检索结果-内蒙古大学图书馆

2006国际普通外科论坛暨第十三届全国普外基础与临床进展学术交流大会

作者：曹永宽莫永炎田伏洲薛刚王培红张国虎龚加庆李红乐姜勇成都军区总医院全军普外中心成都610083 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

本文研究了Flag-AWP1重组腺病毒载体的构建及其对人肝癌细胞增殖的影响。文章采用细菌内同源重组法构建flag-AWP1重组腺病毒作为AWP1基因转移工具,探讨了AWP1蛋白的过表达对肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖的作用。

关键词：肝癌细胞细胞增殖腺病毒

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第3期20卷 352-357页

作者：宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTr... 详细信息

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTrack-△TLR4.用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,用脂质体法转染HEK-293细胞进行腺病毒的包装扩增.将重组腺病毒感染CHO-K1细胞,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF-κB激活的影响.酶切及测序表明,TLR4全长及其截断体△TLR4的重组腺病毒载体构建正确.荧光素酶报告基因检测结果表明,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响,Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的NF-κB激活(P＜0.05),Ad-TLR4则使LPS引起的NF-κB活性增强(P＜0.05).LPS对细胞的激活作用依赖于TLR4的结构完整性.

关键词：腺病毒 TLR4基因报告基因 NF-κB

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FRET的理论基础及应用

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中国病理生理杂志 2004年第9期20卷 1721-1724,1738页

作者：孙学刚张丽华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

2001年,和杂志先后公布了人类基因组的工作草图,人类从此进入了功能基因组时代.目前,研究生物大分子,特别是蛋白质的结构、功能、特点及其相互作用已经成为生命科学的工作重点,随着蛋白质研究的进展,一项古老的技术-荧光共振能量转移(fl... 详细信息

2001年,<自然>和<科学>杂志先后公布了人类基因组的工作草图,人类从此进入了功能基因组时代.目前,研究生物大分子,特别是蛋白质的结构、功能、特点及其相互作用已经成为生命科学的工作重点,随着蛋白质研究的进展,一项古老的技术-荧光共振能量转移(fluorescence resonance energy transfer,FRET),在生物学领域又增添了新的活力.

关键词：荧光共振能量转移蛋白质相互作用

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人ARPC2基因的克隆与表达

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第一军医大学学报 2004年第6期24卷 628-630,635页

作者：龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、... 详细信息

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白.结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料.

关键词： ARPC2 载体构建基因表达蛋白纯化

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Rho激酶抑制剂Y - 2 76 32部分预防烧伤血清诱导的内皮屏障功能损害

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中国病理生理杂志 2004年第7期20卷 1157-1162页

作者：郑惠珍黄巧冰赵克森广东医学院生理学教研室广东湛江524023 第一军医大学病理生理教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结... 详细信息

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结构 ,罗丹明 -鬼笔毒环肽荧光染色观察肌动蛋白细胞骨架的改变。通过检测荧光标记白蛋白透过内皮单层的通量分析内皮单层通透性 ,以通透系数Pa表示。结果 :正常内皮细胞生长良好 ,表面有许多凹陷和微绒毛 ,细胞侧面的突起细而长 ,与相邻细胞侧面的小突起相互融合 ,紧密连接。烧伤血清刺激 6h ,细胞表面微绒毛被波浪状皱纹取代 ,细胞侧面突起变短 ,细胞间出现缝隙。正常内皮细胞F -actin主要分布在细胞周边 ,形成周边肌动蛋白丝带 ,在融合的内皮细胞单层 ,周边肌动蛋白丝带相互连接成网状。烧伤血清刺激后 ,肌动蛋白细胞骨架重组 ,出现应力纤维 ,同时周边肌动蛋白丝带模糊 ,内皮单层对白蛋白通透性增高。烧伤血清刺激 6h后 ,加Y - 2 76 32孵育 4 5min ,细胞表面微绒毛与波浪状皱纹并存 ,细胞侧面突起细长 ,与相邻细胞相互融合 ,连接紧密。周边肌动蛋白丝带清晰 ,应力纤维消失。内皮单层Pa值虽较单纯烧伤组低 14 16 % ,但P >0 0 5。细胞用Y - 2 76 32预处理

关键词： Rho激酶烧伤内皮血管通透性

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星形胶质细胞条件培养液对tbOOH致PC12细胞凋亡的抑制作用

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第一军医大学学报 2004年第9期24卷 998-1000页

作者：莫永炎邢飞跃张宝陈瑗姜勇第一军医大学病理生理学教研室暨全军休克微循环重点实验室广东广州510515 暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632 第一军医大学自由基研究室广东广州510515

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流... 详细信息

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化;用巴比妥酸法评估细胞内丙二醛含量的变化。结果tbOOH可诱导PC12细胞凋亡,而星形胶质细胞条件培养液可降低其凋亡;同时,巴比妥酸法显示星形胶质细胞条件培养液可显著性降低PC12细胞丙二醛含量(P<0.05)。结论星形胶质细胞条件培养液有提高PC12细胞抗氧化能力,可抑制活性氧tbOOH诱导的神经细胞凋亡。

关键词：星形胶质细胞条件培养液/抗氧化作用叔丁基脂氢过氧化物 PCI2细胞/凋亡活性氧种

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒对Rf-6A细胞骨架的影响

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生物物理学报 2004年第2期20卷 119-124页

作者：宋革孙学刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病... 详细信息

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体,重组腺病毒质粒经Pac I酶切线性化后,用脂质体法转染293细胞进行腺病毒的包装扩增,用重组腺病毒感染Rf-6A细胞,采用免疫荧光标记方法观察结果.免疫荧光标记结果表明Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的细胞骨架F-actin的解聚与重排,Ad-TLR4则使LPS引起的F-actin应力纤维产生增强.以上结果说明TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染内皮细胞对LPS诱导的细胞骨架变化具有不同的影响,Ad-△TLR4对LPS引起的内皮细胞骨架变化具有抑制作用.

关键词：腺病毒细胞骨架 toll样受体4 脂多糖

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晚期糖基化终产物对血管通透性的影响和作用机制

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中国微循环 2004年第6期8卷 419-422页

作者：郭晓华黄巧冰第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

血管通透性的增高是糖尿病血管并发症的一个标志性事件[1],是其发生的最初表现和导致其他后续改变的病理基础.随着对晚期糖基化终产物(advanc-ed glycation end products,AGEs)及其特异性受体(rece-ptor for advanced glycation end pro... 详细信息

血管通透性的增高是糖尿病血管并发症的一个标志性事件[1],是其发生的最初表现和导致其他后续改变的病理基础.随着对晚期糖基化终产物(advanc-ed glycation end products,AGEs)及其特异性受体(rece-ptor for advanced glycation end products,RAGE)的结构及其病理机制研究的深入,AGEs在血管通透性增高中所起的重要作用引起了广泛的关注,我们就此作一综述.

关键词：晚期糖基化终产物血管通透性作用机制糖尿病血管并发症

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MAPK的细胞内定位与激活后移位机制

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生物化学与生物物理进展 2003年第4期30卷 509-513页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态... 详细信息

信号蛋白的亚细胞定位和激活后移位已成为细胞信号转导研究中的重要内容.MAPK信号通路是真核细胞中的重要信号转导系统.MAPK在细胞中有着相对固定的定位,在适宜的刺激作用下会移位入核并产生相应的生理效应.目前认为,MAPK的磷酸化状态及与其他蛋白质,如上游激酶、磷酸酶和下游底物之间的相互作用,可能在其特异性定位与激活后移位中起作用.MAPK的定位与移位机制的阐明,有助于进一步揭示MAPK的生理功能.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶(MAPK) 亚细胞定位移位磷酸化蛋白质-蛋白质相互作用

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丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)生物学功能的结构基础

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第1期19卷 5-11页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)是生物体内重要的信号转导系统之一,能对广泛的细胞外刺激发生反应.蛋白激酶的空间构象是其功能的重要决定因素.对MAPK蛋白结构的研究表明, MAPK的结构与功能之间具有密切的关系.尽管MAPK各亚族的结构非常相似,但也存在着一些差异,这些差异是不同亚族对不同的细胞外刺激产生特异性反应的结构基础.某些关键性结构,例如Loop 12,在MAPK对上游激酶的作用、下游底物的选择以及亚细胞定位中都具有重要作用.进一步深入研究MAPK的空间结构,探讨MAPK的生物学功能与其空间构象之间的关系,对于开发新的MAPK通路抑制剂用于治疗某些严重疾病有着重要的临床意义.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶,Loop 12,结构-功能关系

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