检索结果-内蒙古大学图书馆

神经解剖学杂志 2004年第5期20卷 517-520页

作者：郭再玉姜晓丹徐如祥第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广州510282

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的... 详细信息

膜片钳技术(patch-clamp technique)是1976年由Nehetr和Sakmann在电压钳的基础上发展而来的一种记录细胞膜离子通道电生理活动的技术.其突出优点是能够在维持细胞兴奋过程中膜电位恒定的同时,直接记录离子通道电流,反映单一的(或多个的)离子通道分子活动.此技术的出现将细胞水平和分子水平的生理学研究联系在一起,同时又将神经科学的不同领域融汇成一体,是对生理科学和神经科学研究的重大变革.

关键词：膜片钳技术离子通道神经干细胞电生理活动电压钳膜电位研究现状细胞膜记录神经科学

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大鼠骨髓细胞诱导分化神经细胞的形态学观察

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神经解剖学杂志 2004年第6期20卷 613-617页

作者：李战辉刘振华姜晓丹徐如祥第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广州510282

本实验探讨了从骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察了其演变规律.抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜、扫描电镜观察不同阶段的形态变化,用免疫细胞化学方法进行鉴定.观察到骨髓细胞由单细胞、细胞分裂、形成克隆团(... 详细信息

本实验探讨了从骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察了其演变规律.抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜、扫描电镜观察不同阶段的形态变化,用免疫细胞化学方法进行鉴定.观察到骨髓细胞由单细胞、细胞分裂、形成克隆团(球)、出芽,直至形成突起成为神经元样细胞的演变过程.可确定神经元样细胞的前体在骨髓阶段是一类'大圆细胞'.24h左右开始贴壁,前体细胞长出'足'样结构与细胞外基质相连接.培养25～35 d细胞分化为神经元样,神经元样细胞的形态多样,有球形、锥形、星形或梭形等,直径在15.3～36.5μm之间.应用免疫细胞化学鉴定出神经干细胞、神经元和胶质细胞.结果表明,骨髓细胞可分化为神经细胞,扫描电镜从超微结构上给予佐证.为骨髓细胞向神经细胞分化的发育过程提供了形态学资料.

关键词：大鼠骨髓基质细胞造血干细胞神经细胞扫描电镜诱导分化

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大鼠全骨髓细胞诱导分化神经细胞的实验方法研究

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南京医科大学学报（自然科学版） 2004年第6期24卷 595-597页

作者：刘振华李战辉姜晓丹徐如祥邹雨汐杜谋选第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东广州510282

目的:摸索从全骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察其演变规律。方法:抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜观察不同阶段的形态,荧光激活细胞计数仪(FACS)追踪由骨髓到神经元样细胞不同阶段nestin和Neuronalnuclei(NeuN... 详细信息

目的:摸索从全骨髓诱导培养分化神经细胞的方法,并从形态学上观察其演变规律。方法:抽取SD大鼠骨髓做全骨髓细胞培养,用光镜观察不同阶段的形态,荧光激活细胞计数仪(FACS)追踪由骨髓到神经元样细胞不同阶段nestin和Neuronalnuclei(NeuN)的表达趋势,给予定性、定量,以及免疫细胞化学鉴定。结果:骨髓细胞至10天开始分化,逐渐发育成为神经元样细胞。Nestin在15天时达到高峰为22.7%,NeuN于30天达到高峰为41.2%,而此时nestin阳性细胞为5.9%。免疫细胞化学鉴定出神经干细胞、神经元和胶质细胞。结论:建立了全骨髓细胞体外分离、培养的条件,具有简捷和高效的价值。

关键词：骨髓细胞基质细胞造血干细胞神经细胞

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dsRNA阻断大鼠骨髓源性神经干细胞Hes5表达的实验研究

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第一军医大学学报 2004年第1期24卷 35-38,41页

作者：王海燕徐如祥姜晓丹罗深秋第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东广州510282 第一军医大学细胞生物学教研室学广东广州510515

目的观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率，并对其影响因素进行初步探讨。方法将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞，通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞，应用人工合成的dsRNA于不同浓... 详细信息

目的观察外源性短双链RNA(dsRNA)在转录后水平即mRNA水平降低基因表达的效率，并对其影响因素进行初步探讨。方法将体外分离培养的大鼠骨髓基质细胞，通过由本实验室配制的特殊培养基诱导成神经干细胞，应用人工合成的dsRNA于不同浓度转染神经干细胞，Western bloting检测dsRNA是否能阻断转录因子Hes5的表达，0．5％锥虫蓝法测定各浓度组中培养细胞活力。结果 200、300nmol／L浓度的dsRNA能特异有效地阻断Hes5的表达，而50～200nmol／L浓度的dsRNA有利于干细胞存活。结论 dsRNA能在神经干细胞内启动RNA干扰作用，适宜浓度的dsRNA能在特异有效地阻断内源性基因的表达的同时，最大限度地保持细胞活力。

关键词： dsRNA 大鼠骨髓源性神经干细胞 Hes5 实验外源性短双链RNA 基因表达

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高温高湿环境下猫颅脑火器伤后细菌生长特点

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第一军医大学学报 2004年第2期24卷 201-203页

作者：郭燕舞朱红胜徐如祥第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东广州510282 解放军422医院神经外科广东湛江524005

目的研究高温高湿环境下猫颅脑火器伤后创面及周围组织细菌生长特点。方法杂种猫23只随机分为常温枪伤对照组(伤后立即取材，A组)、常温枪伤组(伤后6h取材，B组)、高温高湿枪伤组(伤后6h取材，C组)和空白对照组(D组)，分别取创面及周... 详细信息

目的研究高温高湿环境下猫颅脑火器伤后创面及周围组织细菌生长特点。方法杂种猫23只随机分为常温枪伤对照组(伤后立即取材，A组)、常温枪伤组(伤后6h取材，B组)、高温高湿枪伤组(伤后6h取材，C组)和空白对照组(D组)，分别取创面及周围组织进行细菌培养并计数。结果 A、B、C组其创面组织、伤道壁5mm内组织、伤道壁5～10mm内组织细菌含量无统计学差异(P>0．05)，各组内随着离伤道距离的增加细菌含量减少(P<0．01)。3组创面组织、伤道壁5mm内组织细菌含量与D组比较差异显著(P<0．01)。结论高温高湿环境对颅脑火器伤6h内的细菌生长情况无显著影响，颅脑火器伤后6h内细菌繁殖未进入高速增长期，进行清创仍是安全的。

关键词：高温高湿猫颅脑火器伤细菌生长细菌感染

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骨髓基质细胞诱导分化为去甲肾上素能神经元的实验研究

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中国临床康复 2004年第22期8卷 4476-4477,i002页

作者：蔡颖谦陈剑荣姜晓丹丁涟沭解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东省广州市510280

目的:研究骨髓源性神经干细胞在体外培养及诱导分化的神经元样细胞,能否分泌去甲肾上素神经递质成分,进而初步推断是否具有神经元的生化特征。方法:分离新西兰大白兔骨髓基质细胞(bonemarrowstemcells,BMSCs),在体外应用神经干细胞培养... 详细信息

目的:研究骨髓源性神经干细胞在体外培养及诱导分化的神经元样细胞,能否分泌去甲肾上素神经递质成分,进而初步推断是否具有神经元的生化特征。方法:分离新西兰大白兔骨髓基质细胞(bonemarrowstemcells,BMSCs),在体外应用神经干细胞培养液和分化诱导因子进行体外培养和诱导分化,采用免疫细胞化学方法进行鉴定;并应用高效液相色谱法(highper-formanceliquidchromatograpy,HPLC)检测其去甲肾上素神经递质的含量。结果:BMSCs培养14d可见大而圆细胞,免疫细胞化学鉴定Nestin抗原阳性;培养20d可见长突起神经元样细胞,神经核蛋白(NeuN)免疫细胞化学检查阳性,高效液相检测BMSCs、空白神经干细胞培养液未测到去甲肾上素神经递质,经体外培养增殖7,14d的神经干细胞及培养液、体外诱导分化20d的神经元样细胞及培养液则均可检测到去甲肾上腺素(noradrenaline,NE),培养第7,14,20天每107细胞中NE水平分别为:(4.270±0.376),(14.203±0.771),(45.970±4.902)μg/L,第7,14天NE含量小于第20天(F=172.44,P=0.011)。而且随着BMSCs培养天数的增加,其所含的NE浓度也渐增加(P<0.05)。结论:兔BMSCs能在体外增殖,并表达Nestin抗原;而且,在适宜条件下能分化成神经元样细胞,表达成熟神经元特异性核蛋白NeuN,并合成。

关键词：骨髓基质细胞细胞分化去甲肾上素神经元实验神经递质

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人骨髓基质细胞分化为神经元样细胞的研究

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中国临床康复 2004年第31期8卷 6891-6893,i001页

作者：邹雨汐姜晓丹徐如祥陈剑荣黄涛解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东省广州市510282

目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子... 详细信息

目的:探讨人骨髓源性神经干细胞分化为神经细胞的可行性,为中枢神经组织损伤修复寻找种子细胞的理想来源。方法:无菌取成人髂骨骨髓,密度梯度离心分离后获得骨髓基质细胞(bonemarrowstroualcells,BMSCs);在神经干细胞培养液及细胞因子等条件下诱导为神经元样细胞,通过免疫细胞化学方法对诱导后细胞进行鉴定;通过高效液相色谱法(HPLC)检测诱导后细胞合成分泌神经递质去甲肾上腺素(NE)的能力。结果:分离得到的成人BMSCs培养10～14d后,细胞呈半贴壁状,胞体饱满,Nestin抗原染色阳性。培养20d后,在诱导因子作用下进一步分化为神经元样细胞(NLCs),具有细长双极或多极突起,神经核蛋白(NeuN)抗原表达阳性。HPLC检测BMSCs、空白神经干细胞培养液未测到NE,经体外诱导培养8,11d的神经干细胞、体外诱导分化20d的NLCs均可检测到NE,神经干细胞(8,11d)的NE含量为(10.4146±1.0425),(28.3359±3.8371)μg/L小于NLCs(20d)组(52.1342±3.9136)μg/L,差异有非常显著性意义(F=126.64,P=0.0000)。而且随着BMSCs培养天数的增加,其所含的NE浓度也渐增加(P<0.05)。结论:在适宜培养条件及诱导因子联合作用下,人BMSCs可被成功诱导为神经细胞,并具有合成分泌神经递质成分的能力。

关键词： NE 神经元样细胞神经干细胞诱导 BMSC 阳性神经细胞密度梯度离心分化人骨髓基质细胞

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共转染EGFP和hMnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力的影响

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中国临床康复 2004年第22期8卷 4445-4447,i001页

作者：徐强徐如祥姜晓丹张世忠解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东省广州市510282

目的:人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法:应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒... 详细信息

目的:人正义、反义MnSOD基因和EGFP共转染恒河猴骨髓源神经干细胞,观察MnSOD基因对猴骨髓源神经干细胞抗氧化能力和报告基因表达的影响。方法:应用NucleofectorTM核转染仪将人正义、反义MnSOD基因和荧光真核表达载体共转染体外培养的恒河猴骨髓源神经干细胞,荧光显微镜下观察荧光蛋白在细胞内的表达,并检测转染细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活性。结果:①转染24h后,共转染细胞可见荧光蛋白在骨髓源神经干细胞内有效表达,荧光显微镜下发强绿色荧光,其转染率约为80%。②转染人正义MnSOD基因的细胞的总SOD活性犤(8.03±0.74)NU/mg犦与转染人反义MnSOD基因细胞的总SOD活性犤7.19±0.86)NU/mg犦差异无显著性意义,但MnSOD活性前者明显高于后者1.89倍。结论:MnSOD基因与EGFP基因共转染骨髓源神经干细胞,均有效表达,提高了细胞内MnSOD活性,为多基因联合治疗帕金森病提供了可行的技术平台。

关键词：帕金森病干细胞超氧化物歧化酶骨髓细胞基因疗法

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兔脊髓损伤不同时期的神经干细胞移植治疗的效果

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中国临床康复 2004年第20期8卷 4004-4005,i004页

作者：代广辉徐如祥姜晓丹杜谋选邹雨汐蔡颖谦解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东省广州市510282

目的:研究新西兰大白兔脊髓损伤后不同时期神经干细胞(neuralstemcells,NSCS)移植治疗的不同效果,探讨脊髓损伤移植治疗的最佳时机。方法:体外培养、诱导新西兰大白兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)为NSC并行5-溴-2-脱氧尿... 详细信息

目的:研究新西兰大白兔脊髓损伤后不同时期神经干细胞(neuralstemcells,NSCS)移植治疗的不同效果,探讨脊髓损伤移植治疗的最佳时机。方法:体外培养、诱导新西兰大白兔骨髓基质细胞(bonemarrowstromalcells,BMSCs)为NSC并行5-溴-2-脱氧尿苷(bromodeoxyuridine/5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)标记。手术造成兔脊髓全横断模型,在术后即时,7,14,21,28d分别行NSC局部移植,同时设立脊髓全横断空白对照组,正常对照组。于移植后3个月观察动物脊髓损伤局部病理变化。结果:术后即时移植组局部仅有少量Brdu标记阳性细胞存活,通过脊髓损伤区的神经纤维数目少;7,14d移植组局部有大量Brdu标记阳性细胞存活,通过脊髓损伤区的神经纤维数目多,神经纤维排列较整齐;21,28d移植组局部有大量Brdu标记阳性细胞存活,但通过脊髓损伤区的神经纤维数目少,且再生的神经纤维排列紊乱;空白对照组未发现Brdu标记阳性细胞,在脊髓损伤区域未发现再生通过的神经纤维。结论:实验证明了脊髓损伤后7～14d为NSC最佳移植时期,同时提示NSC移植对动物脊髓损伤后的组织修复具有促进作用。

关键词：脊髓/损伤移植干细胞神经系统/细胞学骨髓细胞

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自体神经干细胞在兔损伤脊髓内存活并分化的实验效果

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中国临床康复 2004年第14期8卷 2648-2649,F010页

作者：代广辉徐如祥王峰姜晓丹杜谋选蔡颖谦邹雨矽解放军第一军医大学珠江医院全军神经医学研究所广东省广州市510282

目的:将新西兰大白兔骨髓基质细胞体外培养、诱导、分化为神经干细胞,并且移植到兔脊髓横断性损伤模型中,观察移植的细胞是否能够存活及分化。方法:兔骨髓基质细胞取自成年兔的股骨或髂骨,体外培养、诱导、分化为神经干细胞,将兔制成脊... 详细信息

目的:将新西兰大白兔骨髓基质细胞体外培养、诱导、分化为神经干细胞,并且移植到兔脊髓横断性损伤模型中,观察移植的细胞是否能够存活及分化。方法:兔骨髓基质细胞取自成年兔的股骨或髂骨,体外培养、诱导、分化为神经干细胞,将兔制成脊髓全横断模型。伤后2周将神经干细胞手术方法直视下移植到受损脊髓缺损处,伤后12周将兔行甲醛灌注留取神经干细胞移植处作为标本,行病理及免疫组化染色。并设立脊髓损伤空白对照组(移植后不行神经干细胞移植)。结果:移植组与对照组相比,移植组移植部位存在大量5-溴-2-脱氧尿苷(bromodeoxyuridine/5-bromo-2-deoxyuridine,BrdU)染色阳性的细胞,表明移植的细胞在体内可以存活;同时,移植组脊髓损伤部位存在神经元特异性烯醇化酶抗体(neuron-specificendase,NSE)、胶质原性纤维酸性蛋白抗体(glialfibrillaryacidicprotein,GFAP)染色阳性的细胞,表明移植的细胞可以分化为具有神经元或胶质细胞特征的细胞。

关键词：脊髓损伤/治疗干细胞神经系统/细胞学骨髓细胞移植

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