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脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对其黏附分子mRNA表达的影响

第四军医大学学报 2004年第15期25卷 1359-1364页

作者：丰贵文于立新赵显国张宏涛第一军医大学南方医院肾移植科广东广州510515 郑州大学第一医院血液净化中心河南郑州450052

目的 :探讨在Euro Collin’s(ECs)中 ,低温缺氧条件下脂质体 (invivoliposome)介导NF κB诱捕物寡核苷酸 (NF κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株 (ECV 30 4 )的转染效率以及复氧后对其NF κB活性及受其调控的黏附分子mR NA表达的影响 .... 详细信息

目的 :探讨在Euro Collin’s(ECs)中 ,低温缺氧条件下脂质体 (invivoliposome)介导NF κB诱捕物寡核苷酸 (NF κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株 (ECV 30 4 )的转染效率以及复氧后对其NF κB活性及受其调控的黏附分子mR NA表达的影响 .方法 :应用脂质体 /decoyODN、脂质体 /scrambledODN复合物 ,在低温缺氧的ECs转染ECV 30 4 .应用荧光显微镜和流式细胞仪 ,观察在 4℃条件下 ,decoyODN浓度为 1 .0 μmol/L的ECs缺氧保存ECV 30 4 6h后的平均荧光强度 (MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布 ;同时设立裸ODN转染为对照 ,观察脂质体介导decoyODN对ECV 30 4的转染效率 .应用凝胶电泳迁移改变试验 (EMSA)分析ECV 30 4低温缺氧保存 6h/复氧后不同时间的NF κB活性以及decoyODN对NF κB活性抑制效果 .利用RT PCR方法检测各组ECV 30 4的ICAM 1 ,VCAM 1以及P selectin的mRNA表达 .结果 :ECV 30 4在ECs中 4℃缺氧保存 6h后 ,脂质体介导ODN对ECV 30 4转染的MFI为 1 0 72 .7± 33.1 ,是裸ODN转染的 91 .1倍 ,细胞对ODN的摄取率为 (93.1±2 .6 ) % ,是裸ODN转染的 71 .5倍 ;脂质体介导ODN转染的ECV 30 4 ,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞质 ,胞核内呈强荧光颗粒 ,而裸ODN转染的ECV 30 4 ,胞质内偶见少量荧光。

关键词：内皮细胞株ECV304 低温低氧脂质体转染黏附分子

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低温缺氧条件下脂质体介导的寡核苷酸对人脐静脉内皮细胞-304的转染

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第一军医大学学报 2004年第5期24卷 497-500页

作者：丰贵文于立新张宏涛赵显国第一军医大学南方医院肾移植科广东广州510515 郑州大学第一附属医院器官移植血液净化中心河南郑州450052

目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4 ℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(Invivoliposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法(1) 将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 164... 详细信息

目的研究在Euro-Collins溶液(ECs)中,低温(4 ℃)缺氧条件下体内阳离子脂质体转染剂(Invivoliposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κB decoy ODN)在人脐静脉内皮细胞株ECV-304中的转染效率。方法(1) 将ECV-304在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液中以37 ℃、5% CO2的条件培养,待生长至单层融合后,进行试验。(2) 使用前配制脂质体-ODN复合物,脂质体与ODN 的+/-电荷比率为2。(3) 应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在ECs中、4 ℃条件下,ODN浓度分别为0.50、0.75、1.00、1.25 μmol/L时,缺氧保存2、4、6、8 h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照组,观察对ECV-304的转染效率。结果在ECs中、4 ℃缺氧保存条件下,随着保存时间的延长和脂质体-ODN浓度的升高,ECV-304的MFI增强,保存6 h后MFI基本达到了最大强度,并且大部分ODN均位于细胞核内;而ODN的细胞摄取率无差异。但与裸转染相比,MFI和细胞摄取率均有显著差异性。结论在ECs中和低温缺氧条件下,脂质体可以高效地将NF-κB decoy ODN转染到ECV-304细胞核,为供体器官在基因调控水平的保护研究提供了实验依据。

关键词：低温缺氧脂质体寡核苷酸脐静脉内皮细胞转染

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脂质体介导NF-κB decoy ODN低温缺氧对ECV-304的转染及复氧后对下游粘附分子及趋化因子基因表达的影响

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中国现代医学杂志 2004年第11期14卷 84-87,91页

作者：丰贵文于立新张宏涛赵显国第一军医大学南方医院肾移植科广东广州510515 郑州大学第一附属医院器官移植血液净化中心河南郑州450052

目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(invivoLiposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响。方法ECV-304在10%FBS的RPMI164... 详细信息

目的探讨在Euro-Collin's(ECs)中,低温(4℃)缺氧条件下脂质体(invivoLiposome)介导NF-κB诱捕物寡核苷酸(NF-κBdecoyODN)对人脐静脉内皮细胞株(ECV-304)的转染效率以及复氧后对其细胞分子表达的影响。方法ECV-304在10%FBS的RPMI1640培养液,37℃、5%CO2条件下培养,生长至单层融合后进行试验。使用前配制Liposome/decoyODN和scrambledODN复合物,Liposome与ODN的+/-电荷比率为2。应用荧光显微镜和流式细胞仪,观察在4℃条件下,ODN浓度1.0μM的ECs缺氧保存6h后ECV-304的平均荧光强度(MFI)和摄取率以及ODN的胞内分布;同时设立裸ODN转染为对照,观察Liposome介导ODN对ECV-304的转染效率。利用RT-PCR方法检测各组ECV-304的ICAM-1、VCAM-1、IL-8、MCP-1以及P-selectin的mRNA表达。结果在ECs中、4℃缺氧保存ECV-3046h后,Liposome介导ODN对ECV-304转染的MFI为1072.71±33.14,是裸ODN转染的91.1倍,细胞对ODN的摄取率为93.06±2.60%,是裸ODN转染的71.5倍。Liposome介导ODN转染的ECV-304,荧光显微镜下可见部分荧光颗粒分布于胞浆,胞核内可见强荧光颗粒;而裸ODN转染的ECV-304,胞浆内偶见少量荧光,胞核内未见荧光颗粒。RT-PCR检测显示Liposome/decoyODN转染ECV-304后,其ICAM-1,VCAM-1,IL-8,MCP-1以及P-selectin的mRNA的?

关键词： ECV-304 低温缺氧保存复氧 Liposome/decoy ODN 转染基因表达

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他克莫司、霉酚酸酯和血浆置换联合应用治疗肾移植术后急性体液性排斥反应

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中华器官移植杂志 2002年第1期23卷 51-53页

作者：袁小鹏李杰高伟焦伟华姜松东莞市太平人民医院血液净化肾移植科广东省523900 第一军医大学附属珠江医院血液净化肾移植中心

目的　探讨他克莫司 (FK5 0 6 )、霉酚酸酯和血浆置换联合应用治疗急性体液性排斥反应的效果。方法　 6例肾移植后发生急性体液性排斥反应的患者 ,术后采用环孢素A、霉酚酸酯和激素行免疫抑制治疗 ,发生急性体液性排斥反应时经甲泼尼龙... 详细信息

目的　探讨他克莫司 (FK5 0 6 )、霉酚酸酯和血浆置换联合应用治疗急性体液性排斥反应的效果。方法　 6例肾移植后发生急性体液性排斥反应的患者 ,术后采用环孢素A、霉酚酸酯和激素行免疫抑制治疗 ,发生急性体液性排斥反应时经甲泼尼龙和抗胸腺细胞球蛋白治疗无效 ,行血浆置换 4～ 6次 ,并给予FK5 0 6 (0 .2mg·kg-1·d-1)及霉酚酸酯 (由 2 g/d加至 3g/d)治疗。结果　经 4～ 6次血浆置换和FK5 0 6、霉酚酸酯治疗 ,排斥反应得到逆转 ,6例患者肾功能均恢复良好 ,随诊 3～ 18个月 ,患者的血肌酐水平为 (12 5 .2± 2 6 .5 ) μmol/L。结论　FK5 0 6。

关键词：肾移植移植物排斥免疫抑制同种抗体血液成份除去法

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雷帕霉素的作用机制和临床应用

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国外医学（药学分册） 2002年第3期29卷 162-165页

作者：李民第一军医大学附属珠江医院血液净化肾移植科广东广州510282

雷帕霉素 (RAPA)是一种新型大环内酯类免疫抑制剂。RAPA通过不同的细胞因子受体阻断信号传导 ,阻断T淋巴细胞及其他细胞由G1期至S期的进程 ,从而发挥免疫抑制效应。从目前临床应用来看 ,RAPA有很好的抗排斥作用 ,且与环孢素A(CsA)和FK5 ... 详细信息

雷帕霉素 (RAPA)是一种新型大环内酯类免疫抑制剂。RAPA通过不同的细胞因子受体阻断信号传导 ,阻断T淋巴细胞及其他细胞由G1期至S期的进程 ,从而发挥免疫抑制效应。从目前临床应用来看 ,RAPA有很好的抗排斥作用 ,且与环孢素A(CsA)和FK5 0 6等免疫抑制剂有良好的协同作用 ,是一种疗效好、低毒、无肾毒性的新型免疫抑制剂。目前RAPA的Ⅰ ,Ⅱ期临床试验已结束。

关键词：雷帕霉素免疫抑制剂药物不良反应

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高度致敏肾移植受者的HLA抗体公共表位分析

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临床泌尿外科杂志 2002年第5期17卷 225-226,228页

作者：袁小鹏姜松高伟焦伟华广东省东莞市太平人民医院血液净化肾移植科广东东莞523905 第一军医大学珠江医院血液净化肾移植科

目的 :探讨对高度致敏肾移植受者进行人类白细胞抗原 (HLA)特异性抗体的公共表位分析的临床意义。方法 :对 2 4例高度致敏受者 (HLA I类抗体PRA >5 0 %)作群体反应性抗体 (PRA)的连续监测 ,并做抗体特异性鉴定和抗体公共表位分析。结... 详细信息

目的 :探讨对高度致敏肾移植受者进行人类白细胞抗原 (HLA)特异性抗体的公共表位分析的临床意义。方法 :对 2 4例高度致敏受者 (HLA I类抗体PRA >5 0 %)作群体反应性抗体 (PRA)的连续监测 ,并做抗体特异性鉴定和抗体公共表位分析。结果 :2 4例高度致敏受者中 2 1例 (87.5 %)具有公共表位抗体 ,抗体公共表位分析比抗体特异性鉴定能更准确反映抗体谱。 16例高度致敏患者根据抗体公共表位分析结果找到HLA相容的供肾 ,成功地进行了肾移植术。结论 :对少数高频率高免疫原性氨基酸残基公共表位的致敏是高敏受者致敏的主要原因。高度致敏受者的抗体公共表位分析能有效指导HLA配型。

关键词：肾脏移植群体反应性抗体 HLA抗原公共表位分析

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肾移植受者HLA特异性抗体的监测及临床应用

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中华器官移植杂志 2001年第2期22卷 103-105页

作者：李留洋胡丽娟林民专赵明李民黄先恩范礼佩第一军医大学附属珠江医院血液净化肾移植科广州510282

目的　探讨人类白细胞抗原 (HLA)群体反应性抗体 (PRA)对肾脏移植效果的影响。方法　采用酶联免疫吸附法 (ELISA)和微量补体依赖性细胞毒试验 (CDC)对 897例次肾移植受者的PRA进行动态监测。结果　 85 6例初次肾移植受者中术前PRA阳性者... 详细信息

目的　探讨人类白细胞抗原 (HLA)群体反应性抗体 (PRA)对肾脏移植效果的影响。方法　采用酶联免疫吸附法 (ELISA)和微量补体依赖性细胞毒试验 (CDC)对 897例次肾移植受者的PRA进行动态监测。结果　 85 6例初次肾移植受者中术前PRA阳性者 12 1例 ,占 11% ,而 33例次 2次移植和 8例次 3次移植受者术前PRA阳性分别为 5 8%和 87% ,与初次肾移植受者组比较 ,PRA阳性受者比例均显著增高 (P <0 .0 0 1)。PRA阳性组受者肾移植术后排斥发生率为 40 % ,而阴性组受者仅 17% ,两组比较差异有显著性 (P <0 .0 0 1)。PRA阳性组受者的移植物存活率则明显低于阴性组 (P <0 .0 0 1) ,尤其是PRA >40 %的高致敏受者的 1、3、5年和 7年移植物存活率与阴性组比较分别下降了 2 4%、38%、5 7%和 5 6 % ,均为P <0 .0 0 1。ELISA法与CDC法的双盲试验发现 ,319份受者血清中CDC PRA的假阳性和假阴性率分别为 3 .8%和 3 .1%。结论　PRA是预测受者致敏状态的敏感指标。

关键词：人类白细胞抗原群体反应性抗体肾移植排斥反应

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联合应用FTY720和Cs A对小鼠淋巴细胞的影响

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上海免疫学杂志 2001年第1期21卷 38-40页

作者：李留洋孙尔维汪爽张雷第一军医大学珠江医院血液净化肾移植科广州510282

为探讨联合应用FTY72 0和环孢素A (CsA )对外周血及淋巴器官的影响 ,选用昆明小鼠分别给予FTY72 0、CsA或FTY72 0加CsA 2周 ,在服药期间和停药后观察外周血象淋巴细胞数、粒细胞数、血红蛋白、胸腺和脾脏重量以及骨髓象的变化。结果发现... 详细信息

为探讨联合应用FTY72 0和环孢素A (CsA )对外周血及淋巴器官的影响 ,选用昆明小鼠分别给予FTY72 0、CsA或FTY72 0加CsA 2周 ,在服药期间和停药后观察外周血象淋巴细胞数、粒细胞数、血红蛋白、胸腺和脾脏重量以及骨髓象的变化。结果发现 ,FTY72 0组和联合用药组的淋巴细胞在服药后 1周和 2周均明显减少 ,停药后有不同程度的恢复。各组的粒细胞、血红蛋白、胸腺重量和骨髓象在服药期间或停药后与对照组相比均无明显差异。FTY72 0组和联合用药组的脾脏重量在服药 2周后或停药后 4周均明显减轻。该实验表明FTY72 0可选择性地清除成熟的外周淋巴细胞 ,CsA对FTY72 0的作用无明显影响 ,联合应用FTY72 0和CsA的免疫抑制效果可能是通过不同的机制起作用。

关键词： FTY720 CSA 淋巴细胞血液系统

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抗IL-2R单克隆抗体在肾脏移植中的应用

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国外医学（泌尿系统分册） 2001年第4期21卷 178-179,177页

作者：袁小鹏李杰高伟东莞市太平人民医院血液净化器官移植中心广东东莞523905 第一军医大学珠江医院血液净化肾脏移植中心

IL 2和IL 2R的相互作用在T细胞活化、增殖中起关键作用。IL 2Rα单克隆抗体可以对被同种异体移植物激活的T细胞克隆选择性地产生免疫抑制作用 ,从而达到预防急性排斥反应的目的。Ⅲ期临床试验结果表明 ,IL 2Rα单抗da clizumab(Zenapax)... 详细信息

IL 2和IL 2R的相互作用在T细胞活化、增殖中起关键作用。IL 2Rα单克隆抗体可以对被同种异体移植物激活的T细胞克隆选择性地产生免疫抑制作用 ,从而达到预防急性排斥反应的目的。Ⅲ期临床试验结果表明 ,IL 2Rα单抗da clizumab(Zenapax)和basiliximab(Simulect)可将同种异体移植肾急性排斥反应的发生率降低 2 7～ 40 % ;并未见明显的毒副作用。

关键词：肾移植白介素2 受体 daclizumab basiximab

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双袖套法大鼠原位肝移植术的改进

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广东医学 2001年第9期22卷 783-785页

作者：汪爽高毅孙尔维古维立陈建锋王瑜田超睿第一军医大学珠江医院肝移植科广州510282 第一军医大学珠江医院血液净化肾移植中心广州510282 广东省广州市第一人民医院肝胆外科 510180 同济医科大学器官移植研究所武汉430030

目的　探讨双袖套法大鼠原位肝移植模型的手术改进方法。方法　采用自制套管 ,供受体SD大鼠均取腹部横切口 ,受体无肝期前预置门静脉缝扎牵引线 ,肝上下腔静脉采用血管膜端端“三定点”吻合法 ,门静脉及肝下下腔静脉采用袖套吻合法 ,用... 详细信息

目的　探讨双袖套法大鼠原位肝移植模型的手术改进方法。方法　采用自制套管 ,供受体SD大鼠均取腹部横切口 ,受体无肝期前预置门静脉缝扎牵引线 ,肝上下腔静脉采用血管膜端端“三定点”吻合法 ,门静脉及肝下下腔静脉采用袖套吻合法 ,用自制“小针钩”排气。结果　行大鼠原位肝移植术 96次 ,其中正式实验 40次。改进后正式实验 ,供体手术时间 2 9min ,袖套准备时间 10min ,受体手术时间 5 1min ,无肝期 17min ;2d存活率 95 % ( 38/ 40 ) ,1周存活率 92 % ( 37/ 40 )。结论　①改进的双袖套法大鼠原位肝移植术可在单人直视下进行 ,安全确切实用。②所有吻合均应无张力、保持原位。

关键词：大鼠肝移植动物模型原位移植双袖套法

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