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中国食品学报 2016年第7期16卷 140-148页

作者：肖琼肖安风姚德恒朱艳冰倪辉蔡慧农集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

为了优化琼胶酶酶解琼胶制备琼胶寡糖的工艺条件,在单因素试验的基础上,运用软件Design-Expert8.0设计中心组合试验,以反应体系中还原糖生成量为评价指标,采用响应面分析法确定琼胶酶酶解的最优条件。优化结果:酶解温度40℃,p H 7.04,Na... 详细信息

为了优化琼胶酶酶解琼胶制备琼胶寡糖的工艺条件,在单因素试验的基础上,运用软件Design-Expert8.0设计中心组合试验,以反应体系中还原糖生成量为评价指标,采用响应面分析法确定琼胶酶酶解的最优条件。优化结果:酶解温度40℃,p H 7.04,Na Cl添加量15 g/L,加酶量为体系的23.97%(14.4 U)、底物质量浓度11 g/L。在此最佳工艺条件下,还原糖质量浓度达1762.3 mg/L,比优化前提高了近3倍,同时琼胶的转化率达到30%。采用薄层色谱分析法优化前后酶解产物的降解情况,结果显示优化后的终产物基本只有新琼二糖,酶解反应比优化前更加完全,酶解效率更高。试验结果表明,采用基于中心组合设计的响应面分析方法能够较大地提高目标产物的产量,实现酶解工艺条件的优化。

关键词：琼胶酶酶水解琼胶寡糖响应面法

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微泡菌属ALW5褐藻胶裂解酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

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中国食品学报 2016年第6期16卷 79-87页

作者：吴丽云倪辉李鹤宾肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门医学高等专科学校福建厦门361008

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基... 详细信息

利用褐藻胶为唯一碳源的选择性培养基,从腐烂海带分离产褐藻胶裂解酶菌株。采用16S r RNA基因序列分析,对其进行分类鉴定;采用DNS-还原糖法测定褐藻胶裂解酶活性,对其酶学性质进行研究;通过测定酶解产物清除DPPH自由基、·OH自由基和还原能力来评价其抗氧化活性。结果表明:获得1株产褐藻胶裂解酶菌株ALW5,16S rRNA基因序列分析显示该菌株归属于微泡菌属。菌株ALW5产胞外褐藻胶裂解酶,酶的最适反应温度45℃,最适pH 7.0;在50℃下处理30 min,可保留63%的酶活性,在55℃时酶的稳定性差;在pH 4.0~11.0条件下处理30 min,可保留60%以上的酶活性,pH稳定性范围宽;10 mmol/L的K^+、Na^+和Mg^(2+)对酶有明显的激活作用,而Ca^(2+)、Co^(2+)、Cu^(2+)、Ni^(2+)、Ba^(2+)、Zn^(2+)、Fe^(2+)、Fe3+和Al3+均对酶有不同程度的抑制作用;除了EDTA和SDS,酶对其余抑制剂和去污剂具有好的抗性。褐藻胶裂解酶酶解产物对DPPH自由基和·OH自由基的半数抑制剂量IC50分别为10.3 mg/m L和2.9 mg/m L,还原能力较强,具有良好的抗氧化能力。

关键词：微泡菌属褐藻胶裂解酶酶学性质酶解产物抗氧化活性

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一株红树内生真菌的形态学及28S rDNA序列鉴定

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激光生物学报 2017年第1期26卷 73-77页

作者：黄莹纪仁飞陈艳红伍菱杜希萍集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

本文采用形态学方法,并结合28S rDNA序列分析对分离自红树植物海马齿(Sesuvium portulacastrum)的1株内生真菌BY1进行鉴定。结果表明菌株BY1的菌落和显微形态与曲霉属典型特征相符,其28S rDNA序列与矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus... 详细信息

本文采用形态学方法,并结合28S rDNA序列分析对分离自红树植物海马齿(Sesuvium portulacastrum)的1株内生真菌BY1进行鉴定。结果表明菌株BY1的菌落和显微形态与曲霉属典型特征相符,其28S rDNA序列与矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus NRRL 4741,登录号AF459727.1)相似度达100%,系统发育关系也显示其与矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus NRRL 4741)亲缘关系最近,位于同一分支。因此将菌株BY1鉴定为矮棒曲霉(Aspergillus clavatonanicus)。

关键词：红树内生真菌鉴定矮棒曲霉

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海洋细菌JMUAZ5琼胶酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性

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中国食品学报 2016年第1期16卷 61-68页

作者：赵蕊倪辉洪清林肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 绿麒(厦门)海洋生物科技有限公司福建厦门361021

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RN... 详细信息

【目的】分离海洋来源的琼胶酶产生菌,确定其分类地位,研究其所产琼胶酶粗酶的酶学性质及酶解产物的抗氧化活性,为琼胶酶的进一步开发应用提供理论依据。【方法】利用以琼胶为唯一碳源的筛选培养基筛选分离产琼胶酶的菌株;采用16S r RNA基因序列分析确定菌株的分类地位;研究菌株所产琼胶酶粗酶的酶学性质;通过测定酶解产物的还原能力和清除自由基ABTS·+的能力,分析酶解产物的抗氧化活性。【结果】分离到一株产胞外琼胶酶的菌株JMUAZ5,根据16S r RNA基因序列分析,该菌株归属于弧菌属(Vibrio sp.);菌株JMUAZ5琼胶酶粗酶具有良好的底物专一性;最适反应温度为40°C,在20°C和25°C条件下稳定;最适反应p H值为8.0,在p H 6.0~10.0范围内稳定;Ca^(2+)和Al^(3+)对酶活性具有强烈促进作用,而Zn^(2+)和Fe^(3+)对酶具有强烈抑制作用;琼胶酶粗酶对测试的抑制剂、去垢剂和变性剂均具有好的抗性;酶解产物琼胶低聚糖具有还原能力和清除ABTS·+的能力。【结论】海洋细菌弧菌属JMUAZ5可产胞外琼胶酶,酶解产物有一定的抗氧化活性,具有潜在应用价值。

关键词：弧菌属琼胶酶酶学性质抗氧化活性

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产微球茎菌琼胶酶基因的克隆及生物信息学分析

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集美大学学报（自然科学版） 2016年第4期21卷 261-268页

作者：高贺王新侠倪辉肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门市南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

以琼脂为唯一碳源的培养基分离出一株产琼胶酶的海洋菌株AG1,16S rRNA基因序列分析显示,该菌株为产微球茎菌(Microbulbifer sp.)。以菌株AG1的基因组为模板,使用琼胶酶特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p MD18-T载体后进行测序。... 详细信息

以琼脂为唯一碳源的培养基分离出一株产琼胶酶的海洋菌株AG1,16S rRNA基因序列分析显示,该菌株为产微球茎菌(Microbulbifer sp.)。以菌株AG1的基因组为模板,使用琼胶酶特异性引物进行PCR扩增,将扩增产物克隆至p MD18-T载体后进行测序。结果显示,克隆基因的大小为1302 bp,预测编码含有433个氨基酸残基的蛋白质。对该蛋白质进行生物信息学分析,结果表明,该蛋白质序列与来自耐热微泡菌(Microbulbifer thermotolerans)的琼胶酶氨基酸序列相似性为100%,预测本研究克隆的基因编码琼胶酶。该琼胶酶的理论分子质量大小为48.2 ku,理论等电点为5.42。采用同源建模法建立Microbulbifer ***1琼胶酶的三维结构,富含β-折叠。

关键词：产微球茎菌琼胶酶克隆生物信息学

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褐藻胶裂解酶发酵工艺优化及其中试放大

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集美大学学报（自然科学版） 2016年第3期21卷 184-190页

作者：陈艳红杨帆肖安风倪辉朱艳冰蔡慧农集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门市食品与生物工程技术研究中心福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021

对产微球茎菌(Microbulbifer sp.)ALW1发酵产褐藻胶裂解酶5 L罐发酵工艺进行优化,建立褐藻胶裂解酶的高产发酵工艺。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1 g/L时效果最好,浓度减半或加倍都会使酶活力下降;25℃比20℃更利于产酶;p H值控制在7.5... 详细信息

对产微球茎菌(Microbulbifer sp.)ALW1发酵产褐藻胶裂解酶5 L罐发酵工艺进行优化,建立褐藻胶裂解酶的高产发酵工艺。结果表明:海藻酸钠质量浓度为1 g/L时效果最好,浓度减半或加倍都会使酶活力下降;25℃比20℃更利于产酶;p H值控制在7.5时比自然条件下发酵产酶高峰提前,产酶量变化不大;在此基础上,对罐上工艺进行中试放大,20 L发酵罐酶活力最高为57.0 U/m L,200 L罐酶活力最高为43.5 U/m L,500 L罐酶活力最高为38.3 U/m L,分别是小试水平的39.6%、30.2%、26.5%。

关键词：产微球茎菌ALW1 褐藻胶裂解酶发酵工艺优化中试放大

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重组褐藻胶裂解酶酶解工艺的优化及产物分析

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集美大学学报（自然科学版） 2016年第5期21卷 338-344页

作者：王新侠乔超超倪辉肖安风蔡慧农朱艳冰集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室福建厦门361021 厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室福建厦门361021 厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

为探索假交替单胞菌(Pseudomonas syringae)重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的动态过程变化,采用DNS法和苯酚-硫酸法分别测定体系还原糖和总糖,根据二者比例,得出酶解产物随时间变化的平均聚合度,从而研究各因素对褐藻胶降解过程的影响,确... 详细信息

为探索假交替单胞菌(Pseudomonas syringae)重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的动态过程变化,采用DNS法和苯酚-硫酸法分别测定体系还原糖和总糖,根据二者比例,得出酶解产物随时间变化的平均聚合度,从而研究各因素对褐藻胶降解过程的影响,确定褐藻胶酶解工艺条件。结果表明,重组褐藻胶裂解酶降解褐藻胶的适宜工艺条件为:水解温度25℃,p H 7.5,初始底物质量浓度7 g/L,加酶量0.48 U,静置条件下酶解反应210 min。在此工艺条件下,产生的还原糖的质量浓度达0.878 g/L,平均聚合度为3。酶解终产物的质谱鉴定结果显示为单糖、二糖和四糖。

关键词：褐藻胶酶解工艺优化褐藻胶寡糖聚合度

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纤维素酶法破壁条件对雨生红球藻类胡萝卜素提取效果的影响

纤维素酶法破壁条件对雨生红球藻类胡萝卜素提取效果的影响

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中国食品科学技术学会第十三届年会

作者：黄莹王凯董丛丛倪辉杨远帆杜希萍集美大学食品与生物工程学院福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门市食品与生物工程技术研究中心厦门南方海洋研究中心海藻资源化利用与深加工重点实验室

为了评价纤维素酶法破壁在雨生红球藻类胡萝卜素提取中的应用价值,研究了酶浓度、酶反应pH、破壁温度和破壁时间4个因素对破壁后雨生红球藻类胡萝卜素提取的影响,并对破壁条件进行了优化。试验结果表明:酶浓度、酶反应pH、破壁温度和破... 详细信息

为了评价纤维素酶法破壁在雨生红球藻类胡萝卜素提取中的应用价值,研究了酶浓度、酶反应pH、破壁温度和破壁时间4个因素对破壁后雨生红球藻类胡萝卜素提取的影响,并对破壁条件进行了优化。试验结果表明:酶浓度、酶反应pH、破壁温度和破壁时间都会对雨生红球藻破壁提取类胡萝卜素产生显著影响,但以破壁温度及酶浓度对类胡萝卜素提取量影响最大。用正交试验法得到优化的纤维素酶法破壁雨生红球藻的条件为:酶浓度0.6mg/mL、酶反应pH 4.0、破壁温度50℃、破壁时间30 min,优化后提取物中总类胡萝卜素的含量为59.62±0.31mg/g DW,比优化前提高了25%。

关键词：雨生红球藻类胡萝卜素纤维素酶提取

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琼胶酶水解工艺条件的优化及产物分析

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中国食品学报 2015年第12期15卷 99-106页

为探讨琼胶酶水解琼胶的动态过程变化,采用DNS法测定还原糖,结合苯酚-硫酸法测定体系总糖,根据二者比例,得出体系总糖随时间变化的平均聚合度,从而得出各因素对琼胶水解过程的影响。结果表明,来源于厦门红树林的海洋弧菌JMUAZ6菌株产生... 详细信息

为探讨琼胶酶水解琼胶的动态过程变化,采用DNS法测定还原糖,结合苯酚-硫酸法测定体系总糖,根据二者比例,得出体系总糖随时间变化的平均聚合度,从而得出各因素对琼胶水解过程的影响。结果表明,来源于厦门红树林的海洋弧菌JMUAZ6菌株产生的琼胶酶,其水解琼胶的适宜工艺条件为:水解温度40℃,p H 7.0,初始底物质量浓度12 g/L,加酶量25%,在120 r/min振荡条件下酶解反应90 min。此工艺条件下产生还原糖的质量浓度2.179 g/L,平均聚合度最低值(DP)3。通过20 L罐放大试验验证小试优化工艺条件具有良好的重现性。采用薄层色谱分析酶解产物的降解情况,结果显示:反应48 h后,终产物为二糖及少量的四糖。

关键词：琼胶酶水解工艺优化聚合度琼胶寡糖

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一株产卡拉胶酶细菌的分离鉴定及其酶学性质

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微生物学报 2015年第2期55卷 140-148页

作者：许彩云朱艳冰倪辉蔡慧农李利君肖安风集美大学食品与生物工程学院福建厦门361021 福建省食品微生物与酶工程重点实验室厦门南方海洋研究中心经济海藻资源化利用与深加工重点实验室厦门市食品生物工程技术研究中心福建厦门361021

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶... 详细信息

【目的】从红树林土壤腐叶中分离出能够产生卡拉胶酶的菌株,对其进行鉴定,并研究其酶学性质。【方法】利用以卡拉胶为唯一碳源的培养基,分离出产卡拉胶酶的菌株;通过形态学观察、16S r DNA序列分析对其进行种属鉴定;对该菌株所产卡拉胶酶进行纯化并采用DNS测酶活的方法测定酶学性质。【结果】从红树林土壤腐叶中分离出1株高产κ-卡拉胶酶的菌株ASY5,经鉴定该菌株为假交替单胞菌属(Pseudoalteromonas ***5)。纯化得到的κ-卡拉胶酶的分子量约为30 k Da;酶学性质试验表明,其最适反应温度和p H分别为60℃和7.5,在50℃以下酶的稳定性较好,在p H 7.0-9.0范围内酶活力较稳定,对κ-卡拉胶具有良好的底物特异性,以κ-卡拉胶为底物时Km值和Vmax值分别为2.28 mg/m L和147.06μmol/(min·mg),Na+、K+、Ca2+、Mg2+、Al3+等对酶活有显著的促进作用,而Ag+、Zn2+、Cd2+及SDS对酶活有强烈的抑制作用。【结论】分离到的细菌假交替单胞菌Pseudoalteromonas ***5产生的κ-卡拉胶酶在较高的温度和碱性条件下均具有较高的酶活性,为利用卡拉胶水解酶产生卡拉寡糖的研究和应用奠定了基础。

关键词： κ-卡拉胶酶分离鉴定酶学性质

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