检索结果-内蒙古大学图书馆

中国现代医学杂志 2005年第20期15卷 3061-3064页

作者：何才姑朴英杰郑文岭胡莲美秦建强第一军医大学组胚教研室广州军区肿瘤分子生物学研究所广东广州510010

目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pESC-URA-EGFP-hAPG12,将构建好的载体转化到酵母菌内,以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP-hAPG12融合基因,鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌-酿酒... 详细信息

目的该研究旨在构建大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pESC-URA-EGFP-hAPG12,将构建好的载体转化到酵母菌内,以此研究hAPG12在酵母自噬过程中的作用。方法从pEGFP-C2-hAPG12中扩增出EGFP-hAPG12融合基因,鉴定正确后定向亚克隆到大肠杆菌-酿酒酵母穿梭载体pESC-URA中,构建载体pESC-URA-EGFP-hAPG12并将其转化到酵母,荧光显微镜下观察,用自噬诱导剂诱导酵母自噬以观察hAPG12在酵母内的表达定位。结果证实EGFP-hAPG12基因已完全正确亚克隆到pESC-URA中,荧光显微镜观察结果证明EGFP-hAPG12融合蛋白在酵母中成功表达,以诱导培养24h的荧光最强,EGFP-hAPG12定位于酵母的自噬体中。结论成功构建了具有报告基因的重组真核表达载体pESC-URA-EGFP-hAPG12;EGFP-hAPG12融合蛋白在酵母中得到表达,hAPG12在酵母自噬体形成过程中起作用。

关键词：穿梭栽体自噬体44k EGFP基因:hAPG12

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钙离子载体在诱导人外周血单核细胞分化为树突状细胞中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第1期25卷 39-43页

作者：吴军王晓怀杨德懋杨太成王捷陈政良富宁广州军区广州总医院干部内五科 510010 广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所第一军医大学免疫教研室

目的　研究钙离子载体 (CI)能否诱导人外周血单核细胞 (PBMC)分化为树突状细胞(DC) ,并初步探讨其信号转导途径。方法　分离健康献血者的PBMC ,在体外用CI(A2 31 87)或人重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和CI培养 4 0h ,或rh... 详细信息

目的　研究钙离子载体 (CI)能否诱导人外周血单核细胞 (PBMC)分化为树突状细胞(DC) ,并初步探讨其信号转导途径。方法　分离健康献血者的PBMC ,在体外用CI(A2 31 87)或人重组粒细胞巨噬细胞集落刺激因子 (rhGM CSF)和CI培养 4 0h ,或rhGM CSF和白细胞介素 4 (IL 4 )培养 7d ,部分PBMC预先用W 7或CsA或KT5 92 6处理 30min后 ,再加入上述细胞因子或CI。相差显微镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测细胞表面CD1 4、CD80、CD86、CD83等分子的表达 ,MTT比色法检测其对同种异体混合T淋巴细胞的刺激增殖作用。结果　健康献血者的PBMC经CI培养 4 0h ,或rhGM CSF与CI培养 4 0h ,或rhGM CSF与IL 4培养 7d ,均可获得DC的典型形态和表面分子的表达 ,包括CD1 4表达下调、共刺激分子 (CD80、CD86 )表达上调 ,以及较强刺激同种异体混合T淋巴细胞增殖的作用 ;CI诱导的DC其CD1 4分子的下调及CD83分子的上调更明显 ,刺激混合T淋巴细胞的增殖能力更强 ;rhGM CSF可协同CI诱导PBMC向DC的分化。经rhGM CSF及CI处理的PBMC ,其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力 ,均受到W 7或CsA或KT5 92 6不同程度的抑制 ;而rhGM CSF及IL 4所诱导的PBMC其形态、表面分子的表达以及刺激T细胞增殖的作用却不受上述抑制剂的影响。

关键词： PBMC rhGM-CSF 诱导表达 GM—CSF 人外周血单核细胞 CD14 分化细胞信号转导途径增殖能力

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钙离子载体体外诱导外周血造血干细胞定向分化为成熟树突状细胞的研究

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免疫学杂志 2005年第1期21卷 44-46页

作者：吴军王晓怀杨德懋杨太成王捷陈政良广州军区广州总医院干部内五科广州510010 广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所广州510010 第一军医大学免疫学教研室广州510515

目的　以实体瘤患者外周血造血干细胞为来源 ,探讨体外诱导更成熟、功能更强的树突状细胞 (DC)的方法。方法　以血细胞分离机分离经动员的外周血造血干细胞 (PBSC) ,加入rhGM CSF、rhIL 4和rhTNF α培养 9d后分两组 ,其中一组洗去含细... 详细信息

目的　以实体瘤患者外周血造血干细胞为来源 ,探讨体外诱导更成熟、功能更强的树突状细胞 (DC)的方法。方法　以血细胞分离机分离经动员的外周血造血干细胞 (PBSC) ,加入rhGM CSF、rhIL 4和rhTNF α培养 9d后分两组 ,其中一组洗去含细胞因子的培养液 ,并给予钙离子载体 (CI)A2 3187处理 2 4h ,而另一组仍维持原培养液培养 2 4h ;对所获得的两组细胞分别进行细胞形态学、细胞表面抗原及刺激同种异体混合淋巴细胞反应 (allo MLR)能力的分析。结果　两组细胞在倒置显微镜和扫描电镜下均显示典型的树突状细胞形态 ,流式细胞仪分析均高表达CD1α、HLA DR、CD80和CD4 0分子 ;但给予A2 3187进一步处理 2 4h的细胞比无A2 3187处理的细胞表达更丰富的CD86和CD83分子及具有更强的刺激allo MLR的能力。结论　组合细胞因子培养获得的PBSC来源的DC ,经CI进一步诱导后可获得更成熟及功能更强的DC。

关键词：钙离子载体体外诱导外周血造血干细胞定向分化树突状细胞实体瘤

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宫颈癌组织中HPV16E6序列多态性及同源性分析

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肿瘤防治杂志 2005年第13期12卷 985-988页

作者：刘国炳刘欣庞战军邢福祺郭遂群马文丽张宝南方医科大学南方医院妇产科广东广州510515 第一军医大学分子生物学教研室广东广州510515

目的:探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6基因序列的多态性及同源性.方法: 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E6,经DNA序列测定法检... 详细信息

目的:探讨广东地区宫颈癌组织中HPV16肿瘤相关性抗原E6基因序列的多态性及同源性.方法: 采用通用引物PCR直接测序法对宫颈癌标本中的HPV分型,从含有HPV16型的标本中采用自行设计的多重引物通过巢式PCR扩增出HPV16E6,经DNA序列测定法检测其基因变异,进而分析其同源性.结果: 50例宫颈癌组织HPV-DNA的检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染18例,单纯HPV16型感染15例.含有HPV16型的标本34例中扩增出HPV16E6 25例.其中178位核苷酸变异较大,变异率为72%,其相应氨基酸均由天冬氨酸变为谷氨酸.结论: HPV16E6 DNA序列发生碱基替换的区域主要在氨基端94～241位,羧基端相对保守,未见变异.广东地区宫颈癌组织中HPV16E6的热点突变为Nt178.

关键词：宫颈肿瘤乳头状瘤病毒,人/遗传学 DNA,病毒/分析

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钙离子载体诱导人外周血单个核细胞向树突状细胞分化的信号转导

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 540-543页

作者：吴军杨德懋杨太成王晓怀王捷陈政良富宁广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所广东广州510010 第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的 :初步探讨钙离子载体 (calciumionophore,CI)诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)向树突状细胞 (DC)分化的细胞信号转导途径。方法 :分离健康献血者的PBMC ,加入rhGM CSF及A2 3187各 10 0 μg/L ,部分细胞预先用W 7(10 μmol/L)或CsA(0 ... 详细信息

目的 :初步探讨钙离子载体 (calciumionophore,CI)诱导人外周血单个核细胞 (PBMC)向树突状细胞 (DC)分化的细胞信号转导途径。方法 :分离健康献血者的PBMC ,加入rhGM CSF及A2 3187各 10 0 μg/L ,部分细胞预先用W 7(10 μmol/L)或CsA(0 .5mg/L)或KT5 92 6 (1μmol/L)处理 30min后 ,再加入rhGM CSF及A2 3187各 10 0 μg/L。体外培养 4 0h后 ,于相差显微镜下观察细胞的形态 ;流式细胞仪检测细胞的表面标志 ;用MTT比色法检测上述细胞刺激同种异体T细胞的增殖作用。结果 :与 10 0 μg/L的A2 3187及rhGM CSF共同培养 4 0h的健康献血者的PBMC ,出现典型的树突状突起 ,同时CD83、CD80及CD86分子的表达上调 ,CD14分子的表达下调 ,刺激同种异体T细胞增殖的能力增强 ;而预先用W 7或CsA或KT5 92 6处理 30min后、再给予rhGM CSF及A2 3187处理的PBMC ,其形态、表面标志物及对T细胞的刺激增殖能力 ,均不同程度的受到抑制。结论 :CI诱导的PBMC向DC的分化 ,可能受控于Ca2 +

关键词：钙离子载体树突状细胞细胞信号转导外周血单个核细胞

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钙离子载体诱导HL-60细胞分化成树突状细胞的实验研究

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细胞与分子免疫学杂志 2004年第4期20卷 415-418页

作者：吴军杨太成冼江王捷陈政良富宁广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所广东广州510010 第一军医大学免疫学教研室广东广州510515

目的 :探讨一种钙离子载体 (calciumionophore,CI)A2 3187,能否诱导早幼粒白血病细胞株HL 6 0分化成具有活性的树突状细胞 (dendriticcells,DCs)。方法 :将生长状态良好的HL 6 0细胞分别加在普通培养液中 ,或在含不同浓度 (2 5～ 16 0 0... 详细信息

目的 :探讨一种钙离子载体 (calciumionophore,CI)A2 3187,能否诱导早幼粒白血病细胞株HL 6 0分化成具有活性的树突状细胞 (dendriticcells,DCs)。方法 :将生长状态良好的HL 6 0细胞分别加在普通培养液中 ,或在含不同浓度 (2 5～ 16 0 0 μg/L)的A2 3187及 10 0 μg/L重组人粒 /单集落刺激因子 (rhGM CSF)的普通培养液中培养。 2 4～ 96h后 ,在光镜及电镜下观察细胞的形态 ;用流式细胞仪检测细胞的表面标志 ,MTT比色法检测其刺激同种异体T细胞增殖的作用。结果 :HL 6 0细胞以适量 (2 0 0 μg/L)的A2 3187诱导 2 4h ,DC的特征性表面标志CD83分子的表达最高 ,72h可出现典型的树突状突起 ,96h细胞表面CD80 (B7.1)、CD86 (B7.2 )、MHC II分子及细胞间黏附分子CD5 4的表达最高 ,且能明显激活同种异体T细胞。结论 :钙离子载体A2 3187可将HL 6 0细胞诱导成具有活性的DC样细胞。

关键词：钙离子载体树突状细胞早幼粒白血病细胞株

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广东汉族人纤溶酶原激活剂抑制物-1基因4G/5G多态性与2型糖尿病肾病的相关性

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第一军医大学学报 2004年第8期24卷 904-907页

作者：刘仕群薛耀明杨光彩何飞英赵小山第一军医大学南方医院内分泌科广东广州510515 第一军医大学生物化学与分子生物学教研室广东广州510515 第一军医大学南方医院中医科广东广州510515

目的探讨纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)基因4G/5G多态性与广东汉族人2型糖尿病肾病(DN)发病的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析,对147例病史7年以上的2型糖尿病患者[其中DN患者77例,糖尿病非肾病(DNN)患者70例]和2... 详细信息

目的探讨纤溶酶原激活剂抑制物-1(PAI-1)基因4G/5G多态性与广东汉族人2型糖尿病肾病(DN)发病的关系.方法采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析,对147例病史7年以上的2型糖尿病患者[其中DN患者77例,糖尿病非肾病(DNN)患者70例]和26名健康人进行了PAI-1基因4G/5G多态性分析.结果DNN组PAI-1基因的4G/4G基因型、基因频率显著高于DN组(x2=13.008,P＜0.01);与5G/5G基因型相比,DNN组PAI-1基因4G/4G型对DN组的比数比为1.447,95%的可信区间:0.533～3.934(P＜0.05),差异有显著性.而DN与DNN组PAI-1基因4G等位基因频率无显著差异(x2=1.22,P＞0.05);结论PAI-1基因4G/4G基因型与广东汉族人2型DN的发病有关联,4G/4G基因型广东汉族2型糖尿病人易发生DN.

关键词：纤溶酶原激活剂抑制物-1 基因型等位基因频率遗传多态性 2型糖尿病肾病

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重组生长激素释放激素GHRH的纯化及活性测定

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第一军医大学学报 2004年第3期24卷 321-324页

作者：王晓华张娜张娟辉邓虹珠广州医学院生物化学与分子生物学教研室广东广州510182 广州武警医院妇产科广东广州510507 第一军医大学中医系广东广州510515

目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达重组生长激素释放激素(GHRH),检测其生物学活性。方法将重组表达质粒pET-28a /L-ansB-GHRH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达。经裂解细胞、洗涤、乙醇沉淀、酸水解、SP-Sephadex C... 详细信息

目的用基因工程的方法在大肠杆菌中诱导表达重组生长激素释放激素(GHRH),检测其生物学活性。方法将重组表达质粒pET-28a /L-ansB-GHRH,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导融合蛋白表达。经裂解细胞、洗涤、乙醇沉淀、酸水解、SP-Sephadex C-25和Sephadex G25柱层析等方法纯化GHRH。用人生长激素放免试剂盒检测GHRH多肽的活性。结果SDS-PAGE分析显示重组表达质粒在大肠杆菌中成功地表达了融合蛋白,它以不溶性的包涵体形式存在,占菌体总蛋白的30%左右。经抽提、酸水解、层析等方法表明纯化倍数达147倍,多肽收率为0.68%。通过电喷雾质谱测得多肽的相对分子质量为5235.25,与理论计算值相吻合。多肽的纯度经SDS-PAGE测定为单一峰。GHRH三组刺激实验组与空白对照组相比之间差异显著(P<0.01),且随着剂量增加,差异明显增加。结论体外重组GHRH多肽具有较高的生物学活性。

关键词：重组生长激素释放激素 GHRH 纯化活性测定融合蛋白包涵体

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自体造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病的进展

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广东医学 2004年第8期25卷 990-992页

作者：吴军杨德懋王晓怀陈政良广州军区广州总医院干部内五科广州510010 广州军区肿瘤分子生物学研究所广州510010 第一军医大学免疫学教研室广州510515

人类自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)是一组临床常见病,包括系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)、类风湿性关节炎(RA)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)等40余种疾病.本组疾病病因未明,可能与遗传、慢病毒感染、环境因素、药物... 详细信息

人类自身免疫性疾病(autoimmune diseases,AID)是一组临床常见病,包括系统性红斑狼疮(SLE)、多发性硬化(MS)、类风湿性关节炎(RA)、特发性血小板减少性紫癜(ITP)等40余种疾病.本组疾病病因未明,可能与遗传、慢病毒感染、环境因素、药物、内分泌影响等有关[1],但基本上是由自身抗体和免疫复合物介导而致病的.

关键词：自体造血干细胞移植治疗自身免疫性疾病预处理方案

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A23187诱导慢性髓性白血病患者外周血单核细胞转化为树突状细胞的实验研究

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广东医学 2004年第9期25卷 1021-1023页

作者：吴军杨太成王晓怀王捷陈政良富宁广州军区广州总医院干部内五科广州510010 广州军区广州总医院肿瘤分子生物学研究所广州510010 第一军医大学免疫学教研室广州510515

目的　探讨钙离子载体A2 3187在体外能否诱导慢性髓性白血病 (CML)患者的外周血单核细胞 (pe ripheralbloodmonocytes,PBMC)向树突状细胞 (dendriticcells,DC)分化及细胞分化后的免疫活性研究。方法　分离初诊CML患者的PBMC ,用含rhGM -... 详细信息

目的　探讨钙离子载体A2 3187在体外能否诱导慢性髓性白血病 (CML)患者的外周血单核细胞 (pe ripheralbloodmonocytes,PBMC)向树突状细胞 (dendriticcells,DC)分化及细胞分化后的免疫活性研究。方法　分离初诊CML患者的PBMC ,用含rhGM -CSF和 (或 )A2 3187的培养液培养 4 0h ;高倍显微镜下观察细胞形态 ,流式细胞仪检测诱导前后细胞表面HLA -DR ,CD80 ,CD86和CD83分子的表达 ,MTT比色法检测其对混合T淋巴细胞的刺激增殖作用 ,ELISA试剂盒检测上述方法培养的细胞刺激T淋巴细胞前后 ,上清液中IL - 2及γ -INF水平的变化。结果　CML患者的PBMC经A2 3187联合rhGM -CSF共同培养 4 0h ,具有典型的树突状突起 ,高表达HLA -DR ,CD80 ,CD86和CD83分子 ,具有较强刺激混合T淋巴细胞增殖的能力 ,刺激前后的T淋巴细胞培养液上清中 ,IL - 2及γ -INF的水平有明显差别。结论　体外利用A2 3187联合rhGM -CSF在 4 0h内 ,可将CML患者的PBMC诱导成成熟的DC。

关键词： A23187 慢性髓性白血病外周血单核细胞树突状细胞实验

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