检索结果-内蒙古大学图书馆

中华医学遗传学杂志 2002年第1期19卷 68-71页

作者：莫秋华徐湘民钟雄霖刘忠英第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州510515

目的　建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法　在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野... 详细信息

目的　建立一种改进的、简便易行的大引物 PCR定点诱变技术。方法　在两轮 PCR中设计了两种不同的质粒 DNA模板 ,两者分别缺少正向或反向外侧引物可结合的互补序列 ;当两种模板和两条外侧引物同时存在于一个反应管时 ,可以完全避免对野生型目的基因全长的扩增。第 1轮 PCR由正向外侧引物和突变引物合成大引物 ,这一产物无需凝胶纯化而直接用于第 2轮 PCR。第 2轮 PCR的第 1阶段由大引物延伸合成全长突变终产物 ,两条外侧引物则在第 2阶段指数扩增 ,所有终产物均含所需致突变位点。结果　用此方法对中国人 β地中海贫血 15种稀少突变类型进行定点诱变 ,并将诱变得到的全长人 β珠蛋白基因克隆到 p GEM○R- T载体后全长测序 ,所有克隆均鉴定为所需突变型。结论　这种改进的大引物PCR定点诱变技术省时、省工 ,诱变的成功率可达 10 0 % ,适于实验室常规应用。

关键词：大引物聚合酶链反应定点诱变 β珠蛋白基因

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PCR技术快速检测常见缺失型α-地中海贫血-2基因

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中华医学遗传学杂志 2001年第3期18卷 216-218页

作者：赵永忠钟梅刘忠英徐湘民第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 第一军医大学南方医院妇产科

目的　建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型 α-地中海贫血 - 2的 PCR技术 ,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法　α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌呤胞嘧啶核苷酸含量 ,使引物的选择和 PCR扩增受到限制。对于左... 详细信息

目的　建立一套设有内对照的稳定、可靠的检测缺失型 α-地中海贫血 - 2的 PCR技术 ,用于α-地中海贫血的分子诊断和人群筛查。方法　α-珠蛋白基因簇的高度同源性和高鸟嘌呤胞嘧啶核苷酸含量 ,使引物的选择和 PCR扩增受到限制。对于左缺失型 - α4.2基因 ,在疾病基因序列测定的基础上 ,设计了一套全新的三引物 PCR体系 ,用于区别正常和缺失等位基因。为检测右缺失型 -α3.7基因 ,则设计了四引物多重 PCR体系 ,除包含 1对能扩增 -α3.7基因特异片段的引物外 ,尚有 1对引物用于指示体系扩增成功与否。结果　建立了两种多重 PCR体系 ,在同一 PCR热循环参数下 ,可分别用于 - α4.2基因和 - α3.7基因的分子诊断 ,正常人只有 1条内对照扩增条带 ,而α-地中海贫血 - 2杂合子可见对应的 2条扩增条带。结论　该体系可检测 - α3.7和 - α4.2缺失型 α-地中海贫血 - 2基因 ,有望用于临床样本分子诊断和高发人群基因筛查。

关键词： α-地中海贫血多重聚合酶链反应分子诊断

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缺失plcg1基因引起成纤维细胞PI-3K信号上调

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Acta Biochimica et Biophysica Sinica 2001年第6期33卷 677-681页

作者：白晓春罗深秋白洁邓凡曾位森冀群升中国 Vanderbilt大学医学院生物化学教研室广州510515 第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

磷脂酶C γ1(phospholipaseC γ1,PLC γ1)与磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol 3kinase,PI 3K)是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC γ1在表皮生长因子 (EGF)介导的细胞分裂信号中的代偿机制 ,用磷脂酶C... 详细信息

磷脂酶C γ1(phospholipaseC γ1,PLC γ1)与磷脂酰肌醇 3 激酶 (phosphatidylinositol 3kinase,PI 3K)是生长因子调控细胞生长与增殖的两个重要信号中介。为探讨PLC γ1在表皮生长因子 (EGF)介导的细胞分裂信号中的代偿机制 ,用磷脂酶C(phospholipaseC ,PLC)特异性抑制剂U7312 2及PI 3K特异性抑制剂wortmannin处理剔除PLC δ1基因 plcg1(PLC γ1-/-)及野生型 (PLC γ1+ /+ )小鼠胚胎成纤维细胞 ,发现未经处理情况下两种细胞的克隆形成能力、细胞活力及EGF引起的DNA合成能力相似 ,且均可被U7312 2与wortmannin抑制 ,但与PLC γ1+ /+ 细胞相比 ,PLC γ1-/-更依赖于PI 3K ,而对PLC的依赖性却减小。Western印迹也表明EGF刺激后PI 3K的 p85α亚单位酪氨酸磷酸化程度比野生型显著增高 ,PI 3K信号通路的激活出现上调 ,且PLC γ1-/-中无其近亲PLC γ2的代偿表达。因此PLC γ1-/-中PLC γ1的功能可能被PI 3K通路代偿 ,而PLC γ2或其他PLC同工酶并不代偿其功能。结果表明EGF介导的信号通路的冗余性及PLC γ1信号通路的可代偿性。

关键词：磷脂酶C-γ1 磷脂酰肌醇3激酶表皮生长因子缺失plcg1基因小鼠成纤维细胞信号转导

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间隙连接细胞间通讯与癌发生

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癌症 1998年第1期17卷 77-78页

作者：莫永炎罗深秋侯云霞第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

间隙连接细胞间通讯与癌发生莫永炎罗深秋侯云霞＊广东省自然科学基金课题资助项目作者单位：第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室（广州，５１０５１５）第一作者：男，１９７１年出生，博士生关键词间隙连接细胞间通讯肿瘤／病... 详细信息

间隙连接细胞间通讯与癌发生莫永炎罗深秋侯云霞＊广东省自然科学基金课题资助项目作者单位：第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室（广州，５１０５１５）第一作者：男，１９７１年出生，博士生关键词间隙连接细胞间通讯肿瘤／病理学中图号Ｒ７３０．２１Ｒ７３０．...

关键词：间隙连接细胞间通讯肿瘤病理学

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一个β地中海贫血复合δβ地中海贫血家系的表型与基因型分析

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中华医学遗传学杂志 2001年第4期18卷 310-313页

作者：李志琴莫秋华钟雄林刘兰平徐湘民第一军医大学细胞生物学和医学遗传学教研室广州510515 第一军医大学附属珠江医院检验科广州510515

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点... 详细信息

目的　调查一种缺失型δβ地中海贫血 (简称地贫 )基因型与表型的关系 ,探索进行β地贫复合该缺失型突变高风险胎儿的快速产前诊断方法。方法　以表型和基因分型进行家系分析。表型分析采用红细胞指标和血红蛋白电泳分析 ;用跨越断裂点的三引物聚合酶链反应直接分析法检测δβ地贫缺失突变 ;用反向点杂交技术筛查β地贫基因突变 ;并对一例该型地贫高风险胎儿进行了产前基因诊断。结果　先证者 (重症地贫 )为一种缺失型δβ地贫与β地贫双重杂合子 ,其δβ地贫基因遗传自母方 ,在该家系 3代 9名成员中共检测到 4例携带了这一基因 ,其表型和基因型结果相互吻合 ;β地贫基因 (密码子 41- 42 - CTTT移码突变 )遗传自父方。对该家系的重症地贫高风险胎儿进行产前基因诊断的结果显示 ,胎儿的基因型完全正常。结论　在国内首次报告由缺失型δβ地贫基因与β地贫移码突变双重杂合导致的重症地贫高风险胎儿的产前诊断结果。采用的技术简便、快速。

关键词： β地中海贫血 δβ地中海贫血产前诊断基因缺失基因型分析

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信号转导蛋白——磷脂酶C-δ

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细胞生物学杂志 2001年第4期23卷 210-213页

作者：白洁罗深秋冀群升第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州510515

PLG-δ是PLC家族中最基本的成员,能水解肌醇磷脂,产生肌醇三磷酸和二酰基甘油,参与信号转导。并与某些病理状态有关。

关键词：磷脂酶C-δ 信号转导蛋白生物学效应蛋白结构

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星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞骨架的光镜和电镜观察

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第一军医大学学报 2001年第5期21卷 336-337,F003页

作者：杨翠兰罗深秋第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达... 详细信息

目的观察正常星形胶质细胞和星形胶质瘤细胞系ＳＷＯ－３８的细胞骨架的区别。方法分别用光镜和电镜观察正常星形胶质细胞和ＳＷＯ－３８的细胞骨架。结果和结论两种方法都很清晰地显示出微管和微丝。正常星形胶质细胞微管和微丝发达，属丰满型；粗大的张力纤维贯穿细胞全长，接近平行分布，偶见交叉呈“Ｚ”形状。而ＳＷＯ－３８细胞的微管则明显减少，属稀疏型；细胞中仅见少量纤细的张力纤维，多数微丝束形成点状或树根状肌动蛋白小体，微管和微丝呈收缩趋势。

关键词：星形胶质细胞星形胶质瘤细胞细胞骨架光镜电镜

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磷脂酶C-γ1在人胚组织中的表达

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第一军医大学学报 2001年第12期21卷 888-889,F002页

作者：侯云霞罗深秋冀群升第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广东广州510515

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,... 详细信息

目的研究磷脂酶C-γ1(PLC-γ1)在人胚组织中的表达情况。方法收集人胚组织(包括软骨、软骨膜、骨骼肌)并行石蜡包埋及切片,采用免疫细胞化学ABC染色法观察人胚组织细胞中PLC-γ1的表达情况。结果PLC-γ1在这几种细胞中均有较强的表达,主要位于胞质中。结论PLC-γ1相关的细胞内信号传递途径对于人早期胚胎细胞的发育、增殖具有重要的生物学意义。

关键词：磷脂酶C-γ1 胚胎组织免疫细胞化学

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人腺苷酸环化酶激活多肽cDNA克隆和序列分析

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中国生物化学与分子生物学报 1998年第3期14卷 248-253页

作者：余焱林刘飞鹏第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室

以人睾丸组织总ＲＮＡ为材料，用ＲＴ－ＰＣＲ方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽（ＡＣＡＰ）编码区（５３０ｂｐ）和全长ｃＤＮＡ（１９３０ｂｐ）片段．并分别将这些ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１８载体的ＳｍａⅠ限制性内切酶位点．对... 详细信息

以人睾丸组织总ＲＮＡ为材料，用ＲＴ－ＰＣＲ方法合成了人腺苷酸环化酶激活多肽（ＡＣＡＰ）编码区（５３０ｂｐ）和全长ｃＤＮＡ（１９３０ｂｐ）片段．并分别将这些ｃＤＮＡ片段克隆入ｐＵＣ１８载体的ＳｍａⅠ限制性内切酶位点．对重组质粒分别采用直接ＤＮＡ双链末端终止法和在核酸外切酶Ⅲ和核酸酶Ｓ１作用下连续缺失ＤＮＡ后，相继克隆，构成一系列连续缺失的缺失体的方法，测定了全部核苷酸顺序．结果表明：ＡＣＡＰ编码区的ｃＤＮＡ顺序与已报道的有１２处碱基的改变，其中１１处碱基顺序的改变不引起编码的氨基酸变化，只有第３８５位的Ｔ→Ａ后，才引起其编码的氨基酸由Ｓｅｒ→Ｔｈｒ，但由于Ｓｅｒ和Ｔｈｒ的理化性质极其相似，这一变化可能并不导致蛋白质的生物活性的变化．这些改变可能是由于种族、群体或个体的差异．

关键词：腺苷酸环化酶激活多肽 PCR DNA重组序列分析

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一种用FRAP测定细胞间隙连接介导通讯的方法

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中国细胞生物学学报 1997年第4期19卷 191-193+2-197页

作者：莫永炎罗深秋鲍永耀张薇黄辉侯云霞第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室广州 510515 第一军医大学细胞生物学与医学遗传学教研室第一军医大学中心实验室广州 51051

本文探讨了利用荧光漂白恢复技术(FRAP)测定体外培养小鼠大脑皮层神经胶质细胞间隙连接通讯的方法。经细胞培养、荧光染色、荧光激发、荧光漂白、激光扫描及计算机分析等处理,结果各所选神经胶质细胞内荧光均得到不同程度的恢复,即经扫... 详细信息

本文探讨了利用荧光漂白恢复技术(FRAP)测定体外培养小鼠大脑皮层神经胶质细胞间隙连接通讯的方法。经细胞培养、荧光染色、荧光激发、荧光漂白、激光扫描及计算机分析等处理,结果各所选神经胶质细胞内荧光均得到不同程度的恢复,即经扫描15.3分钟后,1—5号细胞内荧光相对强度分别上升了14％、28％、43％、17.5%、12.5％,三次平均上升了18.57±10.06％,荧光恢复速率平均为1.223±0.785％/min(n=14)。表明该方法可用来测定细胞间隙连接通讯。

关键词：荧光漂白恢复技术间隙连接通讯神经胶质细胞

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