检索结果-内蒙古大学图书馆

空军军医大学学报 2022年第5期43卷 641-645页

作者：王煜彤侯诗源吕云华马瑞雪刘梓谕吴兴安刘蓉蓉空军军医大学基础医学院学员二大队陕西西安710032 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

外泌体是细胞外囊泡的一种,由细胞释放,存在于各种体液中。外泌体作为物质转运载体,积极参与细胞间的通讯,并反映了源细胞的特性。由于其独特的生物物理特性和生理功能,外泌体被认定为癌症诊断的生物标志物之一,也是潜在的治疗靶点和药... 详细信息

外泌体是细胞外囊泡的一种,由细胞释放,存在于各种体液中。外泌体作为物质转运载体,积极参与细胞间的通讯,并反映了源细胞的特性。由于其独特的生物物理特性和生理功能,外泌体被认定为癌症诊断的生物标志物之一,也是潜在的治疗靶点和药物递送载体。因此,外泌体的特性、功能及其分析方法越来越引起科学家的关注。本文总结了近年来关于外泌体的基本特征和功能应用的研究进展,重点介绍了近年来外泌体纯化和检测方法的最新进展。最后,提出了外泌体检测中存在的问题,展望了未来纯化和定量检测方法的机遇和挑战。

关键词：外泌体分离纯化外泌体检测方法

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结核分枝杆菌慢性感染小鼠模型的建立及其特征

结核分枝杆菌慢性感染小鼠模型的建立及其特征

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中国防痨协会2023年第34届全国学术大会暨结核病诊防治新技术推广应用论坛

作者：柏银兰宁唤唤康健路延之韩文东孙志平张琳娜高晓菁康亚莉空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室复旦大学医学院三级生物安全防护实验室宁夏医科大学基础医学院

结核病(tuberculosis,TB)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的、危害严重的慢性传染病。抗TB药物和疫苗研究均需要稳定、可靠的感染动物模型。大多数研究采用Mtb H37Rv毒株感染动物,但需要生物安全三级实验室的... 详细信息

结核病(tuberculosis,TB)是结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)感染引起的、危害严重的慢性传染病。抗TB药物和疫苗研究均需要稳定、可靠的感染动物模型。大多数研究采用Mtb H37Rv毒株感染动物,但需要生物安全三级实验室的实验条件,限制了模型的制备和使用。目的以慢速生长的Mtb标准毒株H37Rv和减毒株H37Ra经静脉感染24w建立小鼠慢性感染模型,比较不同菌株慢性感染小鼠模型诱导的免疫应答特点。方法分别以5×104CFU/只H37Rv、H37Ra经尾静脉注射感染BALB/c小鼠。感染24w后,分别检测Mtb感染诱导的特异抗原抗体水平、脾淋巴细胞Th1/Th2细胞因子分泌水平;制备病理切片观察脾、肺组织病理改变;平板计数法计脾、肺脏荷菌数CFUs。结果 2种Mtb菌株感染24w后,小鼠体重增长与正常对照组无差异;2组感染小鼠血清中Mtb及免疫优势抗原Ag85B特异性的抗体增加,且水平相当。感染24w后,感染小鼠脾细胞Th1/Th2细胞因子均增加,且H37Rv感染组高于H37Ra。感染组小鼠脾脏和肺脏均肿大,病理变化均为炎症性反应;平板计数法结果显示,H37Rv和H37Ra感染小鼠脏器荷菌数相当。结论成功建立了Mtb慢性感染小鼠模型,减毒株H37Ra感染小鼠后诱导的免疫应答水平及荷菌数与毒株H37Rv株相比均无显著差异,因此H37Ra慢性小鼠感染模型可用于抗TB疫苗和药物的初步评价研究。

关键词：结核分枝杆菌小鼠模型慢性感染

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PDL1融合蛋白抑制CD8^(+)T细胞过度活化对小鼠脑型疟的保护性作用

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热带医学杂志 2022年第3期22卷 322-326,338,447页

作者：王旭张宁宁沈燕赵晓庆梁姣王军空军军医大学基础医学院学员二大队陕西西安710032 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 西安电力医院心肾内科陕西西安710000

目的探讨免疫检查点程序性死亡受体-1(PD-1)/PDL1通路在脑型疟(CM)中的作用,研究人为强化CD8^(+)T细胞PD-1/PDL1通路对小鼠CM模型的保护性作用。方法建立小鼠实验型脑型疟(ECM)模型,对其脑组织切片进行HE染色和免疫荧光染色,评价ECM小... 详细信息

目的探讨免疫检查点程序性死亡受体-1(PD-1)/PDL1通路在脑型疟(CM)中的作用,研究人为强化CD8^(+)T细胞PD-1/PDL1通路对小鼠CM模型的保护性作用。方法建立小鼠实验型脑型疟(ECM)模型,对其脑组织切片进行HE染色和免疫荧光染色,评价ECM小鼠脑部病理变化;分离ECM小鼠脾脏CD8^(+)T细胞,流式细胞术检测其PD-1分子表达,评价脾脏CD8^(+)T细胞活化情况;对ECM小鼠脾脏CD8^(+)T细胞进行羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染色,评价其增殖情况;分离小鼠原代脑血管内皮细胞(BMECs),添加γ干扰素(IFN-γ)和感染疟原虫的红细胞活化BMECs,建立CD8^(+)T细胞-BMECs共孵育模型,模拟ECM小鼠脑部免疫微环境,使用乳酸脱氢酶(LDH)释放实验评价活化的脾脏CD8^(+)T细胞对BMECs的杀伤效果;利用CD8^(+)T细胞-BMECs共孵育模型和小鼠脑组织切片免疫荧光实验,检测BMECs、小胶质细胞、星形胶质细胞的PDL1表达情况;体外表达具有生物学活性的PDL1-IgG1Fc融合蛋白和IgG1Fc对照蛋白;使用PDL1-IgG1Fc融合蛋白干预ECM小鼠,通过记录小鼠存活时间、检测血清细胞因子含量、以及CD8^(+)T细胞-BMECs共孵育模型,评价PDL1-IgG1Fc融合蛋白降低CD8^(+)T细胞过度活化状态,降低脑型疟症状的作用。结果ECM小鼠脑部血脑屏障开放,CD8^(+)T细胞浸润至脑实质,且部分CD8^(+)T细胞与神经元存在“共定位”现象,ECM小鼠脾脏CD8^(+)T细胞PD-1表达水平上调,活化增殖程度升高;CD8^(+)T细胞-BMECs共孵育模型证实,活化的CD8^(+)T细胞可有效杀伤BMECs,导致BBB开放和中枢神经系统损伤;CD8^(+)T细胞-BMECs共孵育模型表明,脑部免疫微环境可诱导内皮细胞高表达PDL1分子,脑组织切片免疫荧光实验也证实ECM小鼠的小胶质细胞和星形胶质细胞高表达PDL1分子;与IgG1Fc对照蛋白相比,PDL1-IgG1Fc融合蛋白干预ECM小鼠,可抑制其CD8^(+)T细胞过度活化以及对BMECs的杀伤功能,缓解ECM小鼠体内过度炎症水平并显著降低ECM的发生率和死亡率。结论PD-1/PDL1信号通路在CM发病过程中发挥重要作用,PDL1-IgG1Fc融合蛋白可有效降低CD8^(+)T细胞的过度活化程度,对于维持宿主免疫平衡具有积极作用,是一个有前景的以过度活化的CD8^(+)T细胞为靶点的CM免疫辅助治疗手段。

关键词： PD-1/PDL1信号通路 PDL1融合蛋白脑型疟 CD8^(+)T细胞免疫病理损伤

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3种中药纳米乳剂对耳念珠菌深部感染小鼠的抗菌效果

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贵州医科大学学报 2024年第9期49卷 1269-1275页

作者：陈春屹余曦晨王迪廖万清罗罡康颖倩贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 上海市医学真菌分子生物学重点实验室上海200003 海军军医大学长征医院皮肤科上海200003

目的比较3种中药纳米乳剂对耳念珠菌感染小鼠深部感染的效果。方法取茶树精油(TTO)、艾纳香油(BBO)、余甘子、白芨、白茯苓、白芷及柠檬酸,采用高压均质法及超声波法制备中药纳米乳剂(简称纳米剂)1(TTO、BBO及水相全部药物组成)、纳米... 详细信息

目的比较3种中药纳米乳剂对耳念珠菌感染小鼠深部感染的效果。方法取茶树精油(TTO)、艾纳香油(BBO)、余甘子、白芨、白茯苓、白芷及柠檬酸,采用高压均质法及超声波法制备中药纳米乳剂(简称纳米剂)1(TTO、BBO及水相全部药物组成)、纳米剂2(油相仅有TTO、水相由全部药物组成)及纳米剂3(无油相、水相正常载药);取耳念珠菌CBS12766单克隆菌落制备耳念珠菌菌悬液,采用微量稀释法和平板涂布法检测3种中药纳米乳剂对耳念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)和最小杀菌浓度(MBC);40只BALB/c小鼠尾静脉注射5×10^(10) CFU/L菌悬液制作深部感染模型后均分为阳性对照组、异常行为1组、异常行为2组及异常行为3组,3种中药纳米乳化剂分别按照20μg/g剂量每天1次腹腔注射3 d,观察各组小鼠21 d内异常行为的发生情况;20只Balb/c小鼠随机分为阳性对照组、纳米剂1组、纳米剂2组、纳米剂3组尾静脉注射5×10^(10) CFU/L菌悬液造模,3种中药纳米乳化剂分别按照20μg/g剂量每天1次腹腔注射3 d,取肝、肾、心脏及脾脏匀浆检测载菌量、白细胞介素-6(IL-6)及IL-1β水平。结果3种中药纳米乳剂对耳念珠菌的MIC与MBC均具有体外抑菌作用;小鼠异常行为曲线表明,与阳性对照组相比,3种中药纳米乳剂能够缓解小鼠病理状态(P<0.05);与阳性对照组相比,纳米乳剂1~3组小鼠靶器官载菌量均降低(P<0.05);与纳米剂2、3组相比,纳米剂1组杀菌效果更好(P<0.05);与阳性对照组相比,小鼠靶器官促炎因子IL-6、IL-1β表达均下降(P<0.05);与纳米剂2、3组对比,纳米剂1促炎因子释放量显著下降(P<0.05)。结论3种中药纳米乳剂对耳念珠菌深部感染均具有较好的抗菌效果,且纳米剂1效果比2、3更好。

关键词：念珠菌属感染耳念珠菌中药纳米乳剂微量稀释法促炎因子最小抑菌浓度最小杀菌浓度

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脑型疟小鼠小胶质细胞的活化特征分析

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传染病信息 2021年第1期34卷 32-38页

作者：沈燕李英辉王军梁姣黄豫晓朱卿昊吴兴安赵亚空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032

目的利用血脑屏障分隔小胶质细胞与外周巨噬细胞,探讨小胶质细胞在实验型脑型疟(experimental cerebral malaria,ECM)发生中的活化特征。方法利用依文思兰渗出法确定ECM小鼠血脑屏障开放时间,在不同感染时间点,采用流式细胞技术和间接... 详细信息

目的利用血脑屏障分隔小胶质细胞与外周巨噬细胞,探讨小胶质细胞在实验型脑型疟(experimental cerebral malaria,ECM)发生中的活化特征。方法利用依文思兰渗出法确定ECM小鼠血脑屏障开放时间,在不同感染时间点,采用流式细胞技术和间接免疫荧光法检测小胶质细胞的活化特征,采用实时荧光定量PCR技术检测炎症和活化因子的变化。结果ECM小鼠血脑屏障显著开放始于感染后第6 d。感染后第5 d,脑内促炎因子、巨噬细胞活化相关因子的转录水平以及CD11b^(+)、CD45^(+)细胞的占比和数目均显著上调。CD11b^(+)细胞可根据CD45表达量分群,其中CD45^(high)亚群占比在感染后第5 d下调而第7 d上调。结论小胶质细胞参与ECM小鼠脑内炎症反应,且其活化与CD45表达量相关,CD11b^(+)CD45^(high)可作为活化小胶质细胞的标志物。

关键词：疟疾脑型疟实验型脑型疟小胶质细胞巨噬细胞巨噬细胞活化血脑屏障中枢神经系统

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噬菌体的过去、现在与未来

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西南医科大学学报 2021年第5期44卷 417-424页

作者：胡福泉陆军军医大学基础医学院微生物学教研室重庆400038

噬菌体是由FrederickTwort和Félix d’Hérelle分别在1915和1917发现的。作为感染细菌的病毒,噬菌体天然地具有抗细菌感染的应用前景。在抗生素耐药性日益严峻的今天,人类在抗感染的斗争中不能只有抗生素这一种武器,这已成为... 详细信息

噬菌体是由FrederickTwort和Félix d’Hérelle分别在1915和1917发现的。作为感染细菌的病毒,噬菌体天然地具有抗细菌感染的应用前景。在抗生素耐药性日益严峻的今天,人类在抗感染的斗争中不能只有抗生素这一种武器,这已成为全球共识。2016年,国家卫生计生委、发改委等14个部委联合印发了《遏制细菌耐药国家行动计划(2016-2020年)》,这个计划的实施还只是开局之战,破解细菌耐药性将是长期的战斗。在这一大背景下,噬菌体治疗(phagotherapy)作为抗细菌感染的手段再次引起了人们的高度关注。基于此,本文介绍了噬菌体的发现过程;噬菌体研究在推动科学进步上的历史贡献;噬菌体在疾病治疗中的应用;噬菌体在疾病诊断中的应用;噬菌体在疾病预防中的应用;噬菌体在农业领域的应用;噬菌体在工业及饮食卫生中的应用;噬菌体在生物高技术领域中的应用等相关内容。希望本文对于推动噬菌体教学、科学研究与未来应用中有所裨益。

关键词：噬菌体研究史噬菌体治疗抗感染

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纳米孔测序技术检测正常人群咽拭子微生物本底的初步分析

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微生物学免疫学进展 2022年第3期50卷 50-56页

作者：薛智丰王超董阳超段甜袁若栋雷迎峰岳昌武延安大学医学院免疫学教研室陕西延安716000 空军军医大学基础医学院病原生物学与微生物学教研室陕西西安710032 西安碳族起源生物信息技术有限公司陕西西安710077

目的分析咽拭子中存在多种少量的机会致病性微生物(即病原体本底),为测序数据提供初步分析结果。方法利用牛津纳米孔测序技术(oxford nanopore technologies)对12个健康人的咽拭子样本进行测序并分析微生物序列。结果咽拭子样本中主要... 详细信息

目的分析咽拭子中存在多种少量的机会致病性微生物(即病原体本底),为测序数据提供初步分析结果。方法利用牛津纳米孔测序技术(oxford nanopore technologies)对12个健康人的咽拭子样本进行测序并分析微生物序列。结果咽拭子样本中主要是常见的宿主共生菌群,具体为拟杆菌门(29.000%~55.000%)、变形菌门(12.000%~24.000%)、厚壁菌门(4.000%~7.000%)、梭杆菌门(2.000%~3.000%)和放线菌门(0.300%-1.000%)等。在拟杆菌门中,普雷沃菌(82.000%~93.000%)、黄杆菌(2.000%~9.000%);变形菌门中,γ-变形菌(61.000%~79.000%)、β-变形菌(5.000%~28.000%);厚壁菌门中,链球菌(35.000%~61.000%)、葡萄球菌(2.000%~7.000%)、韦荣球菌(17.000%~33.000%)、梭菌(2.000%~5.000%)、微单胞菌(0.6000%~1.000%);梭杆菌门中,梭杆菌(54.000%~84.000%)、纤毛菌(9.000%~25.000%);放线菌门中,放线菌(19.000%~47.000%)。最后,还在样本中检测出了少量的病毒,鉴定结果显示这些病毒主要是寄生在口腔中的细菌噬菌体。结论研究为临床宏基因组测序技术在呼吸道样本中病原体分析奠定了基础。

关键词：咽拭子纳米孔测序病原体本底数据

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抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原(Ag85B-ESAT-6)亚单位疫苗黏膜免疫对结核分枝杆菌的免疫应答

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第10期38卷 886-892页

作者：宁唤唤张芳琳康健王立飞路延之任瑞白鹭梁璇谢燕玲柏银兰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032 延安大学生命科学学院陕西延安716000 西北大学生命科学学院西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室陕西西安710069

目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T... 详细信息

目的评价抗原85B-6kDa早期分泌靶抗原融合蛋白(AE)亚单位疫苗经黏膜免疫小鼠诱导的免疫应答及其对结核分枝杆菌(MTB)感染的保护力。方法分别用AE、AE联合环二腺苷酸(c-di-AMP)亚单位疫苗经鼻黏膜免疫小鼠,ELISA检测抗体水平以及1型辅助T(Th1)细胞的细胞因子γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素2(IL-2)和Th2细胞的IL-10分泌水平,实时荧光定量PCR检测IFN-γ、IL-2、IL-10和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA水平。MTB静脉感染免疫小鼠,ELISA检测感染小鼠血清抗体及脾细胞细胞因子分泌水平,HE染色分析肺病理改变,平板法计数菌落形成单位(CFU)检测脾和肺荷菌数。结果AE和AE联合c-di-AMP经鼻黏膜免疫可诱导小鼠产生高水平的特异性抗体,促进脾细胞增殖、脾和肺脏Th1/Th2型细胞因子和TNF-α转录增加、脾Th1/Th2型细胞因子分泌增加。小鼠MTB感染后,与对照组相比,AE和AE联合c-di-AMP免疫小鼠特异性抗体水平仍升高,Th1/Th2型细胞免疫应答增强,肺组织呈炎症反应,肺、脾荷菌数显著降低,且AE联合c-di-AMP免疫小鼠肺、脾荷菌数进一步降低。结论AE亚单位疫苗经黏膜接种可诱导小鼠产生体液与细胞免疫应答,并提供对MTB感染的保护力;c-di-AMP为佐剂可在一定程度上提高AE的免疫原性。

关键词：结核分枝杆菌(MTB) 亚单位疫苗抗原85B(Ag85B) 6kDa早期分泌靶抗原(ESAT-6) 环二腺苷酸(c-di-AMP) 黏膜免疫

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pCDH-NLRX1慢病毒质粒的构建及NLRX1在A549细胞中稳定表达

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细胞与分子免疫学杂志 2020年第2期36卷 152-156页

作者：董宇航张晓晓王芳应旗康冯禹楠刘蓉蓉吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的构建核苷酸结合寡聚结构域样受体家族成员X1(NLRX1)慢病毒质粒以及能够稳定过表达NLRX1的细胞系。方法利用分子克隆方法从pCMV3-NLRX1质粒中克隆出NLRX1 cDNA全长片段,将全长的NLRX1片段插入pCDH-CMV-MCSEF1-Puro中得到过表达慢病... 详细信息

目的构建核苷酸结合寡聚结构域样受体家族成员X1(NLRX1)慢病毒质粒以及能够稳定过表达NLRX1的细胞系。方法利用分子克隆方法从pCMV3-NLRX1质粒中克隆出NLRX1 cDNA全长片段,将全长的NLRX1片段插入pCDH-CMV-MCSEF1-Puro中得到过表达慢病毒质粒pCDH-NLRX1;将pCDH-NLRX1与包装质粒pMD2和pAX2共转染HEK293T细胞后包装、浓缩得到慢病毒颗粒并感染A549细胞,进而利用嘌呤霉素对感染后的A549细胞进行筛选得到稳定过表达NLRX1的A549细胞系。利用实时定量PCR检测感染A549细胞中NLRX1的mRNA水平,Western blot法检测其蛋白水平,免疫荧光细胞化学法检测NLRX1的表达。结果成功构建pCDH-NLRX1质粒,pCDH-NLRX1与包装质粒共转染HEK293T细胞后,得到滴度约1×105转导单位(TU)/mL的慢病毒颗粒;包装成熟的pCDH-NLRX1慢病毒颗粒感染A549细胞后,利用嘌呤霉素对A549细胞进行筛选,得到NLRX1过表达稳转细胞系。感染的A549细胞中NLRX1表达明显,其mRNA水平和蛋白含量明显增加。结论成功构建了过表达NLRX1的慢病毒质粒并建立了NLRX1过表达的稳定感染细胞系。

关键词：固有免疫模式识别受体 NLR蛋白

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抗生物降解药渣中高效水解木质素的菌株筛选

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贵州医科大学学报 2025年第1期50卷 24-30页

作者：程敏王海洁黄劲赵亮王迪廖万清康颖倩贵州医科大学附属医院医院感染管理科贵州贵阳550004 贵州医科大学基础医学院微生物学教研室贵州贵阳550025 贵州省微生物与人类健康关系研究人才基地&贵州省普通高校病原生物学特色重点实验室贵州贵阳550025 贵州医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室贵州贵阳550025 海军军医大学长征医院皮肤科上海200003 上海市医学真菌分子生物学重点实验室上海200003

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果... 详细信息

目的从抗生物降解药渣中筛选对木质素水解能力强的真菌菌株。方法通过分离鉴定、纯培养及以木质素为唯一碳源液体发酵后测定木质素过氧化物酶(lignin peroxidase,LiP)与漆酶(laccase,Lac)酶活筛选堆放药渣中高效水解木质素的真菌。结果从药渣中分离出42株真菌,经过木质素碳源平板筛选进一步发现了8株水解效果较好的丝状真菌,其中ZYJHYZ246、ZYJHYZ257、ZYJHYZ280在平板上脱色效果最明显;将以上8株真菌进行分子鉴定及LiP及Lac酶活检测发现多数菌株在发酵第5~7天时达峰值,其中阳性对照NDM3-2在第7天时产LiP酶最高,为223.59 U/L,其次是ZYJHYZ268,生长第3天时达峰值(176.85 U/L);Lac酶活结果表明,ZYJHYZ268是产酶最高的一株菌,在第5天时达到250.83 U/L,是阳性对照最高产酶时期的1.8倍。结论筛选出的ZYJHYZ268经鉴定为Piloderma sp.,其能产较高水平LiP与Lac,具有良好的水解木质素的能力,为降解木质素菌株提供了更多选择。

关键词：木质素中草药渣丝状真菌水解酶活

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