目的探讨聚集素(CLU)对脂肪变性Hep1-6细胞中脂沉积、脂代谢、糖代谢及氧化应激的影响及作用机制。方法将Hep1-6细胞随机分为对照组、CLU组、短发夹(Sh)组和绿色荧光蛋白(GFP)组,对照组细胞不给予任何处理,CLU组细胞加入过表达CLU慢病毒上清,Sh组细胞加入敲减CLU慢病毒上清,GFP组细胞加入对照病毒上清。分别采用蛋白免疫印迹法和实时荧光定量聚合酶链式反应法检测细胞中CLU蛋白和mRNA表达来验证稳定过表达和敲减CLU细胞株的成功建立。待对照组、CLU组、Sh组和GFP组细胞培养至密度约80%时,加入游离脂肪酸工作液1 mmol诱导24 h构建脂肪变性细胞模型。细胞模型建立成功后,Sh组细胞随机分为Sh-CLU低剂量组和Sh-CLU高剂量组,Sh-CLU低剂量组每毫升培养基中加入400 ng CLU,Sh-CLU高剂量组每毫升培养基中加入800 ng CLU,继续培养24 h。另取Hep1-6细胞以每孔4×10^(5)个接种于12孔培养板,细胞贴壁后,加入含有体积分数1%牛血清白蛋白(BSA)的达尔伯克改良伊格尔无血清培养基培养24 h(BSA组)。油红染色观察对照组、BSA组、CLU组、Sh组和GFP组细胞中脂滴沉积情况,并采用酶标仪检测细胞中脂滴沉积量。采用实时荧光定量聚合酶链式反应法检测对照组、CLU组、Sh组、Sh-CLU低剂量组和Sh-CLU高剂量组细胞中脂肪酸合成、脂肪酸氧化、脂滴形成、脂转运、脂解、氧化应激和糖代谢相关基因mRNA表达水平。结果与对照组相比,CLU组细胞中CLU蛋白和mRNA表达水平均显著升高,Sh组细胞中CLU蛋白和mRNA表达水平均明显降低。与对照组相比,CLU组细胞中脂滴沉积显著减少,Sh组细胞中呈现更多的红色脂滴沉积。与对照组相比,CLU组、Sh-CLU低剂量组和Sh-CLU高剂量组细胞中脂肪酸合成相关基因、脂肪酸氧化相关基因、脂解相关基因、氧化应激相关基因、脂转运和糖代谢相关基因mRNA表达水平总体显著升高,脂滴形成相关基因mRNA表达水平总体显著降低。与CLU组、Sh-CLU低剂量组和Sh-CLU高剂量组相比,Sh组细胞中脂肪酸氧化、脂转运、脂解和氧化应激相关基因mRNA表达水平总体显著降低,脂滴形成相关基因mRNA表达水平总体显著升高。结论CLU在脂肪变性细胞中的主要作用可能是通过增强脂肪酸氧化和脂解调控脂质平衡,提高细胞抗氧化损伤能力。
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