缺血中的表达意义

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脑与神经疾病杂志 2009年第2期17卷 118-120页

作者：杨卫忠涂献坤石松生陈春美王春华张永亮蓝佛琳福建医科大学附属协和医院神经外科福建省神经外科研究所福州350001

目的研究大鼠脑缺血后5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)和Caspase-1蛋白和基因的表达情况及其相关性。方法用线栓法制备大鼠脑缺血(MCAO)模型,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化测定缺血脑组织6、12、24、48h不同时点脑皮质5-LOX... 详细信息

目的研究大鼠脑缺血后5-脂氧合酶(5-lipoxygenase,5-LOX)和Caspase-1蛋白和基因的表达情况及其相关性。方法用线栓法制备大鼠脑缺血(MCAO)模型,用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和免疫组化测定缺血脑组织6、12、24、48h不同时点脑皮质5-LOX和Caspase-1在基因和蛋白水平的表达。结果TTC脑片染色证实脑缺血模型建立成功,发现5-LOX和Caspase-1均在正常脑组织中少量表达,且随缺血时间延长表达量增高。结论大鼠脑缺血可诱导5-LOX和Caspase-1表达增高,二者可能参与缺血性脑损伤的形成。

关键词：脑缺血 5-脂氧合酶 Caspase-1

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N-甲基-D-天冬氨酸受体与中枢神经系统缺血性疾病的关系

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国际神经病学神经外科学杂志 2009年第2期36卷 185-188页

作者：宋启民杨卫忠陈春美福建医科大学附属协和医院神经外科福建省协和医院神经外科研究所福建省福州市350001

N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate)是兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)的特异性受体,属配体电压双重门控的离子通道,由3种不同的亚基组成的功能复合体,目前已发现N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)至少存在7个亚单位,参与学习、记忆形成... 详细信息

N-甲基-D-天冬氨酸受体(N-methyl-D-aspartate)是兴奋性氨基酸谷氨酸(Glu)的特异性受体,属配体电压双重门控的离子通道,由3种不同的亚基组成的功能复合体,目前已发现N-甲基-D-天冬氨酸受体(NMDAR)至少存在7个亚单位,参与学习、记忆形成及神经系统的发育等生理功能,病理情况下,NMDAR还与中枢神经系统缺血性神经毒性损害密切相关,本篇将对NMDAR的结构、功能及其参与中枢神经系统神经毒性损害的机制作一综述。

关键词： NMDAR 生理功能神经毒性拮抗剂

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