检索结果-内蒙古大学图书馆

中国危重病急救医学 2003年第3期15卷 163-166页

作者：刘靖华孙学刚李志杰秦清和龚小卫邓鹏刘亚伟王静珍赵克森姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质... 详细信息

目的 :构建人 Toll样受体 4胞浆内段 ( h TL R4C) His融合蛋白表达载体并在原核表达与纯化 ,以研究其功能及鉴定与其相互作用的蛋白。方法 :采用 PCR方法扩增 h TL R4基因编码区的胞浆内段 ,并将其重组于 p ET Dsb A2 .0载体中。重组质粒经酶切、序列鉴定分析后 ,转化大肠杆菌 BL 2 1( DE3)。结果 :用异丙基β D硫代半乳糖 ( IPTG)诱导产生 h TL R4胞浆内段的 His Dsb A融合蛋白 ,继而纯化获得了分子量约 42 kd的融合蛋白。结论 :本研究成功地构建了 h TL R4胞浆内段融合蛋白表达载体并获得高效表达 ,为进一步研究提供了重要的实验材料。

关键词： Toll样受体融合蛋白蛋白表达

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BDNF重组腺病毒的构建及在大鼠骨髓间质干细胞的表达

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中国病理生理杂志 2003年第4期19卷 438-442,T001页

作者：李红乐李浩威邢飞跃孙学刚邓宇斌张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDN... 详细信息

目的 :利用大肠杆菌细菌内同源重组构建带有增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因的脑源性神经营养因子前体 (proBDNF)和脑源性神经营养因子 (BDNF)重组腺病毒并在大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC)高效表达。方法 :采用两步亚克隆的方法将proBDNF和BDNF构建入带有EGFP表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack -CMV中 ,形成转移载体pAdTrack -proBDNF和pAdTrack -BDNF ,采用化学转化法在大肠杆菌BJ5 183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy- 1同源重组 ,得到重组腺病毒载体pAd -proBDNF和pAd -BDNF ;转染 2 93细胞 ,包装成重组病毒颗粒 ;将重组病毒上清感染rMSC ,用荧光显微镜下观察和Western -blotting鉴定重组病毒在rMSC表达 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC在体外诱导向神经样细胞分化 ;用Ad -proBDNF和Ad -BDNF的感染的rMSC接种于裸鼠肌肉内 ,两周后荧光显微镜下直接观察。结果 :成功地构建了proBDNF和BDNF重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒 ,重组病毒能在体外培养的rMSC高效表达并不影响其分化潜能 ,体内移植实验表明Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC能在体内表达。结论 :重组腺病毒具有较高的介导proBDNF和BDNF基因表达于rMSC的效率 ,带有报告基因EGFP的Ad -proBDNF和Ad -BDNF感染的rMSC可以用于体内移植实验。

关键词： BDNF 重组腺病毒构建大鼠骨髓间质干细胞表达增强型绿色荧光蛋白基因融合脑源性神经营养因子

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监测氧运输功能在休克防治中的意义

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中国病理生理杂志 1996年第2期12卷 216-219页

作者：赵克森第一军医大学病理生理学教研室中国人民解放军休克微循环重点实验室

监测氧运输功能在休克防治中的意义第一军医大学病理生理学教研室（广州５１０５１５）赵克森中国人民解放军休克微循环重点实验室Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｘｙｇｅｎｄｅｌｉｖｅｒｙｆｕｎｃｔｉｏ... 详细信息

监测氧运输功能在休克防治中的意义第一军医大学病理生理学教研室（广州５１０５１５）赵克森中国人民解放军休克微循环重点实验室Ｔｈｅｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆｍｏｎｉｔｏｒｉｎｇｏｘｙｇｅｎｄｅｌｉｖｅｒｙｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｔｈｅｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎａ...

关键词：休克防治氧运输能力

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应用细菌同源重组法快速构建和制备重组腺病毒

引用

中国病理生理杂志 2002年第11期18卷 1451-1454页

作者：李红乐秦清和王静珍邓鹏李树浓姜勇第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515 中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515 中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080

目的:利用大肠杆菌细菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度重组病毒.方法:自细胞周期相关激酶真核表达载体pCR3.1-CCRK中酶切出CCRK基因,亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形... 详细信息

目的:利用大肠杆菌细菌同源重组构建重组腺病毒载体并在293细胞制备高滴度重组病毒.方法:自细胞周期相关激酶真核表达载体pCR3.1-CCRK中酶切出CCRK基因,亚克隆至带有增强型绿色荧光蛋白(EGFP)表达盒的腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,形成转移质粒pAdTrack-CMV-CCRK, 采用电穿孔或化学转化法在大肠杆菌BJ5183内与腺病毒骨架质粒pAdEasy-1同源重组,得到重组腺病毒载体pAd-CCRK.以pAd-CCRK为模板,经DNA测序正确后,用PacI酶切线性化pAd-CCRK,转染293细胞,包装成重组病毒颗粒,荧光显微镜观察转染细胞EGFP的表达,采用PCR的方法对重组腺病毒进行鉴定.将重组病毒上清感染RAW细胞,荧光显微镜下观察感染细胞重组病毒的表达.结果:成功地构建了携带CCRK基因的重组腺病毒载体并制备出高滴度重组病毒,重组病毒能在体外高效表达.结论:应用细菌内同源重组能够快速构建腺病毒载体,可高效制备均一的高滴度重组病毒,为CCRK基因功能的研究奠定了基础.

关键词：腺病毒同源重组荧光蛋白

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腺病毒介导的EGFP基因在大鼠骨髓间质干细胞中的高效表达

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中国病理生理杂志 2003年第3期19卷 293-296,T002页

作者：李红乐邢飞跃孙学刚曹永宽宋革张秀明姜勇李树浓中山大学中山医学院病理生理学教研室广东广州510080 第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (p... 详细信息

目的 :研究复制缺陷型腺病毒感染骨髓间质干细胞介导外源基因表达的可行性及感染效率。方法 :在体外低密度扩增大鼠骨髓间质干细胞 (rMSC) ,用细菌同源重组法构建巨细胞病毒 (CMV)驱动的增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)报告基因腺病毒载体 (pAd -EGFP) ,用 2 93包装细胞制备腺病毒 ,用EGFP重组腺病毒感染rMSC ,观察重组腺病毒携带基因在MSC中的感染和表达情况 ,用细胞计数法和流式细胞仪分析感染效率。用血清撤离加入 β -巯基乙醇诱导Ad -EGFP感染的rMSC向神经样细胞定向分化。结果 :Ad -EGFP可高效感染rMSC ,感染率为 (3 6±2 ) % ,而脂质体法转染质粒pTrack -GFP在rMSC转染效率非常低且不易成功 ;Ad -EGFP感染后的不同扩增代数的rMSC在受到 β -巯基乙醇的诱导分化后在荧光显微镜下呈典型的突触形式。免疫组化鉴定发现这些诱导细胞表达神经元特异烯醇化酶 (NSE) ,表明腺病毒介导外源基因转染后rMSC仍具有分化为神经样细胞的潜能。结论 :腺病毒载体具有较高的介导外源基因表达于rMSC的效率。

关键词： EGFP基因大鼠骨髓间质干细胞腺病毒感染

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星形胶质细胞条件培养液对tbOOH致PC12细胞凋亡的抑制作用

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第一军医大学学报 2004年第9期24卷 998-1000页

作者：莫永炎邢飞跃张宝陈瑗姜勇第一军医大学病理生理学教研室暨全军休克微循环重点实验室广东广州510515 暨南大学生殖免疫研究中心广东广州510632 第一军医大学自由基研究室广东广州510515

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流... 详细信息

目的探讨星形胶质细胞条件培养液对活性氧叔丁基脂氢过氧化物tbOOH诱导的PC12细胞凋亡的影响。方法以分离、纯化的SD大鼠大脑皮层星形胶质细胞制备的条件培养液培养tbOOH应激的PC12细胞,采用荧光显微镜和透射电镜形态观察细胞凋亡;用流式细胞术测定细胞凋亡率的变化;用巴比妥酸法评估细胞内丙二醛含量的变化。结果tbOOH可诱导PC12细胞凋亡,而星形胶质细胞条件培养液可降低其凋亡;同时,巴比妥酸法显示星形胶质细胞条件培养液可显著性降低PC12细胞丙二醛含量(P<0.05)。结论星形胶质细胞条件培养液有提高PC12细胞抗氧化能力,可抑制活性氧tbOOH诱导的神经细胞凋亡。

关键词：星形胶质细胞条件培养液/抗氧化作用叔丁基脂氢过氧化物 PCI2细胞/凋亡活性氧种

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晚期糖基化终产物受体的结构和功能

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生理科学进展 2003年第1期34卷 71-73页

作者：赵善超侯凡凡姜勇第一军医大学南方医院肾内科和中国人民解放军肾脏病研究所第一军医大学病理生理学教研室和全军休克微循环重点实验室广州510515

晚期糖基化终产物受体 (RAGE)是一种膜蛋白 ,属于免疫球蛋白家族 ,由 4 0 0多个氨基酸组成 ,分子量为 35kD ,分胞外段、跨膜段和胞内段 ,在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达。RAGE作为信... 详细信息

晚期糖基化终产物受体 (RAGE)是一种膜蛋白 ,属于免疫球蛋白家族 ,由 4 0 0多个氨基酸组成 ,分子量为 35kD ,分胞外段、跨膜段和胞内段 ,在单核巨噬细胞、血管内皮细胞、肾系膜细胞、神经细胞及平滑肌细胞等细胞中普遍表达。RAGE作为信号转导受体介导晚期糖基化终产物 (AGE)和其配体在细胞表面结合 ,激活细胞内多种信号转导机制 ,在糖尿病慢性并发症、透析相关性淀粉样变 (DRA)、阿尔采末病 (AD)、动脉粥样硬化等疾病发生中起重要作用。对RAGE结构和功能的认识可能为这些疾病的防治提供新的靶位。

关键词：晚期糖基化终产物受体结构-功能研究信号转导

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Messl的结构分析和功能研究

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中国生物化学与分子生物学报 2000年第4期16卷 494-498页

作者：姜勇刘爱华韩家淮第一军医大学病理生理教研室和全军休克微循环重点实验室广州 510515 美国Scripps研究所免疫学系加州 92037

Messl是新近鉴定的STE20家族的蛋白激酶.对Messl的基因表达和蛋白功能进行研究,发现其mRNA在鼠组织中广泛分布,但在不同细胞系中表达显著不同;结构分析表明,MeSSl蛋白N端是保守的STE20样激酶催化区,C端是高度亲水的酸性调节区,包含多个... 详细信息

Messl是新近鉴定的STE20家族的蛋白激酶.对Messl的基因表达和蛋白功能进行研究,发现其mRNA在鼠组织中广泛分布,但在不同细胞系中表达显著不同;结构分析表明,MeSSl蛋白N端是保守的STE20样激酶催化区,C端是高度亲水的酸性调节区,包含多个潜在的丝氨酸/苏氨酸磷酸化调节位点.哺乳动物细胞表达的MeSSl对MBP显示出激酶活性,并发生自主磷酸化.essl可被砷酸盐应激激活,但丝裂原EGF刺激无活化效应.表明Messl可能在蛋白磷酸化的早期过程中发挥作用,介导细胞对严重应激刺激引起的特异性反应.

关键词： STE20 蛋白激酶信号转导

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TLR4全长及其截断体重组腺病毒对Rf-6A细胞骨架的影响

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生物物理学报 2004年第2期20卷 119-124页

作者：宋革孙学刚姜勇第一军医大学病理生理学教研室全军休克微循环重点实验室广州510515

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病... 详细信息

为了研究LPS受体TLR4全长及其胞内段缺失的TLR4截断体(△TLR4)的绿色荧光蛋白重组腺病毒对内皮细胞系Rf-6A骨架蛋白的影响,采用PCR方法扩增目的基因片段,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack中,用BJ5183细菌同源重组法将目的基因重组于腺病毒骨架载体,重组腺病毒质粒经Pac I酶切线性化后,用脂质体法转染293细胞进行腺病毒的包装扩增,用重组腺病毒感染Rf-6A细胞,采用免疫荧光标记方法观察结果.免疫荧光标记结果表明Ad-△TLR4明显抑制了LPS引起的细胞骨架F-actin的解聚与重排,Ad-TLR4则使LPS引起的F-actin应力纤维产生增强.以上结果说明TLR4全长及其截断体的重组腺病毒感染内皮细胞对LPS诱导的细胞骨架变化具有不同的影响,Ad-△TLR4对LPS引起的内皮细胞骨架变化具有抑制作用.

关键词：腺病毒细胞骨架 toll样受体4 脂多糖

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钙依赖粘附素生理功能研究进展

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国外医学（生理病理科学与临床分册） 2000年第4期20卷 263-266页

作者：闫文生姜勇第一军医大学病理生理教研室和全军休克微循环重点实验室广东广州510515

钙依赖粘附素是细胞之间粘附连接的重要组成分子 ,在发育及成年机体的组织结构中起着重要作用。钙依赖粘附素细胞外段决定其结合的特异性 ,其胞浆尾段与胞浆相关蛋白及细胞骨架的相互作用和联系对完整的生理性粘附也必不可少。粘附连接... 详细信息

钙依赖粘附素是细胞之间粘附连接的重要组成分子 ,在发育及成年机体的组织结构中起着重要作用。钙依赖粘附素细胞外段决定其结合的特异性 ,其胞浆尾段与胞浆相关蛋白及细胞骨架的相互作用和联系对完整的生理性粘附也必不可少。粘附连接的调节涉及到钙依赖粘附素的量和质变化 ;此外 ,钙依赖粘附素连环素复合体参与信号转导过程 ,并影响组织的结构和功能。

关键词：钙依赖粘附素粘附连接信号传递胞浆相关蛋白

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