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中国实验血液学杂志 2015年第3期23卷 706-712页

作者：赵凯战榕吴顺泉黄豪博徐珍珍牛文艳福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福建福州350001

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Ho... 详细信息

目的:研究microRNA-15a(miR-15a)在多发性骨髓瘤(MM)细胞生长中的作用及可能机制。方法:慢病毒颗粒感染MM细胞株U266和RPMI8226,流式细胞术(FCM)分选获得稳定转染MM细胞株。CCK-8法检测miR-15a高表达前后MM细胞的增殖情况;AO/EB染色、Hoechst 33258荧光染色法及FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞凋亡的情况;FCM检测miR-15a高表达前后MM细胞周期的情况;real-time PCR方法检测miR-15a高表达前后MM细胞miR-15a、BMI-1及BCL-2 mRNA的表达;Western blot方法检测miR-15a高表达前后MM细胞BMI-1蛋白表达。结果:获得高表达miR-15a的MM稳定转染细胞株。CCK-8结果显示miR-15a高表达可抑制M M细胞(U266和RPM I8226)的增殖;AO/EB、Hoechst 33258染色和FCM结果显示,miR-15a高表达可显著诱导MM细胞(U266和RPM I8226)的凋亡,U266和RPM I8226细胞高表达组与对照组细胞凋亡率分别为:90.52%vs37.08%,59.40%vs 44.17%;同时,miR-15a高表达可诱导MM细胞(U266和RPM I8226)G1期阻滞,G1期细胞分别为(41.50±0.64)%、(45.31±0.77)%。real-time PCR结果显示,在高表达miR-15a抑制骨髓瘤细胞生长的过程中BCL-2 mRNA表达显著降低,BMI-1 mRNA表达则没有改变,但是Western blot结果却显示BMI-1蛋白表达出现显著降低。结论:miR-15a高表达通过诱导骨髓瘤细胞周期阻滞和凋亡抑制骨髓瘤细胞生长,其机制涉及miR-15a在转录后水平对BMI-1、BCL-2基因的负调控。

关键词： microRNA-15a 骨髓瘤 U266细胞株 RPMI8226细胞株细胞周期细胞凋亡 BMI-1 BCL-2

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Notch基因在慢性淋巴细胞白血病细胞的表达和介导抗凋亡、耐药机制的研究

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中国实验血液学杂志 2015年第4期23卷 919-924页

作者：张金燕张桔顺许贞书福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福建福州350000

目的:检测原代慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因的表达情况;研究阿糖胞苷及地塞米松作用后肿瘤细胞Notch蛋白的变化,探讨Notch基因介导慢性淋巴细胞白血病抗凋亡及耐药机制。方法:采集慢性淋巴细胞白血病24例初治患者的骨髓血或外周血... 详细信息

目的:检测原代慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因的表达情况;研究阿糖胞苷及地塞米松作用后肿瘤细胞Notch蛋白的变化,探讨Notch基因介导慢性淋巴细胞白血病抗凋亡及耐药机制。方法:采集慢性淋巴细胞白血病24例初治患者的骨髓血或外周血单个核细胞,以健康体检者14例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRTPCR)检测Notch及BCL-2、NF-κB基因的转录水平;应用Western blot检测L1210细胞株在化疗药物阿糖胞苷、地塞米松作用后Notch蛋白的变化。结果:CLL组的Notch1、Notch2、BCL-2、NF-κB基因的mRNA水平表达明显高于正常对照组,分别为0.8556±0.8726和0.6731±0.5334(P=0.0182)、1.2273±0.8207和0.6577±0.6424(P﹤0.0001)、8.0960±7.5661和0.5969±0.4976(P﹤0.0001)、1.0966±0.6925和0.5373±0.7180(P﹤0.0001),而2组的Notch3和Notch4基因的mRNA水平未见明显差异,分别为1.1914±2.4219和0.8713±0.7937(P=0.3427)、0.8174±1.0869和0.9752±1.3446(P=0.2402);L1210细胞在低浓度、中浓度阿糖胞苷作用24 h后,Notch1蛋白表达明显下降,在高浓度阿糖胞苷或延长中浓度阿糖胞苷组的作用时间,Notch1蛋白表达量增高。L1210细胞在地塞米松作用后,Notch1蛋白表达下降,但不随地塞米松的浓度及作用时间的变化而变化。结论:慢性淋巴细胞白血病细胞Notch基因转录水平明显高于正常人。Notch1蛋白在阿糖胞苷和地塞米松抑制肿瘤细胞增殖过程中表达下调。Notch信号通路可能介导慢性淋巴细胞白血病细胞抗凋亡及耐药过程。

关键词：慢性淋巴细胞白血病 Notch基因抗凋亡耐药

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水流动力学注射PD-L1质粒在清髓预处理小鼠移植模型中的表达

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中国实验血液学杂志 2015年第5期23卷 1432-1437页

作者：李晓帆李乃农杨凤娥陈元仲福建医科大学附属协和医院血液科福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建福州350000

目的:建立水流动力学法表达PD-L1质粒小鼠模型并探讨清髓预处理对其表达的影响。方法:利用质粒扩增提取,应用尾静脉水流动力学注射法、门静脉胶原酶灌流分离肝细胞技术、RT-PCR、流式细胞术及ELISA法检测PD-L1的表达和功能;利用动物模... 详细信息

目的:建立水流动力学法表达PD-L1质粒小鼠模型并探讨清髓预处理对其表达的影响。方法:利用质粒扩增提取,应用尾静脉水流动力学注射法、门静脉胶原酶灌流分离肝细胞技术、RT-PCR、流式细胞术及ELISA法检测PD-L1的表达和功能;利用动物模型了解化疗清髓或放射清髓对水流动力学注射PD-L1质粒表达的影响。结果:通过尾静脉大体积快速注射PD-L1质粒,在注射后8 h出现PD-L1 mRNA和蛋白的表达,24 h达峰值,7 d后回归基线;血清PD-L1在注射后24 h就达到了100μg/ml左右,7 d后达峰值,21 d内均保持高表达,1个月后回归基线;水流动力学注射所表达的PD-L1功能与文献报道一致;在各个时间点放/化疗清髓组与未预处理且转染的对照组相比PD-L1表达并无显著性差别;通过该方法注射表达PD-L1的小鼠移植后存活率高于对照组(P<0.05)。结论:小鼠清髓预处理对水流动力学注射PD-L1表达并无影响,注射PD-L1质粒可有效应用于小鼠造血干细胞移植模型中。

关键词：造血干细胞移植水流动力学法 PD-L1质粒清髓预处理

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CD131基因在急性髓系白血病细胞的表达研究

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中国实验血液学杂志 2015年第6期23卷 1542-1546页

作者：杨景辉吴勇李先芳陈元仲福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福建福州350001

目的:检测急性髓系白血病细胞CD131基因表达水平及是否存在突变,分析CD131表达水平与急性髓系白血病临床特点的关系。方法:收集44例急性髓系白血病初治病人及25个正常人外周血单个核细胞,应用RTPCR比较二者CD131基因的表达水平;随机选... 详细信息

目的:检测急性髓系白血病细胞CD131基因表达水平及是否存在突变,分析CD131表达水平与急性髓系白血病临床特点的关系。方法:收集44例急性髓系白血病初治病人及25个正常人外周血单个核细胞,应用RTPCR比较二者CD131基因的表达水平;随机选取15例病人及5例正常人,采用PCR方法扩增CD131全长编码序列,连接到p GEM-T载体,转化Top10感受态细胞,筛选阳性克隆,序列分析检测二者CD131编码序列的突变情况。根据CD131的表达情况,将病例分为CD131阴性组和CD131阳性组,比较两组病例外周血白细胞数、CD34+细胞比例、化疗缓解率。结果:病例组的CD131基因表达水平显著低于正常对照组;序列分析检测到5种CD131的突变体,病例组的CD131的突变率为75.33%,显著高于正常对照组的突变率18.0%。CD131阴性组的CD34+细胞比例(69.1%±20.8%)显著高于CD131阳性组(27.7%±15.7%),化疗后完全缓解率(71.1%)低于CD131阳性组(33.3%)。两组外周血白细胞计数差别无统计学意义。结论:CD131基因在急性髓系白血病细胞中表达水平低且突变率高。不表达CD131的急性髓系白血病,其CD34+细胞比例高,化疗完全缓解率低。

关键词： CD131基因急性髓系白血病 CD34+细胞

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Bmi-1及p14在结外NK/T细胞淋巴瘤中的表达及临床意义

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中国实验血液学杂志 2015年第4期23卷 1009-1012页

作者：张浪辉吴顺泉黄豪博牛文艳李娅萍战榕福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福建福州350001

目的:本研究旨在探讨Bmi-1及p14蛋白在结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)中的表达情况及其临床意义。方法::采用免疫组织化学Maxvision法检测21例ENKTCL组织标本及11例正常淋巴结组织标本中Bmi-1及P14的表达水平并进行分析比较。结果:ENKTCL... 详细信息

目的:本研究旨在探讨Bmi-1及p14蛋白在结外NK/T细胞淋巴瘤(ENKTCL)中的表达情况及其临床意义。方法::采用免疫组织化学Maxvision法检测21例ENKTCL组织标本及11例正常淋巴结组织标本中Bmi-1及P14的表达水平并进行分析比较。结果:ENKTCL组织中Bmi-1表达显著高于对照组,且与患者的临床分期有相关性(P<0.05),而与患者的年龄、性别、外周血LDH、B症状及国际预后指数评分(IPI)均无相关性(P>0.05);相反在ENKTCL组织中P14的表达则低于对照组,且与患者的年龄、性别、临床分期、外周血LDH、B症状及国际预后指数评分(IPI)均无相关性(P>0.05)。在ENKTCL组织中Bmi-1及P14二者之间有负相关关系(r=-0.472,P=0.031)。结论:Bmi-1在ENKTCL组织中过表达,其对P14的负向调控可能在ENKTCL的发生及发展中发挥作用。

关键词：结外NK/T细胞淋巴瘤 Bmi-1蛋白 P14蛋白

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HIF-1α在原代急性髓系白血病细胞中的表达及其与预后的关系

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中国实验血液学杂志 2015年第1期23卷 19-23页

作者：陈萍姜熙黄慧芳原琴伍娟英郭亚斐陈元仲福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院福建福州350001

目的:本研究通过检测HIF-1α在原代急性髓系白血病(AML)细胞中的表达,探讨其表达水平与临床参数、预后之间的关系。方法:采用CD3单克隆抗体负分选法分选出53例初诊AML(除急性早幼粒细胞白血病APL)患者外周血中的AML细胞,应用实时荧光定... 详细信息

目的:本研究通过检测HIF-1α在原代急性髓系白血病(AML)细胞中的表达,探讨其表达水平与临床参数、预后之间的关系。方法:采用CD3单克隆抗体负分选法分选出53例初诊AML(除急性早幼粒细胞白血病APL)患者外周血中的AML细胞,应用实时荧光定量RT-PCR(FQ RT-PCR)检测AML细胞的HIF-1α表达水平,以管家基因β-actin为内参,按2-△△Ct法计算目的基因相对正常供者的表达量,分析其表达水平与患者年龄、性别、白细胞计数、诊断分型、疗效等临床参数之间的关系,并进一步用Western Blot法分析了有髓外浸润和无髓外浸润AML患者HIF-1α蛋白表达水平。结果:HIF-1α在原代AML细胞中的表达量与年龄、性别、外周血白细胞计数、血红蛋白水平、血小板计数及外周血原始细胞比例等无关;不同FAB分型的AML患者的HIF-1α表达量无显著差异;标准1-2个疗程化疗后获得完全缓解(CR)的AML患者HIF-1α表达量低于2个疗程后未获得CR的AML患者,但无统计学差异;高表达HIF-1α的AML患者1年复发率要高于低表达者;伴有髓外浸润的AML患者的HIF-1α基因和HIF-1α蛋白表达量显著高于无髓外浸润的患者;HIF-1α表达水平与PI3K/AKT通路中重要的负调控分子PTEN水平呈明显负相关(r=-0.48,P=0.001)。结论:HIF-1α的表达与AML的髓外浸润和预后密切相关,有可能成为AML预后判断的一个参考指标。

关键词： HIF-1α 急性髓系白血病髓外浸润疾病预后

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2例异基因造血干细胞移植后的植入状态监测及近期胸腺功能重建

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福建医药杂志 2016年第5期38卷 68-72页

作者：金静君杨婷王坤陈金烟任金华韩俊永刘慎敏薛士杰福建省医学科学研究院福建省医学测试重点实验室福州350001 福建医科大学附属协和医院血液病研究所

目的监测异基因造血干细胞移植后的植入状态,评价移植后的近期胸腺功能重建。方法对1例接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)半相合亲缘供者与1例HLA全相合非亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的白血病患者,收... 详细信息

目的监测异基因造血干细胞移植后的植入状态,评价移植后的近期胸腺功能重建。方法对1例接受人类白细胞抗原(human leukocyte antigen,HLA)半相合亲缘供者与1例HLA全相合非亲缘供者异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)治疗的白血病患者,收集供者和受者术前、受者移植后1个多月、受者移植后4个多月的EDTA抗凝静脉血,同时采集10例正常健康志愿者的EDTA抗凝静脉血作为正常对照。采用STR-PCR技术检测20个常染色体STR基因座及1个性别基因座的基因型。采用实时荧光定量PCR方法检测受者不同时期和10例正常健康志愿者的T细胞受体DNA重排删除环(TREC)水平。结果 2例造血干细胞移植病例监测在移植后1个多月及4个多月均完全表现为供者源型。造血干细胞移植后1个多月及4个多月,半相合供者的白细胞及血小板恢复晚于HLA全相合供者。2例病人移植前TREC相对定量略低于年龄相近的正常对照组,移植后1个多月及4个多月TREC水平明显升高,其中HLA全相合移植病人TREC相对定量高于HLA半相合移植病人。结论移植后1个多月及4个多月供者造血干细胞在受者体内完全植活。全相合造血干细胞移植后造血及免疫重建快于半相合造血干细胞移植。

关键词：造血干细胞移植 T细胞受体重排删除环免疫重建

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应用白消安联合氟达拉滨预处理方案建立小鼠半相合骨髓移植移植物抗宿主病模型

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中华血液学杂志 2015年第3期36卷 238-240页

作者：李乃农胡晚育李晓帆杨雯陈萍陈元仲福建医科大学附属协和医院血液科、福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福州350000

HLA半相合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）已成为治愈恶性血液病的重要手段[1].但是其移植物抗宿主病（GVHD）的发生率高,是引起移植相关死亡的主要原因之一.目前GVHD的小鼠模型绝大部分是以全身照射（TBI）为预处理方案,而且多数是... 详细信息

HLA半相合异基因造血干细胞移植（allo-HSCT）已成为治愈恶性血液病的重要手段[1].但是其移植物抗宿主病（GVHD）的发生率高,是引起移植相关死亡的主要原因之一.目前GVHD的小鼠模型绝大部分是以全身照射（TBI）为预处理方案,而且多数是MHC完全不相合的移植模型,不能很好地模拟临床半相合骨髓移植（BMT）实际状况.

关键词：移植物抗宿主病半相合骨髓移植预处理方案小鼠模型氟达拉滨异基因造血干细胞移植白消安应用

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TCR Vβ亚家族分析法识别小鼠亚临床MHC 缺失诱导的移植物抗宿主病

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中华微生物学和免疫学杂志 2015年第5期35卷 321-327页

作者：李晓帆李乃农田伟谢何琳杨凤娥陈元仲福建医科大学附属协和医院血液科福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福州350000 福建医科大学附属协和医院皮肤科福州350000 福建医科大学附属协和医院药学部福州350000

目的：研究T细胞抗原受体（ TCR） Vβ亚家族分析法用于亚临床主要组织相容性复合体（MHC）缺失相关的移植物抗宿主病（GVHD）的检测。方法 BALB／c小鼠给予9．5 Gy（950 rad）全身放射，放射后回输T细胞去除的C57BL／6或DBA／2骨髓细... 详细信息

目的：研究T细胞抗原受体（ TCR） Vβ亚家族分析法用于亚临床主要组织相容性复合体（MHC）缺失相关的移植物抗宿主病（GVHD）的检测。方法 BALB／c小鼠给予9．5 Gy（950 rad）全身放射，放射后回输T细胞去除的C57BL／6或DBA／2骨髓细胞。将小鼠分为两组：WT组：回输来自野生型骨髓细胞106个／只；MHC－／－组：回输来自MHCⅡ类分子缺失的骨髓细胞106个／只。移植后观察小鼠GVHD典型症状，病理切片确诊GVHD。结果典型的MHCⅡ类分子缺失相关的GVHD可以在异基因（H-2b→H-2d）C57BL／6动物模型中诱导。在DBA ／2模型，MHCⅡ类分子缺失诱导的是亚临床的GVHD。 TCR Vβ亚家族分析提示TCR Vβ6与病理符合度好，可识别该模型亚临床GVHD。结论利用TCR Vβ亚家族分析法发现TCR Vβ6升高可作为识别小鼠亚临床MHC缺失诱导的移植物抗宿主病的指标。

关键词：移植物抗宿主病 TCR Vβ亚家族主要组织相容性复合体克隆清除动物模型

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耐两性霉素B的近平滑与热带假丝酵母菌的体外诱导及耐药分子机制研究

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中国临床药理学杂志 2015年第1期31卷 21-24页

作者：黄金梅沈建箴吴淡森付海英黄劲龙肖世极周华蓉福建省血液病研究所福建省血液病学重点实验室福建医科大学附属协和医院血液科

目的体外诱导近平滑假丝酵母菌(CP)、热带假丝酵母菌(CT)对两性霉素B(AMB)的耐药株,检测其中的耐药基因表达情况。方法 AMB体外构建耐药株,用实时荧光定量PCR法检测耐药基因的表达水平。结果 CP、CT野生株经体外AMB浓度递增法诱导后,形... 详细信息

目的体外诱导近平滑假丝酵母菌(CP)、热带假丝酵母菌(CT)对两性霉素B(AMB)的耐药株,检测其中的耐药基因表达情况。方法 AMB体外构建耐药株,用实时荧光定量PCR法检测耐药基因的表达水平。结果 CP、CT野生株经体外AMB浓度递增法诱导后,形成耐药株最低抑菌浓度(MIC,≥8μg·m L-1);CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2基因在野生株中低水平表达,在耐药株中表达水平明显升高,差别有统计学意义(P<0.05);CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2的表达量在CPAMB耐药株中分别是其野生株的136.92,16.33,2.07,14.84,4.07,2.38倍;在CT AMB耐药株中分别是其野生株的8.83,2.98,3.00,2.40,2.30,3.57倍。结论 CP、CT对AMB耐药与CYP51A、CYP51B、CDR1、CDR2、MDR1及MDR2基因过度表达有关。

关键词：假丝酵母菌两性霉素B 耐药基因表达

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