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中国药理学通报 2001年第6期17卷 628-631页

作者：莫永炎陈瑗周玫姜勇第一军医大学病理生理学教研室暨全军休克微循环重点实验室广州510515 第一军医大学自由基医学研究室广州510515

目的　探讨中药云芝多糖对脑、肝组织抗氧化作用的影响及机制。方法　以SD大鼠和昆明小鼠为动物模型 ,采用Fe H2 O2 诱导大脑皮层组织和肝组织匀浆的脂氢过氧化反应及黄嘌呤氧化酶体系释放自由基超氧阴离子 (O·2 ) ,以改良的邻苯... 详细信息

目的　探讨中药云芝多糖对脑、肝组织抗氧化作用的影响及机制。方法　以SD大鼠和昆明小鼠为动物模型 ,采用Fe H2 O2 诱导大脑皮层组织和肝组织匀浆的脂氢过氧化反应及黄嘌呤氧化酶体系释放自由基超氧阴离子 (O·2 ) ,以改良的邻苯三酚自氧化法、DNTB直接法测定脑组织抗氧化酶活性及原位杂交法检测脑组织硒谷胱甘肽过氧化物酶 (SeG Px)mRNA表达。结果　云芝多糖有提高脑组织超氧化物歧化酶 (SOD)、SeGPx和非硒谷胱甘肽过氧化物酶 (non SeGPx)抗氧化酶活性 ,增加SeGPxmRNA表达 ,降低脑、肝组织Fe H2 O2 引发的脂氢过氧化反应和黄嘌呤氧化酶体系产生的O·2 。结论　云芝多糖可提高鼠大脑皮层、肝组织的抗氧化作用 ,对开发应用多糖类药物防治神经系统疾病。

关键词：云芝多糖大脑皮层抗氧化作用肝组织药物

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脑星形胶质细胞生物学功能研究进展

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生理科学进展 2002年第1期33卷 71-73页

作者：莫永炎姜勇陈瑗第一军医大学病理生理学教研室暨全军休克微循环重点实验室广州510515 第一军医大学自由基医学研究室广州510515

脑星形胶质细胞是中枢神经系统 (CNS)内在数目占绝对优势的一类大胶质细胞 ,被认为在神经元的整个发育过程中起重要作用。本文主要就参与星形胶质细胞调节神经元活动的主要功能分子 ,星形胶质细胞在中枢神经系统的生物学功能。

关键词：星形胶质细胞神经元中枢神经系统生物学功能脑

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肿瘤坏死因子α通过丝裂原活化蛋白激酶激酶6诱导LA795肺腺癌细胞凋亡

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中华结核和呼吸杂志 2003年第2期26卷 88-92页

作者：刘爱华邓鹏姜勇第一军医大学南方医院呼吸科广州510515 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedprotei... 详细信息

目的　为了研究肿瘤坏死因子α(TNF α)诱导肺癌细胞凋亡的分子机制 ,寻找肺癌基因治疗的新方法。方法　建立TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡的细胞模型 ;使用人胚肾 2 93包装细胞制备丝裂原活化蛋白激酶激酶 6 (mitogen activatedproteinkinasekinase 6 ,MKK6 )及其结构活性和无活性突变体的重组腺病毒 ;使用激酶活性测定法检测细胞内MKK6的激酶活性。结果　TNF α刺激可明显诱导LA795肺腺癌细胞MKK6激活 ;用TNF α刺激肺腺癌细胞可明显诱导细胞凋亡 ;MKK6结构活性突变体也可明显诱导LA795细胞凋亡 ;而MKK6无活性突变体可明显抑制TNF α诱导的LA795细胞凋亡。结论　TNF α诱导LA795肺腺癌细胞凋亡是通过MKK6发挥作用的。

关键词：肿瘤坏死因子α 丝裂原活化蛋白激酶肺腺癌细胞凋亡

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒的制备和功能鉴定

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中国生物化学与分子生物学报 2004年第3期20卷 352-357页

作者：宋革孙学刚秦清和邓鹏刘靖华姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTr... 详细信息

制备脂多糖(LPS)Toll样受体4(TLR4)全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(ATLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒并鉴定其功能.用PCR方法扩增TLR4及△TLR4基因片段,酶切后亚克隆至腺病毒穿梭质粒中,形成带有目的基因的穿梭载体pAdTrack-TLR4和pAdTrack-△TLR4.用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体中;将重组腺病毒质粒用PacⅠ酶切线性化后,用脂质体法转染HEK-293细胞进行腺病毒的包装扩增.将重组腺病毒感染CHO-K1细胞,采用荧光毒酶报告基因方法检测其对LPS诱导NF-κB激活的影响.酶切及测序表明,TLR4全长及其截断体△TLR4的重组腺病毒载体构建正确.荧光素酶报告基因检测结果表明,TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染细胞对LPS诱导的反应具有不同的影响,Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的NF-κB激活(P＜0.05),Ad-TLR4则使LPS引起的NF-κB活性增强(P＜0.05).LPS对细胞的激活作用依赖于TLR4的结构完整性.

关键词：腺病毒 TLR4基因报告基因 NF-κB

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微元素粉末对炎症介质介导的猪冠状循环微静脉高通透性的影响

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中国病理生理杂志 1998年第6期14卷 707-710页

作者：黄巧冰赵克森第一军医大学病理生理教研室解放军休克微循环重点实验室

目的：本实验旨在观察微元素粉末对炎症介质介导的猪冠状循环微静脉高通透性的影响。方法：利用微血管分离和插管技术，在严格控制微静脉跨膜压力、流量和渗透压的前提下，测量了微静脉对ＦＩＴＣ荧光白蛋白的通透性及微元素粉末对其的... 详细信息

目的：本实验旨在观察微元素粉末对炎症介质介导的猪冠状循环微静脉高通透性的影响。方法：利用微血管分离和插管技术，在严格控制微静脉跨膜压力、流量和渗透压的前提下，测量了微静脉对ＦＩＴＣ荧光白蛋白的通透性及微元素粉末对其的影响。结果：微元素粉末对炎症介质组胺介导的高通透性有明显的抑制作用，通透系数（１０－６ｃｍ／ｓ，下同）从９３２±１５６下降到４３８±０６。微元素粉末可使一氧化氮（ＮＯ）供体硝普钠和蛋白激酶Ｃ（ＰＫＣ）激活剂佛波酯醇导致的微静脉通透系数分别从１０１０±１８７下降到４１３±０２４和从８３８±１１０下降到４７３±０６７（Ｐ＜００５）。结论：微元素粉末可能通过阻断ＮＯ和ＰＫＣ信息传导通路。

关键词：一氧化氮炎症介质血管通透性微元素粉末

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Retro-Tet:一种基于逆转录病毒的诱导性基因表达系统

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中国生物化学与分子生物学报 2001年第4期17卷 420-424页

作者：龚小卫姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

Retro-Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开/关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统.该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet-off/Tet-on基因表达系统的优点,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功... 详细信息

Retro-Tet基因表达系统是一种新型的高效、稳定、无毒、具有严密开/关功能的可诱导性真核细胞基因表达系统.该系统兼备了逆转录病毒基因表达系统和Tet-off/Tet-on基因表达系统的优点,在稳定表达细胞系的筛选、基因的表达与调控及基因功能研究等方面得到了成功的应用,同时也为基因治疗提供了一种理想的基因载体系统.

关键词：诱导性基因表达系统基因调控基因治疗

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带Tat标记质粒载体的构建及其转导融合蛋白进入细胞的研究

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第3期19卷 354-358页

作者：孙学刚宋革刘靖华李红乐邢飞跃张丽华秦清和姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat... 详细信息

采用点突变技术构建了带6×His、Tat和Flag多个标记的pET-HTF的质粒载体,利用基因重组技术构建pET-HTF-EGFP融合蛋白载体.酶切和DNA测序证明,所构建的pET-HTF和pET-HTF-EGFP载体正确.BL21(DE3)表达融合蛋白,用Ni2+分离柱纯化His-Tat-Flag-EGFP蛋白,并加入培养的NIH3T3细胞.荧光显微镜观察显示,His-Tat-Flag-EGFP融合蛋白进入细胞.带His、Tat和Flag标记的质粒载体pET-14b-HTF表达的融合蛋白能够进入细胞,该载体为进行蛋白质功能研究和基因治疗研究提供了一个重要工具.

关键词： Tat 蛋白转导增强型绿色荧光蛋白

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人GST-AWP1融合蛋白的原核表达及其抗体制备

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中国生物化学与分子生物学报 2003年第2期19卷 168-172页

作者：莫永炎刘亚伟王静珍邓鹏秦清和杨志刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1c... 详细信息

为进一步研究人的一新蛋白———蛋白激酶C相关激酶 1相关蛋白 (AWP1)的结构、功能及与其相互作用的蛋白而进行GST AWP融合蛋白表达载体的构建、原核表达、纯化及其抗体的制备 .采用逆转录PCR(RT PCR)法从人ECV30 4内皮细胞中扩增AWP1cDNA编码区 ,并将其重组于谷胱甘肽硫转移酶 (GST)融合蛋白表达质粒pGEX KG中 .经酶切、序列鉴定分析后 ,用该重组质粒转化大肠杆菌BL2 1,并经异丙基 β D 硫代半乳糖苷 (IPTG)诱导产生GST AWP1融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 5 6kD的融合蛋白 .将此融合蛋白免疫新西兰兔 ,经ELISA和Western印迹检测获得了效价高、免疫活性强的兔抗人多克隆抗体 .结果表明成功构建了GST AWP1融合蛋白表达载体 ,在大肠杆菌高效表达了GST AWP1融合蛋白 ,并获得高效多抗。

关键词：信号传导分子蛋白激酶C相关激酶1相关蛋白原核表达制备 GST-AWP1融合蛋白多克隆抗体

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用T7噬菌体展示筛选系统筛选与p38相结合的蛋白

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第一军医大学学报 2003年第11期23卷 1131-1133页

作者：李志杰刘靖华龚小卫秦清和黄浩邓鹏王静珍孙学刚赵善超刘亚伟赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用... 详细信息

目的用T7噬菌体筛选系统筛选与重要信号分子p38 MAPK结合的蛋白。方法以p38 MAPK为靶蛋白,分别用不同的介质(ELISA平板和Ni-NTA亲和树脂)筛选T7人肝和人肺cDNA文库。结果选择86个第4轮筛选后的洗脱噬菌体单个噬斑克隆,经EDTA处理后利用特异性PCR引物扩增插入片断,回收PCR产物并进行测序,将所得到的序列用BLAST软件搜索GenBank中的同源序列,得到了46个编码蛋白的序列。结论T7噬菌体展示筛选系统筛选新的结合蛋白简单、快速、有效。

关键词： T7噬菌体筛选 p38 结合蛋白靶蛋白

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p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体的构建及表达

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第一军医大学学报 2002年第2期22卷 171-173页

作者：龚小卫秦清和王静珍姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒... 详细信息

目的构建在哺乳动物细胞中表达的p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)红色荧光蛋白(RFP)融合表达载体.方法将克隆在pcDNA3上的FLAG标记的p38 MAPK亚克隆到红色荧光蛋白载体pDsRed1-N1上,随后转染HeLa细胞.在荧光显微镜下观察结果.结果重组质粒经酶切、PCR和测序证明正确无误,并在HeLa细胞中得到高量表达.融合蛋白发出的红色荧光表明p38 MAPK弥散分布于细胞质中,细胞核中也有一定的分布.结论成功构建了p38 MAPK红色荧光蛋白融合载体,该载体能在哺乳动物细胞中进行表达,为研究p38MAPK的细胞内定位提供了一个重要的工具.

关键词：丝裂原活化蛋白激酶红色荧光蛋白载体构建基因表达

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