检索结果-内蒙古大学图书馆

细胞与分子免疫学杂志 2004年第5期20卷 544-547页

作者：秦鸿雁韩骅第四军医大学基础部医学遗传学与发育生物学教研室陕西西安710032

目的 :研究KyoT2与KyoT2结合蛋白 1(KyoT2 bindingprotein1,KBP1)之间的物理相互作用 ,以及这种相互作用对重组信号结合蛋白J (recombinationsignalbindingprotein Jκ ,RBP J)介导的转录活性的影响。方法 :体外GST pulldown、体内免... 详细信息

目的 :研究KyoT2与KyoT2结合蛋白 1(KyoT2 bindingprotein1,KBP1)之间的物理相互作用 ,以及这种相互作用对重组信号结合蛋白J (recombinationsignalbindingprotein Jκ ,RBP J)介导的转录活性的影响。方法 :体外GST pulldown、体内免疫共沉淀、哺乳动物细胞双杂交实验和报告基因实验证实 ,KBP1与KyoT2之间存在物理和功能上的相互作用。结果 :体内和体外证实 ,KBP1与KyoT2之间均存在相互作用。转录活性分析实验显示 ,过表达KBP1可拮抗RING1对RBP J介导的转录的抑制效应。结论

关键词： KyoT2 KyoT2结合蛋白1 重组信号结合蛋白J 转录 RING1

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靶向沉默PPP1R16A基因可抑制肝癌细胞的增殖

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第二军医大学学报 2016年第5期37卷 529-535页

作者：毕峰瑞周传传袁继行孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响。方法收集106例肝癌患... 详细信息

目的观察和比较在人肝癌与癌旁组织中蛋白磷酸酶1调节亚基16A(protein phosphatase 1regulatory subunit 16A,PPP1R16A)基因在基因组和转录水平的差异,探讨靶向沉默PPP1R16A基因对肝癌细胞HCC LM3增殖能力的影响。方法收集106例肝癌患者的肿瘤组织及癌旁组织,采用实时荧光定量PCR技术检测PPP1R16A基因的基因组和转录水平。体外合成PPP1R16A序列特异性小干扰RNA(siRNA),使用脂质体法转染肝癌细胞株HCC LM3。实验分si-16A组(针对PPP1R16A的特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、NC组(非特异性siRNA转染的HCC LM3细胞)、空白组(未转染siRNA的HCC LM3细胞),用实时荧光定量PCR检测PPP1R16A基因拷贝数和转录水平,用蛋白质印迹法检测PPP1R16A蛋白表达,用CCK-8实验、克隆形成实验检测细胞增殖和克隆形成能力,用流式细胞术检测细胞周期。结果人肝癌组织中PPP1R16A基因的拷贝数和转录表达水平均高于癌旁组织(P<0.01),且两者具有相关性(P=0.015)。CCK-8实验和克隆形成实验显示,转染siRNA后,si-16A组细胞增殖低于NC组和空白组(P<0.001)。流式细胞术结果显示,si-16A组较NC组和空白组细胞周期被抑制。结论肝癌组织中PPP1R16A的拷贝数发生扩增,基因转录上调。靶向沉默PPP1R16A能抑制肝癌细胞HCC LM3的增殖能力。提示PPP1R16A基因在肝癌中发挥癌基因的作用。

关键词：肝肿瘤肝细胞癌 PPPlRl6A 细胞增殖拷贝数变异

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Toll样受体7胞内区功能关键位点筛选及其机制研究(英文)

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第二军医大学学报 2012年第3期33卷 233-239页

作者：魏伟章意亮郭瀛军孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选出TLR7 TIR区对其信号传递起关键作用的位点,并解释该位点的作用机制。方法针对TLR7野生型序列,设计构建一系列TLR7缺失突变与点突变质粒。将这些质粒转染入HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测这些质粒对NF-κB信号通路的... 详细信息

目的筛选出TLR7 TIR区对其信号传递起关键作用的位点,并解释该位点的作用机制。方法针对TLR7野生型序列,设计构建一系列TLR7缺失突变与点突变质粒。将这些质粒转染入HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测这些质粒对NF-κB信号通路的影响。利用免疫共沉淀与蛋白质印迹实验验证TLR7突变体与其下游接头蛋白MyD88结合能力的变化。结果通过对TLR7胞内区截短突变分析,发现在其TIR区存在一个由16个氨基酸残基组成的区域对其信号传递至关重要。进一步的研究发现,该区域存在一个RXR信号基序。该基序位于1004位与1006位的两个保守精氨酸残基,为TLR7正常信号传递所必需。通过免疫共沉淀与蛋白质印迹实验,可以发现TLR7位于1004位的精氨酸对其与下游蛋白MyD88的结合至关重要。结论成功鉴定出TLR7 TIR区1004位的精氨酸对其信号传递起重要作用,该位点是通过影响TLR7与MyD88结合的方式发挥功能。

关键词： Toll样受体7 天然免疫信号转导

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融合蛋白AnxB1-MLT的表达、纯化及其对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用

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第二军医大学学报 2013年第11期34卷 1171-1176页

作者：王玉招颜宏利唐冠楠林恒荣章意亮孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的以膜联蛋白B1（AnxBl）为导向分子，与蜂毒素（MLT）基因融合，制备AnxBl一MLT融合蛋白，探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法利用重叠延伸PCR技术构建AnxBl和MLT的融合基因AnxBl... 详细信息

目的以膜联蛋白B1（AnxBl）为导向分子，与蜂毒素（MLT）基因融合，制备AnxBl一MLT融合蛋白，探讨其对磷脂酰丝氨酸脂质体的结合活性及对肝癌细胞SMMC7721和HepG2增殖的抑制作用。方法利用重叠延伸PCR技术构建AnxBl和MLT的融合基因AnxBl-MLT，克隆至原核表达载体pGEX-5T，转化至宿主菌K802，用异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导AnxBl-MLT融合蛋白表达，优化表达条件，用谷胱甘肽一孓转移酶（GST）亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白。采用磷脂结合实验验证AnxBl-MLT融合蛋白的钙依赖性磷脂结合活性，采用CCK-8方法分别检测AnxBl-MLT融合蛋白对肝癌细胞系SMMC7721和HepG2细胞增殖的影响。结果AnxBl-MLT融合蛋白在宿主菌K802中能够表达，在菌液生长至D600为0．6时，加入诱导剂IPTG至终浓度0．2mmol／L，低温（22~24℃）诱导表达4h，可使蛋白表达量较高且在上清有表达。通过GST亲和色谱纯化柱纯化融合蛋白，SDS-PAGE结果显示在63000处可见单一目的条带，纯度〉95％。AnxBl-MLT融合蛋白保留了AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，并能显著抑制肝癌细胞系SMMC7721和HepG2的增殖。结论成功制备了AnxBl-MLT融合蛋白，该融合蛋白具有AnxBl的钙依赖性磷脂结合活性，可抑制肝癌细胞SMMC7721和HepG2的增殖，为进一步利用动物实验研究AnxBl-MLT的抗肿瘤效果奠定了基础。

关键词：膜联蛋白B1 蜂毒素细胞增殖靶向药物治疗

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猪γ干扰素基因的克隆、表达及其纯化

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生物工程学报 2001年第2期17卷 183-186页

作者：郭瀛军吴丹陈蕊雯孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

以RT PCR方法 ,从经丝裂原诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出编码猪IFNγ的基因。经测序证实后插入载体pJLA 5 0 3 ,并实现在大肠杆菌中的高表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol/L盐酸胍变性及精氨酸存在的情况下复性。再经DEAE... 详细信息

以RT PCR方法 ,从经丝裂原诱导的猪外周血淋巴细胞总RNA中扩增出编码猪IFNγ的基因。经测序证实后插入载体pJLA 5 0 3 ,并实现在大肠杆菌中的高表达。表达产物以包涵体形式存在 ,经 7mol/L盐酸胍变性及精氨酸存在的情况下复性。再经DEAE Sepharose离子交换柱、Sephdex 2 0 0凝胶过滤柱分离获得电泳单一纯猪IFN γ蛋白 ,细胞病变抑制实验检测纯化产物有干扰素活性。

关键词： γ干扰素基因表达分离纯化大肠杆菌

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含FLP“交换盒”结构的打靶载体构建及ES细胞打靶研究

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生物工程学报 2001年第5期17卷 566-569页

作者：郑敬民李坚傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3RT序列的寡核苷酸 ,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP HPRT F Neo F3。经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,将线性化了的打靶载体以电... 详细信息

利用小鼠HPRT基因组DNA片段和人工合成的含有FLP重组酶识别位点变异体FRT和F3RT序列的寡核苷酸 ,构建了针对小鼠HPRT基因位点的置换型打靶载体pSP HPRT F Neo F3。经过限制酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,将线性化了的打靶载体以电穿孔法导入ES细胞内 ,经G418和 6 -TG双药筛选和分子鉴定 ,得到了 2个在HPRT位点整合有FLP重组酶“交换盒”F Neo F3结构的双交换重组ES细胞克隆 ,为建立基于FLP重组酶介导的盒式交换的高效。

关键词：基因打靶胚胎干细胞 HPRT FLP重组酶载体

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人IL-2真核表达质粒对副肌球蛋白核酸疫苗的免疫调节作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2002年第6期22卷 622-624页

作者：王庆敏陈蕊雯吴丹孙树汉第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

目的　观察IL 2表达质粒对副肌球蛋白 (AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法　将人的IL 2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3 IL 2重组质粒 ;然后接种C5 7BL 6小鼠 (分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组 ) ,ELISA法检测小鼠血... 详细信息

目的　观察IL 2表达质粒对副肌球蛋白 (AgB)核酸疫苗的免疫调节作用。方法　将人的IL 2全长cDNA插入到真核表达质粒pcDNA3中构建成pcDNA3 IL 2重组质粒 ;然后接种C5 7BL 6小鼠 (分为pcDNA3组、AgB组、联合免疫组 ) ,ELISA法检测小鼠血清中的IgG和IgG2a的水平 ;用MTT法检测小鼠脾细胞增殖反应 ,用ELISA法检测其分泌的IL 2和IL 4的水平。最后在仔猪中进行攻击实验 ,观察pcDNA3 IL 2质粒的免疫刺激作用。结果　注射疫苗后 ,pcDNA3 IL 2协同注射组增强了副肌球蛋白特异性的IgG和IgG2a的水平 ,增强了脾细胞的增殖反应 ,提高了其分泌IL 2的水平 ,但对IL 4的水平产生轻微影响。仔猪攻击实验中 ,共同注射IL 2基因组提高了仔猪的相对保护率。结论对于副肌球蛋白核酸疫苗而言 ,人的IL

关键词：副肌球蛋白猪囊尾蚴人IL-2 核酸疫苗免疫保护 ELISA法囊虫病

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小鼠锌指蛋白基因ZF-12基因剔除的ES细胞系的建立

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Acta Genetica Sinica 2002年第10期29卷 860-864页

作者：厉建中杨桦傅继梁第二军医大学医学遗传学教研室上海200433

利用小鼠锌指蛋白ZF 12基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠ZF 12基因座的替换型打靶载体pSSC TV 10 .5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES细胞内 ,经G4 18/GANC双药筛选和分子鉴定 ,获... 详细信息

利用小鼠锌指蛋白ZF 12基因组DNA片段 ,构建了针对小鼠ZF 12基因座的替换型打靶载体pSSC TV 10 .5。经限制性核酸内切酶酶切及部分测序鉴定其结构正确后 ,通过电穿孔将线性化打靶载体导入ES细胞内 ,经G4 18/GANC双药筛选和分子鉴定 ,获得 4个ZF 12 + /-基因的ES细胞杂合子克隆 ,其生长状态良好 ,为进一步建立ZF 12基因剔除的小鼠动物模型创造了条件。

关键词：小鼠锌指蛋白基因 ZF-12 基因剔除 ES细胞系基因打靶胚胎干细胞

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干细胞研究中的化学生物学:学科交叉的新前沿

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第二军医大学学报 2017年第2期38卷 133-141页

作者：李文林张冠宇孙平新第二军医大学基础部细胞生物学教研室上海200433

化学生物学(chemical biology)是利用小分子化合物干预和解析生物系统,认识生物系统的本质和内在规律的学科,在包括干细胞研究在内的多个领域得到应用。近年来,干细胞研究取得了引人瞩目的进步,这些基础研究的进步也正在推动着干细胞技... 详细信息

化学生物学(chemical biology)是利用小分子化合物干预和解析生物系统,认识生物系统的本质和内在规律的学科,在包括干细胞研究在内的多个领域得到应用。近年来,干细胞研究取得了引人瞩目的进步,这些基础研究的进步也正在推动着干细胞技术在再生医学中的应用。对细胞命运转换分子基础的认识以及精确操控是干细胞研究的核心问题。小分子化合物因其在使用的便捷性、可控性和功能多样性等方面的显著优势,正越来越多地被用于干预和研究干细胞的增殖、分化和重编程等生物学行为。利用化学分子调控体内干细胞的生物学行为、促进其体内再生和修复将有望成为再生医学领域极具潜力的发展方向。

关键词：干细胞化学生物学细胞命运重编程

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混合谱系激酶域样假激酶参与小鼠高原脑水肿的初步研究

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空军军医大学学报 2025年第4期46卷 521-525页

作者：孟欣宇孟瀚毛竹青王砚锦谈妍辰王亚周崔毅杨清湖延安大学生命科学学院多态资源药物研究中心陕西省区域生物资源保育与利用工程技术研究中心陕西延安716099 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员二大队陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员五大队陕西西安710032 联勤保障部队大连康复疗养中心辽宁大连116013

目的探索程序性坏死关键分子混合谱系激酶域样假激酶(MLKL)在小鼠高原脑水肿(HACE)中的作用。方法使用成年雄性C57BL/6 WT小鼠和MLKL^(-/-)小鼠,将小鼠分为3组,分别为对照组、WT HACE组和MLKL^(-/-)HACE组,每组8只。将小鼠放进小型高低... 详细信息

目的探索程序性坏死关键分子混合谱系激酶域样假激酶(MLKL)在小鼠高原脑水肿(HACE)中的作用。方法使用成年雄性C57BL/6 WT小鼠和MLKL^(-/-)小鼠,将小鼠分为3组,分别为对照组、WT HACE组和MLKL^(-/-)HACE组,每组8只。将小鼠放进小型高低压氧舱,调整海拔至5500 m,暴露72 h,建立HACE模型。使用Western blotting检测MLKL蛋白的表达。采用脑含水量指数评估脑水肿发生的程度。采用伊文思蓝检测血脑屏障开放状态。通过免疫荧光染色检测MLKL及水通道蛋白4(AQP4)在血管的分布,免疫球蛋白IgG的渗透。应用新物体识别实验分析小鼠认知功能。结果小鼠在5500 m下暴露72 h可导致血脑屏障破坏,脑含水量升高(P<0.01),新物体识别能力下降(P<0.01),MLKL及pMLKL表达升高(P<0.05),pMLKL与AQP4、CD31免疫荧光共标结果成点状聚集体。MLKL^(-/-)小鼠在同等刺激下呈现出较低程度的HACE,表现为MLKL^(-/-)HACE组小鼠较WT HACE组小鼠脑水含量显著减少(P<0.05),血脑屏障开放程度降低,免疫球蛋白从血管中的渗出减少,新物体识别功能改善(P<0.05)。结论程序性坏死关键分子MLKL参与HACE的发生与发展,敲除MLKL可减轻HACE。

关键词：高原脑水肿 MLKL 血脑屏障程序性细胞坏死细胞毒性水肿小鼠

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