检索结果-内蒙古大学图书馆

第一军医大学学报 2004年第6期24卷 628-630,635页

作者：龚小卫彭毅刘靖华李志杰邓鹏秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、... 详细信息

目的构建人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中进行表达与纯化,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白.方法采用PCR方法从人肝cDNA文库扩增ARPC2基因编码区,使用常规酶切、连接方法将其重组至pET-14b载体中.对阳性克隆进行酶切、PCR和测序鉴定.转化BL21(DE3)大肠杆菌株,用异丙基β-D硫代半乳糖(IPTG)诱导融合蛋白表达,并利用Ni-NTA亲和层析纯化该融合蛋白.结果所构建的人ARPC2的His融合蛋白表达载体是正确的,该载体可在大肠杆菌内高效表达,用Ni-NTA纯化获得了相对分子质量约36000的融合蛋白.结论成功构建了人His-ARPC2融合蛋白表达载体,并在原核细胞中获得了高效表达和纯化,为进一步研究ARPC2的生理功能提供了重要的实验材料.

关键词： ARPC2 载体构建基因表达蛋白纯化

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一种从琼脂糖凝胶上回收DNA的高效、快捷、经济的方法

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细胞生物学杂志 2000年第4期22卷 219-222页

作者：姜勇刘杰陈伟明第一军医大学病理生理教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

目前在国内分子生物学实验室所采用的多种从琼脂糖凝胶上回收DNA的方法普遍存在着各种问题。本文介绍一种新的从琼脂糖凝胶上分离和提取DNA简易装置。实验表明用这种装置回收DNA具有高效、快捷和经济的优点,非常适合在国内实验室普及推广。

关键词：琼脂糖凝胶 DNA 回收方法

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丝裂原活化蛋白激酶信号传导系统

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第一军医大学学报 1999年第1期19卷 59-62页

作者：姜勇刘爱华赵克森第一军医大学病理生理教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者。多种细胞生理过程，如生长、发育、分裂、死亡、以及细胞间的功能同步化等都涉及到ＭＡＰＫ信号传导通路的调节。已证实，在哺乳动物细胞存在多条ＭＡＰ... 详细信息

丝裂原活化蛋白激酶（ＭＡＰＫ）是信号从细胞表面传导到细胞核内部的重要传递者。多种细胞生理过程，如生长、发育、分裂、死亡、以及细胞间的功能同步化等都涉及到ＭＡＰＫ信号传导通路的调节。已证实，在哺乳动物细胞存在多条ＭＡＰＫ传导通路。９０年代初在哺乳动物细胞发现ＥＲＫ介导生长因子有关的刺激引起的细胞反应。近年来又发现和克隆了ＪＮＫ、ｐ３８、ＥＲＫ５（ＢＭＫ１）三个新的ＭＡＰＫ亚族。这些新的ＭＡＰＫ介导了物理、化学应激、细菌产物、炎性细胞因子等多种刺激引起的细胞反应。ＭＡＰＫ通路并非单一的传导通路，而是代表了对不同刺激引起特定细胞生理反应的一种普遍机制。

关键词：信号传导丝裂原活化蛋白激酶 MAPK 啤酒酵母

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Toll样受体的发现及其研究进展

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中国危重病急救医学 2003年第11期15卷 694-697页

作者：李志杰刘靖华姜勇第一军医大学病理生理教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

Toll样受体(Toll like receptor, TLR)和内毒素(即脂多糖,lipopolysaccharide,LPS)的发现使人们对天然免疫系统有了进一步的认识,并且在LPS信号跨膜转导方面也有了突破性的进展.早期人们将病原微生物的感染称为脓毒症(sepsis).20世纪人... 详细信息

Toll样受体(Toll like receptor, TLR)和内毒素(即脂多糖,lipopolysaccharide,LPS)的发现使人们对天然免疫系统有了进一步的认识,并且在LPS信号跨膜转导方面也有了突破性的进展.早期人们将病原微生物的感染称为脓毒症(sepsis).20世纪人们发现几乎所有的革兰阴性菌都表达内毒素,至40年代Shear阐明了大肠内毒素的LPS特征,之后Luderitz等又确定了内毒素的详细分子结构,80年代已经完成了LPS膜相关部分类脂A的化学合成.至今为止,尽管人们对LPS的作用和结构有了较明确的认识,但对LPS如何发挥作用了解并不多.起初人们普遍认为LPS可能通过插入到生物膜或通过细胞表面多个受体发挥作用 ,但是某一受体突变就能消除对LPS的反应否定了上述看法,认为LPS信号可能必须由某一基因产物介导才能发挥作用,这一基因最后被称为Lps.

关键词： Toll样受体内毒素信号转导

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Rho激酶抑制剂Y - 2 76 32部分预防烧伤血清诱导的内皮屏障功能损害

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中国病理生理杂志 2004年第7期20卷 1157-1162页

作者：郑惠珍黄巧冰赵克森广东医学院生理学教研室广东湛江524023 第一军医大学病理生理教研室全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结... 详细信息

目的 :观察大鼠烧伤血清对内皮屏障功能的影响及Rho激酶特异抑制剂Y - 2 76 32的作用。方法 :原代培养的大鼠皮肤微血管内皮细胞按实验分组分别用大鼠对照血清、烧伤血清、Y - 2 76 32单独处理或联合处理。用扫描电镜观察细胞表面超微结构 ,罗丹明 -鬼笔毒环肽荧光染色观察肌动蛋白细胞骨架的改变。通过检测荧光标记白蛋白透过内皮单层的通量分析内皮单层通透性 ,以通透系数Pa表示。结果 :正常内皮细胞生长良好 ,表面有许多凹陷和微绒毛 ,细胞侧面的突起细而长 ,与相邻细胞侧面的小突起相互融合 ,紧密连接。烧伤血清刺激 6h ,细胞表面微绒毛被波浪状皱纹取代 ,细胞侧面突起变短 ,细胞间出现缝隙。正常内皮细胞F -actin主要分布在细胞周边 ,形成周边肌动蛋白丝带 ,在融合的内皮细胞单层 ,周边肌动蛋白丝带相互连接成网状。烧伤血清刺激后 ,肌动蛋白细胞骨架重组 ,出现应力纤维 ,同时周边肌动蛋白丝带模糊 ,内皮单层对白蛋白通透性增高。烧伤血清刺激 6h后 ,加Y - 2 76 32孵育 4 5min ,细胞表面微绒毛与波浪状皱纹并存 ,细胞侧面突起细长 ,与相邻细胞相互融合 ,连接紧密。周边肌动蛋白丝带清晰 ,应力纤维消失。内皮单层Pa值虽较单纯烧伤组低 14 16 % ,但P >0 0 5。细胞用Y - 2 76 32预处理

关键词： Rho激酶烧伤内皮血管通透性

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从全身炎症反应综合征到脓毒性休克

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中国危重病急救医学 2002年第8期14卷 500-503页

作者：郭爱华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

脓毒症(sepsis)是由感染所致的临床综合征,表现为发热或低热、白细胞增多或减少、心动过速、呼吸急促等[1].由严重的细菌感染所引起的脓毒症迄今仍然是世界范围内非心脏病重症监护患者的首位死亡原因[2].据统计,在美国,每年有逾40万例... 详细信息

脓毒症(sepsis)是由感染所致的临床综合征,表现为发热或低热、白细胞增多或减少、心动过速、呼吸急促等[1].由严重的细菌感染所引起的脓毒症迄今仍然是世界范围内非心脏病重症监护患者的首位死亡原因[2].据统计,在美国,每年有逾40万例脓毒症患者,病死率可达35%以上[3].预计未来脓毒症的发生将有进一步增加的趋势.下面试就脓毒症发病机制和治疗方面取得的一些新理论和新进展进行综述.

关键词：全身炎症反应脓毒症患者重症监护患者心动过速细菌感染死亡原因非心脏病发病机制病死率白细胞治疗统计面试美国临床理论呼吸发热低热

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p38 MAPK在LPS诱导内皮细胞表达ICAM-1中的作用

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中华烧伤杂志 2001年第1期17卷 32-35页

作者：闫文生姜勇黄巧冰王静珍赵克森第一军医大学病理生理学教研室(全军休克微循环重点实验室) 广州510515

目的研究p38丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号转导通路在脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达细胞间粘附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法脐静脉内皮细胞培养后分为两组：（1）刺激组，设不同时相点分别用LPS刺激内皮细胞... 详细信息

目的研究p38丝裂原激活蛋白激酶（MAPK）信号转导通路在脂多糖（LPS）诱导人脐静脉内皮细胞（HUVEC）表达细胞间粘附分子-1（ICAM-1）中的作用。方法脐静脉内皮细胞培养后分为两组：（1）刺激组，设不同时相点分别用LPS刺激内皮细胞；（2）预处理组，在LPS刺激前2 h，用SB203580预处理内皮细胞。观察ICAM-1蛋白和mRNA表达的变化，检测内皮细胞p38 MAPK活性变化。结果 LPS剌激后，内皮细胞表面ICAM-1分子在8～36 h显著增加，胞浆中mRNA在2 h即有显著增加；LPS刺激HUVEC后15 min，p38 MAPK 活性即有升高，30～60 min达高峰。p38抑制剂SB203580可显著抑制LPS的诱导作用。结论 LPS 可能通过激活p38 MAPK信号转导通路，调节HUVEC的ICAM-1基因和蛋白表达。

关键词： p38MAPK LPS 内皮细胞 ICAM-1 p38丝裂原激活蛋白激酶细胞间粘附分子1 脂多糖休克

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人Toll样受体4胞浆内段融合蛋白表达载体的构建与表达

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中国危重病急救医学 2003年第3期15卷 163-166页

作者：刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质... 详细信息

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。

关键词： Toll样受体融合蛋白蛋白表达

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BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

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中国病理生理杂志 2003年第4期19卷 438-442,T001页

作者：李红乐李浩威邢飞跃孙学刚邓宇斌张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDN... 详细信息

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。

关键词： BDNF 重组腺病毒构建大鼠骨髓间质干细胞表达增强型绿色荧光蛋白基因融合脑源性神经营养因子

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丝裂原活化蛋白激酶通路对脂多糖诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α基因表达的协同调节作用

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中华医学杂志 2002年第20期82卷 1410-1414页

作者：姜勇刘爱华秦清和殷志敏 510515 广州第一军医大学病理生理教研室全军休克微循环重点实验室南方医院呼吸内科南京师范大学生命科学学院

目的探讨脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的协同调节作用及其分子机制.方法用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264.7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合... 详细信息

目的探讨脂多糖(LPS)诱导RAW264.7细胞肿瘤坏死因子α(TNF-α)基因表达过程中丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路的协同调节作用及其分子机制.方法用蛋白激酶活性测定分析LPS刺激RAW264.7细胞引起的激酶活性变化;用报告基因技术和反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法研究LPS诱导的TNF-α基因转录的分子机制.结果 LPS刺激RAW264.7细胞可引起细胞外信号调节激酶1(ERK1)、c-Jun氨基末端激酶1(JNK1)和p38 MAPK的一过性激活;用MAPK上游激酶的活性突变体分别转染RAW264.7均可不同程度地诱导TNF-α启动子转录活性;而且,这些MAPK通路激活诱导的TNF-α启动子转录活性表现出明显的协同效应;三种MAPK的无活性突变体均显示出对LPS刺激引起的TNF-α启动子转录激活的抑制效应;RT-PCR的结果证实,ERK、JNK和p38 MAPK的特异性抑制剂对TNF-α mRNA表达具有不同程度的抑制作用.结论 LPS刺激引起的TNF-α启动子转录活性增加,可能涉及了ERK、p38和JNK三条通路的激活;这些通路通过协同效应共同发挥对TNF-α基因表达的调控.

关键词：蛋白激酶类脂多糖类肿瘤坏死因子基因表达调控

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