检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2003年第4期20卷 345-347页

作者：李莉艳莫秋华徐湘民第一军医大学医学遗传学研究室广州510515

目的　建立一种简便快速筛查非缺失型α-地中海贫血点突变的反向点杂交 (reverse dotblot,RDB)技术。方法　将生物素直接标记在引物上 ,选择性扩增人α2珠蛋白基因 ,将 PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交 ,洗膜、显色后分析结果... 详细信息

目的　建立一种简便快速筛查非缺失型α-地中海贫血点突变的反向点杂交 (reverse dotblot,RDB)技术。方法　将生物素直接标记在引物上 ,选择性扩增人α2珠蛋白基因 ,将 PCR产物与固化在膜条上的寡核苷酸探针杂交 ,洗膜、显色后分析结果。结果　采用生物素标记的引物 Bio- C1和 Bio- C3可选择性扩增α2珠蛋白基因 ,PCR产物长度为 10 85 bp,该标记片段与固相探针构成的反向点杂交检测体系 ,可以分辨出中国人群中已知的 6种非缺失型α-地中海贫血点突变。结论　该反向点杂交检测体系无需巢式 PCR扩增 ,一步选择性扩增的α2珠蛋白基因产物即可用于杂交 ;无需进行检测标记物 (如生物素 )反应 ,而将生物素直接标记在引物上 ;无需不同的洗膜条件 ,故较已报道的同类方法更为简单易行。RDB技术可用于快速诊断中国人非缺失型α-地中海贫血点突变。

关键词：反向点杂交非缺失型α-地中海贫血诊断基因诊断

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毛细管等电聚焦电泳定量分析健康成人及地中海贫血携带者的HbA_2

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中华医学遗传学杂志 2003年第5期20卷 421-424页

作者：华亮李坚刘忠英钟惠珠廖灿徐湘民第一军医大学医学遗传学教研室广州510515 广州市妇婴医院

目的　对等电聚焦毛细管电泳 (capillary isoelectric focusing,CIEF)检测血红蛋白 A2 (HbA2 )含量做出用于筛查地中海贫血 (地贫 )携带者的方法学评价。方法　收集 10 5名健康成人、93例经常规地贫筛查有阳性表型的连续临床样品。通过... 详细信息

目的　对等电聚焦毛细管电泳 (capillary isoelectric focusing,CIEF)检测血红蛋白 A2 (HbA2 )含量做出用于筛查地中海贫血 (地贫 )携带者的方法学评价。方法　收集 10 5名健康成人、93例经常规地贫筛查有阳性表型的连续临床样品。通过正常人样品分析比较 CIEF测定 Hb A2 与 Helena Spife combo电泳系统结果的一致性 ;通过比较样品内和样品间 Hb A2 的 CIEF测定值的变异系数评价该法的精确度和稳定性 ;通过分析阳性样品的基因型来评价 CIEF检测地贫的准确性。结果　用 CIEF分析当地健康人的Hb A2 正常参考值为 3 .59%～ 5.2 3 %。CIEF结果与常规血红蛋白电泳结果具有良好的线性关系 ;以基因分析为确诊标准 ,用 CIEF检测 Hb A2 含量 ,及结合红细胞指数阳性测定值所筛查的 87例 α-地贫或 β-地贫携带者、6例成人血红蛋白 E病例样品均被准确诊断 ,未见假阳性或假阴性结果。结论　等电聚焦毛细管电泳是一种快速高效、高稳定性、高精确度的 Hb A2 测定方法。

关键词：等电聚焦毛细管电泳地中海贫血血红蛋白A2 CIEF HbA2 红细胞

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一种改进的大引物PCR定点诱变方法

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中华医学遗传学杂志 2002年第1期19卷 68-71页

作者：莫秋华徐湘民钟雄霖刘忠英第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州510515

目的　建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法　在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野... 详细信息

目的　建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法　在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果　用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,并将诱变得到的全长人 β珠蛋白基因克隆到 p GEM○R- T载体后全长测序 ,所有克隆均鉴定为所需突变型。结论　这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工 ,诱变的成功率可达 10 0 % ,适于实验室常规应用。

关键词：大引物聚合酶链反应定点诱变 β珠蛋白基因

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缺失plcg1基因引起成纤维细胞PI-3K信号上调

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 677-681页

作者：白晓春罗深秋白洁邓凡曾位森冀群升中国 Vanderbilt大学医学院生物化学教研室广州510515 第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

磷脂酶C γ1(phospholipaseC γ1,PLC γ1)与磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol 3kinase,PI 3K)是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC γ1在表皮生长因子 (EGF)介导的细胞分裂信号中的代偿机制 ,用磷脂酶C... 详细信息

磷脂酶C γ1(phospholipaseC γ1,PLC γ1)与磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol 3kinase,PI 3K)是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC γ1在表皮生长因子 (EGF)介导的细胞分裂信号中的代偿机制 ,用磷脂酶C(phospholipaseC ,PLC)特异性抑制剂U7312 2及PI 3K特异性抑制剂wortmannin处理剔除PLC δ1基因 plcg1(PLC γ1-/-)及野生型 (PLC γ1+ /+ )小鼠胚胎成纤维细胞 ,发现未经处理情况下两种细胞的克隆形成能力、细胞活力及EGF引起的DNA合成能力相似 ,且均可被U7312 2与wortmannin抑制 ,但与PLC γ1+ /+ 细胞相比 ,PLC γ1-/-更依赖于PI 3K ,而对PLC的依赖性却减小。Western印迹也表明EGF刺激后PI 3K的 p85α亚单位酪氨酸磷酸化程度比野生型显著增高 ,PI 3K信号通路的激活出现上调 ,且PLC γ1-/-中无其近亲PLC γ2的代偿表达。因此PLC γ1-/-中PLC γ1的功能可能被PI 3K通路代偿 ,而PLC γ2或其他PLC同工酶并不代偿其功能。结果表明EGF介导的信号通路的冗余性及PLC γ1信号通路的可代偿性。

关键词：磷脂酶C-γ1 磷脂酰肌醇3激酶表皮生长因子缺失plcg1基因小鼠成纤维细胞信号转导

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PCR技术快速检测常见缺失型α-地中海贫血-2基因

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中华医学遗传学杂志 2001年第3期18卷 216-218页

作者：赵永忠钟梅刘忠英徐湘民第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 第一军医大学南方医院妇产科

目的　建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型 α-地中海贫血 - 2的 PCR技术 ,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法　α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌呤胞嘧啶核苷酸含量 ,使引物的选择和 PCR扩增受到限制。对于左... 详细信息

目的　建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型 α-地中海贫血 - 2的 PCR技术 ,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法　α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌呤胞嘧啶核苷酸含量 ,使引物的选择和 PCR扩增受到限制。对于左缺失型 - α4.2基因 ,在疾病基因序列测定的基础上 ,设计了一套全新的三引物 PCR体系 ,用于区别正常和缺失等位基因。为检测右缺失型 -α3.7基因 ,则设计了四引物多重 PCR体系 ,除包含 1对能扩增 -α3.7基因特异片段的引物外 ,尚有 1对引物用于指示体系扩增成功与否。结果　建立了两种多重 PCR体系 ,在同一 PCR热循环参数下 ,可分别用于 - α4.2基因和 - α3.7基因的分子诊断 ,正常人只有 1条内对照扩增条带 ,而α-地中海贫血 - 2杂合子可见对应的 2条扩增条带。结论　该体系可检测 - α3.7和 - α4.2缺失型 α-地中海贫血 - 2基因 ,有望用于临床样本分子诊断和高发人群基因筛查。

关键词： α-地中海贫血多重聚合酶链反应分子诊断

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一个β地中海贫血复合δβ地中海贫血家系的表型与基因型分析

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中华医学遗传学杂志 2001年第4期18卷 310-313页

作者：李志琴莫秋华钟雄林刘兰平徐湘民第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 第一军医大学附属珠江医院检验科广州510515

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点... 详细信息

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点的三引物聚合酶链反应直接分析法检测δβ地贫缺失突变 ;用反向点杂交技术筛查β地贫基因突变 ;并对一例该型地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断。结果　先证者 (重症地贫 )为一种缺失型δβ地贫与β地贫双重杂合子 ,其δβ地贫基因遗传自母方 ,在该家系 3代 9名成员中共检测到 4例携带了这一基因 ,其表型和基因型结果相互吻合 ;β地贫基因 (密码子 41- 42 - CTTT移码突变 )遗传自父方。对该家系的重症地贫高风险胎儿进行产前基因诊断的结果显示 ,胎儿的基因型完全正常。结论　在国内首次报告由缺失型δβ地贫基因与β地贫移码突变双重杂合导致的重症地贫高风险胎儿的产前诊断结果。采用的技术简便、快速。

关键词： β地中海贫血 δβ地中海贫血产前诊断基因缺失基因型分析

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间隙连接细胞间通讯与癌发生

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癌症 1998年第1期17卷 77-78页

作者：莫永炎罗深秋侯云霞第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

间隙连接细胞间通讯与癌发生莫永炎罗深秋侯云霞＊广东省自然科学基金课题资助项目作者单位：第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室（广州，５１０５１５）第一作者：男，１９７１年出生，博士生关键词间隙连接细胞间通讯肿瘤／病... 详细信息

间隙连接细胞间通讯与癌发生莫永炎罗深秋侯云霞＊广东省自然科学基金课题资助项目作者单位：第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室（广州，５１０５１５）第一作者：男，１９７１年出生，博士生关键词间隙连接细胞间通讯肿瘤／病理学中图号Ｒ７３０．２１Ｒ７３０．...

关键词：间隙连接细胞间通讯肿瘤病理学

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信号转导蛋白——磷脂酶C-δ

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细胞生物学杂志 2001年第4期23卷 210-213页

作者：白洁罗深秋冀群升第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州510515

PLG-δ是PLC家族中最基本的成员,能水解肌醇磷脂,产生肌醇三磷酸和二酰基甘油,参与信号转导。并与某些病理状态有关。

关键词：磷脂酶C-δ 信号转导蛋白生物学效应蛋白结构

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中国人Brugada综合征分子遗传学研究发现一个新的SCN5A基因突变

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中华心血管病杂志 2002年第8期30卷 455-459页

作者：陈哲明孟素荣彭健郭志刚赵永忠徐湘民李曦龚红武第一军医大学南方医院心内科广州510515 第一军医大学医学遗传学教研室第一军医大学生物工程系

目的　研究探索中国人Brugada综合征是否存在基因突变及突变类型 ,并分析突变可能的致病机制。方法　以SCN5A作为候选基因 ,应用PCR SSCP技术对 4例患者及其家系成员进行突变检测 ,并用DNA直接测序验证。结果　SSCP分析在一个家系内发现... 详细信息

目的　研究探索中国人Brugada综合征是否存在基因突变及突变类型 ,并分析突变可能的致病机制。方法　以SCN5A作为候选基因 ,应用PCR SSCP技术对 4例患者及其家系成员进行突变检测 ,并用DNA直接测序验证。结果　SSCP分析在一个家系内发现SCN5A基因第 8外显子PCR产物出现异常带型 ,而在 2 0 0例正常对照者中均未发现此改变。DNA直接测序显示SCN5A编码区第317位密码子的第三位碱基G→C的错义突变 ,并导致位于DⅠS5与DⅠS6节段之间与钠通道蛋白“孔”区相关的第一个P Loop结构上一个赖氨酸 (K)被天冬酰胺 (N)取代 (K317N)。一个家系调查表明 ,2 1例家系成员中共有 10例携带者 ,其中有症状者 (4例 )均为携带者 ,2例无症状携带者有心电图改变 ,隐性携带者占 4 0 %。结论　在中国人中发现了Brugada综合征一个新的SCN5A基因突变。

关键词：心律失常基因突变 Brugada综合征中国人 Brugada综合征分子遗传学

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星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

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第一军医大学学报 2001年第5期21卷 336-337,F003页

作者：杨翠兰罗深秋第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达... 详细信息

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达，属丰满型；粗大的张力纤维贯穿细胞全长，接近平行分布，偶见交叉呈“Ｚ”形状。而ＳＷＯ－３８细胞的微管则明显减少，属稀疏型；细胞中仅见少量纤细的张力纤维，多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体，微管和微丝呈收缩趋势。

关键词：星形胶质细胞星形胶质瘤细胞细胞骨架光镜电镜

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