检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2003年第4期19卷 278-280页

作者：王宏伟陈政良左大明张丽芸第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的　克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素 A(MBL A)基因的全长编码区cDNA。方法　利用RT PCR方法 ,从Balb c小鼠的肝细胞中 ,分离出MBL A基因cDNA片段 ,克隆入pUC T载体 ,测序并进行分析。结果　扩增得到的小鼠MBL A基因cDNA全长 72 0bp ,编... 详细信息

目的　克隆小鼠甘露聚糖结合凝集素 A(MBL A)基因的全长编码区cDNA。方法　利用RT PCR方法 ,从Balb c小鼠的肝细胞中 ,分离出MBL A基因cDNA片段 ,克隆入pUC T载体 ,测序并进行分析。结果　扩增得到的小鼠MBL A基因cDNA全长 72 0bp ,编码 2 4 0个氨基酸残基 ,包含了完整的富含半胱氨酸区、胶原区、颈区和糖识别域。分析表明 ,与Genbank中发表的序列具有 99.9%的同源性。结论　获得小鼠MBL A基因的克隆 ,为进一步研究MBL

关键词：小鼠 MBL-A基因克隆序列分析 RT-PCR 氨基酸胶原区

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CGT52TGT和GGA57GAA甘露聚糖结合凝集素突变体的构建

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免疫学杂志 2003年第5期19卷 391-393页

作者：张丽芸陈政良王宏伟第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和... 详细信息

目的构建CCT52TGT和GGA57GAA 2种甘露聚糖结合凝集素(MBL)基因突变体。方法设计2对引物52F/52R和57F/57R(R中引入了点突变),以含汉族人野生型MBL cDNA的重组质粒pGEM-mbl为模板,采用TaKaRa MutanBEST突变试剂盒进行定点突变,以PCR和测序分析进行鉴定。结果分别用52F/52R和57F/57R为引物对进行PCR,均得到1个约3800 bp的DNA片段,自身连接后获得重组质粒。以SP6/T7P为引物对进行PCR,获得约900 bp的扩增产物。序列分析表明,2种克隆分别除其第52、57位密码变为TGT、GAA外,其余与野生型MBL cDNA完全相同。结论构建成功CGT52TGT和GGA57GAA MBL基因突变体,为深入探索MBL基因突变引起调理吞噬缺损的机理和MBL分子的结构-功能关系提供了分子模型。

关键词：甘露聚糖结合凝集素 CGT52TGT突变体 GGA57GAA突变体定点突变

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人Toll-like receptor 2胞外段的克隆和表达

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免疫学杂志 2003年第5期19卷 332-335页

作者：刘艳君朱平韩强涛富宁第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的克隆、表达人Toll-like receptor2(TLR2)胞外段(A26-T588)基因,获得人TLR2胞外段蛋白。方法 RT-PCR扩增TLR2胞外段基因,以pcDNA3.1+质粒为载体在HEK293细胞中表达TLR2胞外段蛋白,同时以pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)重组质粒免疫昆明鼠,制备抗TLR2胞外段蛋白多抗。结果 PCR扩增及重组质粒测序结果表明成功地构建了pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒,SDS-PAGE分析纯化产物在M_r为68000处出现明显蛋白条带。重组质粒DNA免疫小鼠3次后,血清抗体滴度可达1∶250。TLR2胞外段蛋白可与LPS结合,并在一定的质量浓度范围内呈剂量依赖性。结论构建的pcDNA3.1+/TLR2(A26-T588)真核表达质粒可在哺乳动物细胞中表达TLR2胞外段蛋白,并与重组质粒DNA免疫小鼠抗血清及TLR2单克隆抗体TL2.1特异性反应,由此证明其表达正确。

关键词： Toll-like receptor 2 胞外段蛋白多克隆抗体

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Balb/c小鼠甘露聚糖结合凝集素-C基因的克隆与鉴定

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第一军医大学学报 2003年第3期23卷 236-238,241页

作者：王宏伟陈政良左大明卢晓余新沛第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Bal... 详细信息

目的获得小鼠甘露聚糖结合凝集素-C(MBL-C)基因的全长编码区cDNA。方法利用RT-PCR方法,从Balb/c小鼠的肝细胞中分离出MBL-C基因cDNA片段,将其克隆入pUC-T载体并测序,对基因结构及其与人MBL基因的同源性进行比较分析。结果扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因cDNA全长735 bp,编码245个氨基酸残基,包含了完整的编码区基因序列。经核苷酸序列比较分析发现,扩增得到的Balb/c小鼠MBL-C基因与Genbank中发表的序列具有100%的同源性,与人的MBL基因的同源性为71.4%。结论成功地克隆到完整的Balb/c小鼠MBL-C编码区基因,为进一步在整体水平研究MBL分子的天然免疫功能提供了必要的条件。

关键词：甘露糖结合凝集素-C RT-PCR cDNA克隆小鼠

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骨肉瘤细胞特异性结合短肽的筛选

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第一军医大学学报 2003年第1期23卷 12-15页

作者：朱国鸿刘北一郑山根吕海史占军第一军医大学南方医院脊柱骨病科广东广州510515 第一军医大学免疫教研室广东广州510515

目的获得与骨肉瘤细胞株os-732特异结合的短肽,作为骨肉瘤靶向治疗的先导化合物。方法以骨肉瘤细胞os-732为靶细胞,成骨细胞为吸附细胞对噬菌体12肽库进行差减筛选,用细胞ELISA、免疫组化鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果经三轮筛选,从... 详细信息

目的获得与骨肉瘤细胞株os-732特异结合的短肽,作为骨肉瘤靶向治疗的先导化合物。方法以骨肉瘤细胞os-732为靶细胞,成骨细胞为吸附细胞对噬菌体12肽库进行差减筛选,用细胞ELISA、免疫组化鉴定阳性噬菌体克隆并测序。结果经三轮筛选,从随机挑选的20个噬菌体克隆中得到9个能特异性与骨肉瘤细胞os-732结合,而不与正常成骨细胞结合的阳性克隆。但其氨基酸序列无同源性。结论得到多个序列不同的特异性结合骨肉瘤的噬菌体克隆,提示骨肉瘤细胞表面结构复杂,具多个骨肉瘤抗原表位。本实验获得的短肽具有一定的亲合力和肿瘤特异性,为针对不同位点的靶向药物设计提供了实验依据。

关键词：骨肉瘤细胞特异性结合短肽筛选

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淋巴细胞识别与激活的双信号理论

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免疫学杂志 2003年第3期19卷 236-238,241页

作者：陈政良朱锡华第一军医大学免疫学教研室广东广州510515 第三军医大学免疫学教研室重庆400038

淋巴细胞的识别与激活是免疫应答的核心问题。自 1 96 0年代以来 ,已提出多种双信号理论 ,其共同点是认为除了抗原信号 (信号 1 )外还需其它信号刺激 (信号 2 )才能激活淋巴细胞 ,但所涉及的信号 2不同 ,以致对淋巴细胞识别与激活机制... 详细信息

淋巴细胞的识别与激活是免疫应答的核心问题。自 1 96 0年代以来 ,已提出多种双信号理论 ,其共同点是认为除了抗原信号 (信号 1 )外还需其它信号刺激 (信号 2 )才能激活淋巴细胞 ,但所涉及的信号 2不同 ,以致对淋巴细胞识别与激活机制迄今一知半解。未来的挑战是采用定量的研究方法 ,建立整合的信号理论 ,以彻底揭示这一奥秘。

关键词：淋巴细胞识别激活双信号理论

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肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

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中华结核和呼吸杂志 2003年第2期26卷 88-92页

作者：刘爱华邓鹏姜勇第一军医大学南方医院呼吸科广州510515 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedprotei... 详细信息

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedproteinkinasekinase 6 ,MKK6 )及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒 ;使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果　TNF α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活 ;用TNF α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡 ;MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡 ;而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF α诱导的LA795细胞凋亡。结论　TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的。

关键词：肿瘤坏死因子α 丝裂原活化蛋白激酶肺腺癌细胞凋亡

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广东地区汉族人MBL基因启动子区SNP的研究

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1165-1168页

作者：吕成伟陈政良刁志宏王方勇第一军医大学免疫学教研室广东广州510515 广州军区广州总医院检验科广东广州510010

目的研究广东汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL) 基因启动子单核苷酸多态性(SNP) 。方法抽提人外周血白细胞基因组DNA,建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术,检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G/C,称H/L等位基因) 、-220(G/C,X/Y等位基... 详细信息

目的研究广东汉族人群甘露聚糖结合凝集素(MBL) 基因启动子单核苷酸多态性(SNP) 。方法抽提人外周血白细胞基因组DNA,建立SSP-PCR及分子灯塔实时荧光PCR技术,检测MBL基因启动子区SNP位点-550(G/C,称H/L等位基因) 、-220(G/C,X/Y等位基因) 和+4(C/T,P/Q等位基因),分析其单倍型及基因型频率。结果从167人中检出等位基因型LYP/LYP 10例(5.9%)、HYP/LYQ 7例(4.2%)、LYP/LYQ 94例(56.3%)、LXP/LXP 6例(3.6%)、LYQ/LYQ 4例(2.4%)、LXP/LYQ 29例(17.4%)、HYP/LYP 3例(1.8%)、HYP/LXP 2例(1.2%)、HYP/HYP 12例(7.2%)。结论广东地区汉族人群MBL基因启动子区SNP等位基因型以LYP/LYQ和LXP/LYQ为主。

关键词：广东地区汉族 MBL 基因启动子区 SNP 甘露聚糖结合凝集素

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HIV-1gp41核心结构模拟位的筛选与鉴定

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中国免疫学杂志 2003年第7期19卷 461-463,472页

作者：刘北一罗海波朱平姜世勃富宁第一军医大学基础部免疫教研室广州510515 纽约血液中心LFK研究所纽约美国10021

目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 ... 详细信息

目的 :筛选并鉴定HIV 1gp4 1核心表位。方法 :用识别HIV 1gp4 1的构象特异性单克隆抗体NC 1筛选噬菌体12肽库 ,通过夹心ELISA、NC 1特异性阻断实验、竞争抑制实验鉴定阳性噬菌体克隆 ,DNA序列分析阳性克隆。结果 :经 3轮筛选 ,随机挑取 2 4个噬菌体克隆 ,ELISA鉴定表明有 10个克隆可与NC 1结合 ,DNA序列分析并推导氨基酸序列 ,共 5种序列 :HDVHHRWVYLLS、ITVNEWLYTSEQ、HGRSHGMFKPKR、MGPIARPHWHLN、DMYRSPRPKPDT。其中gp4 1N肽和C肽所形成的复合物可特异性阻断表达HDVHHRWVYLLS ,VNEWLYTSEQ和MGPIARPHWHLN的克隆与NC 1的结合。结论 :所得序列HDVHHR WVYLLS ,VNEWLYTSEQ及MGPIARPHWHLN模拟HIV 1gp4 1六螺旋束核心表位。

关键词： HIV-1gp41 核心结构模拟位筛选鉴定

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 168-172页

作者：莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1c... 详细信息

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗。

关键词：信号传导分子蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白原核表达制备 GST-AWP1融合蛋白多克隆抗体

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