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海军军医大学学报 2024年第4期45卷 441-447页

作者：奚潇雨刘英连志兰陆峰海军军医大学(第二军医大学)药学系药物分析学教研室上海200433 上海理工大学健康科学与工程学院上海200093

目的建立基于荧光染料噻唑橙和核酸适配体45e-1的非标记型适配体传感器,以快速、灵敏地检测石房蛤毒素(STX)。方法将50 nmol/L 45e-1溶解在缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、2.5 mmol/L MgCl_(2)、5 mmol/L KCl,pH=7.5)中,... 详细信息

目的建立基于荧光染料噻唑橙和核酸适配体45e-1的非标记型适配体传感器,以快速、灵敏地检测石房蛤毒素(STX)。方法将50 nmol/L 45e-1溶解在缓冲液(20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、2.5 mmol/L MgCl_(2)、5 mmol/L KCl,pH=7.5)中,在95℃水浴中加热10 min,冰水浴中冷却5 min。随后加入STX标准溶液,充分混匀,室温孵育10 min后。再加入噻唑橙溶液,添加缓冲液使反应体系体积为100μL,充分混合后室温孵育2 min。最后在496 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果当噻唑橙与45e-1的摩尔浓度比为5∶1、噻唑橙与45e-1的孵育时间为2 min、STX与45e-1的孵育时间为10 min、Mg^(2+)的浓度为2.5 mmol/L、K^(+)的浓度为5 mmol/L时,反应体系的荧光强度与STX浓度呈良好的线性关系,拟合线性方程为Y=3639.8X+2341.5[R^(2)=0.9725,X为STX浓度(nmol/L)的常用对数],检测限为0.67 nmol/L,对其他常见海洋毒素的交叉反应可以忽略。在海水中,该方法的回收率为90.7%~108.7%,RSD为7.1%~10.9%。结论所建立的非标记型适配体传感器可以定量检测STX,具有良好的特异性和重现性。

关键词：非标记型噻唑橙石房蛤毒素适配体传感器

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金纳米颗粒表面催化发夹组装无酶信号放大快速荧光法检测微RNA-721

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海军军医大学学报 2024年第6期45卷 717-724页

作者：刘英奚潇雨封加栋陆峰上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 海军军医大学(第二军医大学)药学系药物分析学教研室上海200433

目的构建一种自催化发夹组装无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法首先在金纳米颗粒(AuNP)表面修饰5-羧基荧光素(FAM)标记的DNA发夹探针H1,形成探针AuNP-H1,H1的荧光被AuNP猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNP上的H1标记荧... 详细信息

目的构建一种自催化发夹组装无酶信号放大的靶标快速荧光法,用于检测靶标miRNA。方法首先在金纳米颗粒(AuNP)表面修饰5-羧基荧光素(FAM)标记的DNA发夹探针H1,形成探针AuNP-H1,H1的荧光被AuNP猝灭。加入靶标miRNA会导致AuNP上的H1标记荧光素远离AuNP而重新发射荧光,随后H1与DNA发夹探针H2发生循环自组装,靶标循环被利用,导致荧光信号放大。将探针AuNP-H1、探针H2及不同浓度的miRNA-721共反应后,在480 nm激发波长下测定体系的荧光强度。结果以急性心肌炎生物标志物miRNA-721为模型靶标,在优化的实验条件下使用20μL探针AuNP-H1、50μL 3μmol/L探针H2(退火缓冲液为20 mmol/L Tris-HCl、100 mmol/L NaCl、5 mmol/L MgCl_(2),pH 7.4)与50μL不同浓度(0.1~5μmol/L)的miRNA-721在30℃共反应20 min,发现在520 nm处的相对荧光强度变化值(ΔF=F-F_(0))与miRNA-721浓度(C)呈良好的线性关系,拟合线性方程为ΔF=29232×lgC-52435(R2=0.9910)。该荧光法检测限为1.23 nmol/L。在正常人血清中的加标回收率为92.71%~104.02%。一次完整的miRNA分析可以在20 min内完成。结论该方法可用于生物样品中miRNA-721的检测,为急性心肌炎的早期诊断提供了一种快速检测手段。

关键词：荧光无酶信号放大催化发夹组装微RNA-721 金纳米颗粒

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预测重症缺血性脑卒中死亡风险的模型:基于内在可解释性机器学习方法

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南方医科大学学报 2023年第7期43卷 1241-1247页

作者：罗枭程义吴骋贺佳海军军医大学卫勤系军队卫生统计学教研室上海200433

目的构建一种内在可解释性机器学习模型,即可解释提升机模型(EBM)来预测重症缺血性脑卒中患者一年死亡风险。方法使用2008~2019年MIMIC-IV2.0数据库中符合纳排标准的2369例重症缺血性脑卒中患者资料,将数据集随机分成训练集(80%)和测试... 详细信息

目的构建一种内在可解释性机器学习模型,即可解释提升机模型(EBM)来预测重症缺血性脑卒中患者一年死亡风险。方法使用2008~2019年MIMIC-IV2.0数据库中符合纳排标准的2369例重症缺血性脑卒中患者资料,将数据集随机分成训练集(80%)和测试集(20%),构建可解释提升机模型评估疾病预后。通过计算受试者工作特征曲线下面积(AUC)来衡量预测效果,使用校准曲线及布里尔分数(Brier score)评价模型的校准程度,并绘制决策曲线反映临床净收益。结果本研究所构建的可解释提升机具有良好的区分度、校准度和净收益率,其中模型预测重症缺血性脑卒中预后不良的AUC为0.857[95%CI(0.831,0.887)];校准曲线分析结果显示,可解释提升机模型的校准曲线最接近于理想曲线;决策曲线分析结果显示,当该模型预测概率阈值为0.10~0.80时,其预测净获益率最大。基于可解释提升机模型的前5个独立预测变量为年龄、SOFA评分、平均心率、机械通气、平均呼吸频率,其重要性得分从0.179~0.370。结论建立了一个可解释提升机模型,该模型应用于预测重症缺血性脑卒中患者一年内死亡风险具有良好的表现,通过模型可解释性能帮助临床医生更好地理解结果背后的原因。

关键词：重症缺血性脑卒中内在可解释性机器学习可解释提升机死亡预测

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从我国2016—2020年新药批准情况看新药研发及审批趋势

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中国新药杂志 2023年第4期32卷 386-395页

作者：王文文黄曼丽陈垂雄李晨王陵空军军医大学军事预防医学系卫生统计学教研室

系统分析2016—2020年国家药品监督管理局(NMPA)新药审批情况，对比美国FDA同期获批新药，解析我国近5年的药物研发趋势，总结我国2016—2020年新药研发和审批趋势，并结合我国药品行政监督管理法规，分析我国在全球药物研发中的地位作... 详细信息

系统分析2016—2020年国家药品监督管理局(NMPA)新药审批情况，对比美国FDA同期获批新药，解析我国近5年的药物研发趋势，总结我国2016—2020年新药研发和审批趋势，并结合我国药品行政监督管理法规，分析我国在全球药物研发中的地位作用。研究发现，2016—2020年NMPA共批准新药申请(NDA)956个，其中化学药471个，中药235个，生物制药250个，5年间NMPA批准上市新药数量持续增加。与美国FDA申报审批情况相比，我国药品申报数量多，但通过比例较低，一类创新药申报数量较少，批准上市药物的适应证以抗肿瘤、消化系统和抗感染类为主，罕见病和孤儿药研发不足。中国新药批准数量逐年增加，但本土原研新药占比较小，基础研究及转化研究薄弱，新型靶点分子药物研发不够。

关键词：药物研发新药审批新药申请

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基于Antares2的金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统的构建

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陆军军医大学学报 2023年第5期45卷 393-399页

作者：胡珍尚伟龙饶贤才陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院微生物学教研室重庆400038

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与... 详细信息

目的构建融合型荧光素酶标记的金黄色葡萄球菌示踪菌株,建立金葡菌示踪系统。方法采用同源重组技术将融合型荧光素酶Antares2编码基因敲入到金葡菌USA300基因组中,与金葡菌烯醇酶编码基因eno融合,构建稳定表达的示踪菌株。将示踪菌株与不同的底物混合,检测生物发光强度差异,筛选合适的菌株/底物示踪系统,并探究其在体外和体内的敏感性。结果通过构建基因敲入质粒pBT2-eno-antares2,转化金葡菌USA300菌株中进行基因敲入菌株筛选,经DNA测序和Western blot鉴定示踪菌株USA300/Eno-Antares2构建成功。细菌生长曲线和溶血实验表明所构建的示踪菌株与野生型USA300无明显差异。将示踪菌与DTZ、FUR和HFZ底物混合,肉眼均可观察到发光。不同浓度不同底物分析显示,USA300/Eno-Antares2/HFZ组成的系统发光性能最优,体外发光示踪的敏感性为50 CFU(菌落形成单位),小鼠体内示踪敏感性为100 CFU。结论金葡菌USA300/Eno-Antares2/HFZ示踪系统性能佳,可用于金葡菌感染、定植、播散等研究。

关键词：金黄色葡萄球菌生物发光示踪系统荧光素酶

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河鲀毒素的检测技术与应用

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生物化学与生物物理进展 2023年第9期50卷 2162-2174页

作者：杨成芳郭晗赵鲁明王梁华海军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室上海200433

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是毒性极强的小分子生物碱类毒素,包括中国在内的亚洲沿海国家因误食TTX污染食品而中毒的事件时有发生,其发病迅速且无特效解毒剂,对环境安全、食品安全与社会安全造成极大的威胁。通过检测食品与环境中的TT... 详细信息

河鲀毒素(tetrodotoxin,TTX)是毒性极强的小分子生物碱类毒素,包括中国在内的亚洲沿海国家因误食TTX污染食品而中毒的事件时有发生,其发病迅速且无特效解毒剂,对环境安全、食品安全与社会安全造成极大的威胁。通过检测食品与环境中的TTX含量可以实现TTX的风险预警,可有效防范TTX中毒事件的发生。本文梳理了4类TTX的检测技术,分析比较了传统的生物检测法、化学检测法、免疫检测法之间的优势、不足与实际应用进展,介绍了基于适配体技术的新型检测技术的兴起、发展与广阔的应用前景,对生物安全领域中TTX风险的管理与控制有现实意义。

关键词：河鲀毒素适配体技术生物检测法化学检测法免疫检测法

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2020年全球肾癌发病与死亡分析

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中华流行病学杂志 2023年第4期44卷 575-580页

作者：胡明范君言周雄曹广文谭晓㛃海军军医大学海医系海军流行病学教研室上海200433

目的分析2020年全球肾癌的流行病学现状。方法整理国际癌症研究署和WHO的联合数据库GLOBOCAN 2020中肾癌发病、死亡数据和联合国发展计划署公布的2020年人类发展指数(HDI),计算肾癌粗发病率(CIR)、年龄标化发病率(ASIR)、粗死亡率(CMR)... 详细信息

目的分析2020年全球肾癌的流行病学现状。方法整理国际癌症研究署和WHO的联合数据库GLOBOCAN 2020中肾癌发病、死亡数据和联合国发展计划署公布的2020年人类发展指数(HDI),计算肾癌粗发病率(CIR)、年龄标化发病率(ASIR)、粗死亡率(CMR)、年龄标化死亡率(ASMR)及死亡发病比(M/I),采用Kruskale-Wallis检验分析不同HDI国家间ASIR或ASMR的差异。结果2020年全球肾癌ASIR为4.6/10万,其中男性为6.1/10万,女性为3.2/10万,极高和高HDI国家的ASIR高于中等和低HDI国家。ASIR在20岁后随着年龄迅速增长,男性增长速率快于女性,并均在70~75岁增长放缓。35~64岁截缩发病率为7.5/10万,0~74岁人群累积发病风险为0.52%。全球肾癌ASMR为1.8/10万,男性为2.5/10万,女性为1.2/10万,极高或高HDI国家男性ASMR(2.4/10万~3.7/10万)约为中等或低HDI国家男性(1.1/10万~1.4/10万)的2倍,而不同HDI国家女性ASMR(0.6/10万~1.5/10万)差异不大。ASMR在40岁后随着年龄持续快速增长,男性增长速率快于女性。35~64岁截缩死亡率为2.1/10万,0~74岁全人群累积死亡风险为0.20%。M/I随HDI增加而降低,中国M/I为0.58,高于全球平均水平(0.39)以及美国(0.17)。结论肾癌ASIR和ASMR在全球范围内存在显著地区和性别差异,极高HDI国家负担最重。

关键词：肾癌发病率死亡率人类发展指数

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医学院校核心竞争力视角下教师教学能力发展研究

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中国免疫学杂志 2025年第2期41卷 439-443页

作者：杨虹韩笑李桂清邓博少熊健吴玉章陈戬陆军军医大学基础医学院免疫学教研室重庆400038

医学院校的核心竞争力是指其在教学、科研与服务社会方面相对于其他院校具备的独特优势和能力。教师教学能力作为医学院校核心竞争力的重要组成,直接影响学生的学习效果和素质培养,也关系到医学院校核心竞争力的整体提升进程。本文围绕... 详细信息

医学院校的核心竞争力是指其在教学、科研与服务社会方面相对于其他院校具备的独特优势和能力。教师教学能力作为医学院校核心竞争力的重要组成,直接影响学生的学习效果和素质培养,也关系到医学院校核心竞争力的整体提升进程。本文围绕医院校核心竞争力,重新界定医学院校核心竞争力,对教师教学能力的发展情况进行分析和梳理,寻找医学院校教师教学能力提升中存在的问题,进而提出医学院校教师教学能力发展的改进意见和建议,以期提高医学院校教师的教学能力。

关键词：核心竞争力医学院校要素构成教师教学能力

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间充质干细胞来源的外泌体治疗放射性肠炎的疗效与安全性

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中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第4期31卷 359-364页

作者：何晓波虞淦军高晓刚吴艳峰海军军医大学基础医学院免疫学教研室暨免疫与炎症全国重点实验室上海200433 海军军医大学第一附属医院器官移植科上海200433

目的:探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)对人结肠癌CT26细胞体外增殖、迁移的影响及对放射性肠炎(RE)荷瘤小鼠模型的治疗效果及其安全性。方法:利用商品化含MSC-Exo的液体敷料产品(MSC-Exo产品),通过纳米颗粒追踪分析、透射电镜、W... 详细信息

目的:探讨间充质干细胞来源的外泌体(MSC-Exo)对人结肠癌CT26细胞体外增殖、迁移的影响及对放射性肠炎(RE)荷瘤小鼠模型的治疗效果及其安全性。方法:利用商品化含MSC-Exo的液体敷料产品(MSC-Exo产品),通过纳米颗粒追踪分析、透射电镜、WB法对其中的MSC-Exo进行鉴定。采用CCK-8法和Transwell小室法检测MSC-Exo产品对结肠癌CT26细胞增殖、迁移的影响。构建CT26细胞荷瘤小鼠模型,连续7 d分别给予400μL MSC-Exo产品、MSC培养基或生理盐水灌胃,评估MSC-Exo产品在体内对肿瘤生长和小鼠生存的影响。构建RE荷瘤小鼠模型,连续7 d分别给予400μL MSC-Exo产品、MSC培养基、生理盐水灌胃治疗,通过小肠组织H-E染色法评估MSC-Exo产品治疗RE的有效性与安全性。结果:纳米颗粒追踪分析、透射电镜、WB法的鉴定结果确证了商品化的液体敷料中含有MSC-Exo有效成分。体外研究表明,MSC-Exo产品成分不会促进结肠癌CT26细胞的增殖和迁移,具有安全性。体内研究结果发现,MSC-Exo产品的灌胃给药并不影响荷瘤小鼠的肿瘤生长和生存期,但RE荷瘤小鼠模型接受MSC-Exo产品灌胃治疗后,荷瘤小鼠血便、黏液便症状得到缓解,H-E染色结果显示小鼠肠壁组织的组织形态完整性相较于对照组有所改善,提示MSC-Exo产品对荷瘤小鼠的RE具有疗效,并且在致瘤性及肿瘤转移方面具有安全性。结论:商品化含MSC-Exo的液体敷料并不促进体外结肠癌细胞的增殖、迁移,对CT26细胞荷瘤小鼠肿瘤生长和生存期无明显影响,但对荷瘤小鼠模型的RE具有治疗作用,改善了肠道组织的损伤。

关键词：间充质干细胞外泌体肿瘤放射性肠炎

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环状RNA mmu_circ_0005019影响小鼠心肌细胞钙激活钾通道电流及动作电位

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陆军军医大学学报 2024年第2期46卷 100-109页

作者：杨岚清邬娜陈鹏慧袁志权李成英吴龙钟理李亚斐陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系军队流行病学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院神经生物学教研室重庆400038 重庆医科大学附属第三医院心血管疾病中心重庆401120

目的探索环状RNA mmu_circ_0005019调控小电导钙激活钾(small-conductance calcium-activated potassium, SK)通道蛋白亚基SK3编码基因Kcnn3的表达,以及对小电导钙激活钾通道电流(IK,Ca)和动作电位时程(action potential duration, APD)的影响。方法在小鼠HL-1细胞中分别构建mmu_circ_0005019过表达和干扰模型,分为过表达组(n=3)、空质粒组(n=3)、干扰1组(n=3)、干扰2组(n=3)、对照组(n=3),通过RT-qPCR、Western blot分析mmu_circ_0005019调节Kcnn3表达的分子机制,应用膜片钳技术电流钳模式记录全细胞的IK,Ca,并用电压钳模式记录APD。结果成功构建了环状RNA mmu_circ_0005019过表达和干扰的HL-1细胞模型。过表达组的Kcnn3基因表达与空质粒组相比明显上调(P<0.05);干扰1组和干扰2组的Kcnn3基因表达与对照组相比均明显下调(P<0.05)。电生理发现过表达mmu_circ_0005019增加了HL-1细胞IK,Ca电流密度,APD显著缩短;相反,干扰mmu_circ_0005019减少了IK,Ca电流密度,APD显著延长。结论 mmu_circ_0005019可以上调小鼠HL-1细胞Kcnn3的表达水平,从而改变IK,Ca和APD,提示环状RNA mmu_circ_0005019可能在房颤发生中起到促进作用。

关键词：环状RNA 心肌细胞小电导钙激活钾通道动作电位时程膜片钳

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