检索结果-内蒙古大学图书馆

病毒学报 2024年第3期40卷 519-527页

作者：张俊梅王芳应旗康冯文杰古天乐吴兴安空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 延安大学生命科学学院延安716000

信号转导和转录活化因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)是干扰素信号通路中的关键分子,在对抗病毒和其他病原体的免疫反应中发挥重要作用,构建STAT1敲除细胞系有助于研究其在病毒感染过程中的作用与机制... 详细信息

信号转导和转录活化因子1(Signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)是干扰素信号通路中的关键分子,在对抗病毒和其他病原体的免疫反应中发挥重要作用,构建STAT1敲除细胞系有助于研究其在病毒感染过程中的作用与机制。本研究利用CRISPR/Cas9(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats-Cas9)基因编辑技术构建STAT1基因敲除细胞系。首先构建STAT1基因特异性打靶载体,后通过慢病毒转导人非小细胞肺癌细胞系(Human non-small cell lung cancer cells,A549),嘌呤霉素筛选稳定转导的细胞后进行单克隆化,最后对获取的单克隆细胞在分子水平上进行敲除及敲除回补验证,成功构建一株STAT1基因敲除(STAT1 gene knockout,STAT1-KO)的A549细胞,且该细胞系可维持正常细胞活性与增殖能力。以汉滩病毒(Hantaan virus,HTNV)感染验证,发现在该细胞系中病毒复制水平明显升高。本研究成功构建了一株STAT1-KO A549细胞,可为抗病毒药物和干扰素信号通路研究提供有力工具。

关键词：信号转导和转录活化因子1 CRISPR/Cas9 基因敲除汉滩病毒

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小鼠THBS1基因敲除改善内脏脂肪免疫微环境并抑制结直肠癌腹腔种植转移

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陆军军医大学学报 2023年第18期45卷 1907-1915页

作者：汪腾高源赵昆向远彩缪洪明陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系病理生理学教研室重庆400038 西南医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室四川泸州646000

目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小... 详细信息

目的探究血小板反应蛋白1(thrombospondin-1,THBS1)基因敲除对结直肠癌免疫微环境与肿瘤进展的作用。方法构建THBS1基因敲除小鼠,经PCR、琼脂糖凝胶电泳明确小鼠基因型。用THBS1基因野生型(THBS1^(+/+))与THBS1基因敲除(THBS1^(-/-))小鼠构建结直肠癌皮下荷瘤与腹腔种植转移模型,观察THBS1基因敲除对小鼠肿瘤生长情况的影响。用流式细胞术检测腹腔种植转移模型中THBS1基因敲除后对结直肠癌附睾脂肪中免疫细胞的变化。结果与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1^(-/-)小鼠在结肠癌皮下荷瘤模型中肿瘤生长没有差异(P>0.05),而在腹腔种植转移模型中则显著抑制肿瘤生长(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除后腹腔种植转移模型小鼠的附睾脂肪组织中总巨噬细胞比例增高(P<0.01),其中M1型(经典型或促炎型)巨噬细胞比例升高(P<0.01)、M2型(替代活化型或抗炎型)巨噬细胞比例下降(P<0.01);髓源性抑制细胞(myeloid-derived suppressor cells,MDSC)比例下降(P<0.05),其中Ly6C亚群(P<0.01)比例升高,Ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8+T细胞比例显著升高(P<0.01)、CD4^(+)T细胞比例降低(P<0.01)。与THBS1^(+/+)小鼠相比,THBS1基因敲除小鼠外周血总巨噬细胞、M1型巨噬细胞、M2型巨噬细胞比例均无变化(P>0.05);MDSC及ly6C亚群比例无变化(P>0.05),ly6G亚群比例降低(P<0.05);CD8^(+)T细胞比例显著降低(P<0.05)、CD4+T细胞比例无变化(P>0.05)。结论THBS1基因敲除通过增强肿瘤免疫抑制结直肠癌细胞腹腔种植转移。

关键词：血小板反应蛋白1 结直肠癌免疫微环境附睾脂肪

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CD8^(+)T细胞耗竭在肿瘤免疫逃逸中的表观重编程机制及干预策略

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空军军医大学学报 2025年第4期46卷 556-560页

作者：张慧洁王丹蒋建利陈志南李一鸣空军军医大学国家分子医学转化中心基础医学院细胞生物学教研室陕西西安710032

肿瘤免疫治疗当前已成为肿瘤临床治疗的一大利器。然而,免疫逃逸是制约肿瘤免疫治疗疗效的瓶颈问题,导致肿瘤免疫逃逸的关键环节之一是CD8^(+)T细胞耗竭。研究表明,CD8^(+)T细胞在肿瘤微环境各种免疫抑制性因素的作用下发生表观重编程,... 详细信息

肿瘤免疫治疗当前已成为肿瘤临床治疗的一大利器。然而,免疫逃逸是制约肿瘤免疫治疗疗效的瓶颈问题,导致肿瘤免疫逃逸的关键环节之一是CD8^(+)T细胞耗竭。研究表明,CD8^(+)T细胞在肿瘤微环境各种免疫抑制性因素的作用下发生表观重编程,导致CD8^(+)T细胞耗竭。如何有效靶向调节表观重编程机制抑制CD8^(+)T细胞耗竭,是目前亟待解决的重点和难点问题。本文综述了肿瘤微环境CD8^(+)T细胞耗竭的特征以及在肿瘤免疫逃逸中的表观重编程机制,并阐明了靶向调节表观遗传机制改善CD8^(+)T细胞耗竭的策略,旨在为肿瘤免疫治疗提供新思路、开辟新路径。

关键词： T细胞耗竭表观重编程肿瘤免疫逃逸

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基于CRISPR/Cas9系统构建裸鼹鼠HIF-1α基因敲除质粒及其功能验证

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中国实验动物学报 2024年第2期32卷 202-209页

作者：张静远姜晓龙崔淑芳海军军医大学基础医学院实验动物学教研室上海200433

目的利用簇状规则间隔回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑系统构建质粒并敲除裸鼹鼠皮肤成纤维(NMR skin fibroblasts,NSF)细胞HIF-1α基因,为研究裸鼹鼠的耐低氧机制及缺氧相关疾病的发生发展机制提供体外细胞模型。方法针对裸鼹鼠HIF-... 详细信息

目的利用簇状规则间隔回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑系统构建质粒并敲除裸鼹鼠皮肤成纤维(NMR skin fibroblasts,NSF)细胞HIF-1α基因,为研究裸鼹鼠的耐低氧机制及缺氧相关疾病的发生发展机制提供体外细胞模型。方法针对裸鼹鼠HIF-1α基因的1~4号外显子区域设计4对sgRNA序列,并成功构建表达质粒。筛选得到最优sgRNA后,转染HEK-293T细胞收集上清液测定病毒滴度。前期用pLenti-Cas9(blast)病毒感染NSF细胞,后用制备的HIF-1α-sgRNA病毒感染表达Cas9蛋白的NSF细胞。经药筛后观察荧光表达,同时提取细胞gDNA和蛋白。通过T7E1酶和Western Blot检测NSF细胞中HIF-1α基因变化及蛋白表达情况。结果Sanger测序显示,所设计的sgRNA成功插入到pX459和pKLV2-U6-sgRNA2载体上,序列验证正确,重组质粒构建成功;T7E1酶切实验成功切除3条带,sgRNA的打靶效率为54%,Western Blot结果表明,经药筛后的裸鼹鼠NSF细胞HIF-1α基因敲除成功,蛋白水平显著降低(P=0.0019);且未发现HIF-1α敲除细胞形态的明显变化,基因敲除对细胞增殖能力无明显影响。结论成功构建靶向裸鼹鼠HIF-1α基因的CRISPR/Cas9质粒,且质粒靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功,将有利于裸鼹鼠耐低氧机制研究,并为人类缺氧相关疾病防治提供理论依据。

关键词：裸鼹鼠 HIF-1α 基因敲除 CRISPR/Cas9系统

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外周血炎症指标对晚期非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病患者免疫治疗疗效的影响

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中华医学杂志 2024年第18期104卷 1601-1609页

作者：毕周奎徐瑜郭亮张文静游雅婷李锦炜赵才林单亦凡夏婷婷李亚斐徐智范晔白莉陆军军医大学新桥医院呼吸与危重症医学科重庆400037 陆军军医大学陆军特色医学中心肿瘤科重庆400010 陆军军医大学军事预防医学系流行病学教研室重庆400037

目的探讨外周血炎症指标对晚期非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病(NSCLC-COPD)患者免疫治疗疗效的影响。方法回顾性分析2019年1月至2021年8月在陆军军医大学新桥医院接受至少2次免疫治疗的178例Ⅲ、Ⅳ期NSCLC-COPD患者资料,收集治疗前2... 详细信息

目的探讨外周血炎症指标对晚期非小细胞肺癌合并慢性阻塞性肺疾病(NSCLC-COPD)患者免疫治疗疗效的影响。方法回顾性分析2019年1月至2021年8月在陆军军医大学新桥医院接受至少2次免疫治疗的178例Ⅲ、Ⅳ期NSCLC-COPD患者资料,收集治疗前2周内白细胞介素6(IL-6)、IL-8、肿瘤坏死因子α(TNF-α)等基线血液检测指标。随访截至2022年2月7日。应用X-tile软件确定外周血炎症指标的cut-off值,采用多因素Cox回归模型分析无进展生存时间(PFS)和总生存时间(OS)的影响因素。结果178例患者中,男174例(97.8%),女4例(2.2%);年龄42~86(64.3±8.3)岁;免疫单药治疗30例(16.9%),免疫联合化疗治疗114例(64.0%),免疫联合抗血管治疗21例(11.8%),免疫联合放疗13例(7.3%)。中位随访时间为14.5个月(95%CI:13.6~15.3个月)。客观缓解率(ORR)为44.9%(80/178),疾病控制率(DCR)为90.4%(161/178),中位PFS为14.6个月(95%CI:11.6~17.6个月),中位OS为25.7个月(95%CI:18.0~33.4个月)。多因素Cox风险模型分析结果显示,IL-6>9.9 ng/L(HR=5.885,95%CI:2.558~13.543,P<0.01)、TNF-α>8.8 ng/L(HR=3.213,95%CI:1.468~7.032,P=0.003)、IL-8>202 ng/L(HR=2.614,95%CI:1.054~6.482,P=0.038)、全身免疫炎症指数(SII)>2003.95(HR=2.976,95%CI:1.647~5.379,P<0.001)是PFS的危险因素,晚期肺癌炎症指数(ALI)>171.15是PFS的保护因素(HR=0.545,95%CI:0.344~0.863,P=0.010);IL-6>9.9 ng/L(HR=6.124,95%CI:1.950~19.228,P<0.002)、乳酸脱氢酶(LDH)>190.7 U/L(HR=2.776,95%CI:1.020~7.556,P=0.046)、SII>2003.95(HR=4.521,95%CI:2.241~9.120,P<0.001)是OS的危险因素,ALI>171.15是OS的保护因素(HR=0.434,95%CI:0.243~0.778,P=0.005)。结论基线高水平IL-6、TNF-α、IL-8、SII、LDH和低水平ALI是接受免疫治疗晚期NSCLC-COPD患者预后不良的危险因素。

关键词：癌,非小细胞肺慢性阻塞性肺疾病免疫检查点抑制剂白细胞介素6 回顾性队列研究

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小鼠抗寨卡病毒包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第5期40卷 447-454页

作者：薛潘董阳超武福星陈洋张剑元航武苏闪袁若栋李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表... 详细信息

目的制备小鼠抗寨卡病毒(ZIKV)包膜蛋白胞外区(Eecto)单克隆抗体。方法首先构建ZIKV Eecto的原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,将其转化至大肠杆菌感受态BL21后,利用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。重组Eecto蛋白以包涵体形式表达,经过变性、复性和超滤获得纯化的蛋白。将Eecto蛋白3次免疫后,获得多克隆抗体血清,进行效价测定,并利用ZIKV prME真核表达质粒转染的HEK293T细胞进行Western blot法和免疫荧光法分析。取效价较高的小鼠脾脏制备脾细胞,与SP2/0骨髓瘤细胞融合,通过有限稀释法获取分泌抗体的杂交瘤细胞,并进一步制备腹水。对腹水进行抗体效价测定、亚类分析。以ZIKV同属病毒日本脑炎病毒(JEV)、黄热病病毒(YFV)、登革病毒1-4(DENV1-4)、蜱传脑炎病毒(TBEV)的Eecto为包被抗原,利用ELISA分析ZIKV单克隆抗体的交叉反应性,进一步对效价高、特异性强的抗体进行特异性分析。结果成功构建了原核表达质粒pET28a-ZIKV-Eecto,并获得纯化的Eecto蛋白,该蛋白具有良好的免疫原性;制备筛选得到1D6、4F11、4H7、4F8四株单克隆抗体,其中三株(1D6、4H7、4F8)为IgGκ型抗体,一株(4F11)为IgMκ,1D6腹水效价大于1∶108;其中1D6和4H7为ZIKV特异性抗体,与其他黄病毒无交叉反应。结论成功制备了小鼠抗ZIKV Eecto单克隆抗体,为后续建立ZIKV检测方法及致病机制研究提供了实验材料。

关键词：寨卡病毒(ZIKV) 包膜蛋白胞外区(Eecto) 原核表达单克隆抗体

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小鼠抗西方马脑炎病毒E2蛋白胞外区(E2ecto)单克隆抗体的制备

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第1期40卷 62-68页

作者：武福星董阳超张剑薛潘袁若栋陈洋元航李宝莉雷迎峰延安大学医学院陕西延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通... 详细信息

目的制备针对西方马脑炎病毒(WEEV)E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto)的小鼠特异性单克隆抗体(mAb)。方法构建表达WEEV E2ecto的原核表达质粒pET-28a-WEEV E2ecto,转化BL21(DE3)感受态细胞后,IPTG诱导表达,主要为包涵体形式。包涵体纯化后,通过变性、复性、超滤等制备得到E2ecto蛋白;以QuickAntibody-Mouse5W为佐剂,将E2ecto蛋白肌肉免疫BALB/c小鼠,间隔21 d加强1次。免疫后35 d,取效价超过1×104的小鼠腹腔接种1次E2ecto蛋白,3 d后取小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合。通过有限稀释法筛选稳定分泌特异性mAb的杂交瘤细胞,接种小鼠腹腔后制备腹水;利用ELISA检测抗体亚型及腹水中抗体效价的水平;将真核表达质粒pCAGGS-WEEV-CE3E2E1转染BHK-21细胞,通过免疫荧光法(IFA)鉴定上述mAb的生物学活性;利用东方马脑炎病毒(EEEV)、委内瑞拉马脑炎病毒(VEEV)的E2ecto蛋白进行ELISA鉴定上述抗体的特异性。结果成功表达及复性获得了纯化的WEEV E2ecto蛋白;制备了3G6G10、3D7G2、3B9E8、3D5B7四株mAb,其亚型分别为IgG2c(κ)、IgM(κ)、IgM(κ)、IgG1(κ);3G6G10、3B9E8、3D7G2腹水抗体效价均为105,3D5B7达到107;该4株抗体与VEEV和EEEV等其他脑炎甲病毒无交叉反应。结论成功制备了4株特异性结合WEEVE2ecto的小鼠mAb。

关键词：西方马脑炎病毒(WEEV) E2包膜糖蛋白胞外区(E2ecto) 原核表达单克隆抗体(mAb)

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外泌体miRNA与心血管疾病

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生命的化学 2025年第4期45卷 598-607页

作者：刘方玥儿杨杰蒋建利边惠洁南刚空军军医大学基础医学院学员一大队西安710032 空军军医大学国家分子医学转化中心基础医学院细胞生物学教研室西安710032

心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)是循环系统疾病,主要表现为心脏或血管功能异常。CVD的病因多样,包括血流动力学改变、基因突变、全身性疾病导致心脏损伤等,其发病机制与治疗方式仍需探究。外泌体是具有内吞起源的异质性的纳... 详细信息

心血管疾病(cardiovascular diseases,CVD)是循环系统疾病,主要表现为心脏或血管功能异常。CVD的病因多样,包括血流动力学改变、基因突变、全身性疾病导致心脏损伤等,其发病机制与治疗方式仍需探究。外泌体是具有内吞起源的异质性的纳米级膜囊泡,可以携带各种“货物”,如蛋白质、微小RNA(microRNA,miRNA)等。这些物质可以反映外泌体的细胞来源,并且可以实现细胞间信息交流从而改变靶向细胞的表型。源自不同细胞的外泌体miRNA参与CVD的发生发展,并产生不同的生物学效应。本文从外泌体miRNA参与CVD的发病机制出发,梳理了不同细胞来源的外泌体miRNA在CVD中的潜在作用及研究进展。

关键词：外泌体心血管疾病微小RNA

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靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞毒性作用的体内外验证

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第4期40卷 289-295页

作者：张仪婷席文锦王鹏举赵晓娟郑瑞梁思辛蒙若彤阎博杨安钢空军军医大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 延安大学生命科学学院陕西延安716000

目的对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估,为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞,采用软琼脂集落形成实验,观察HER2-CAR-T细胞集落... 详细信息

目的对靶向人表皮生长因子受体2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞进行毒理学评估,为其后期HER2-CAR-T细胞治疗的临床上评估提供安全性依据。方法利用重组慢病毒载体制备HER2-CAR-T细胞,采用软琼脂集落形成实验,观察HER2-CAR-T细胞集落形成情况并对集落形成率进行统计分析;将HER2-CAR-T细胞悬液与兔红细胞悬液共孵,通过直接观察法以及酶标仪检测法评估红细胞溶解情况;对雄性新西兰兔耳缘静脉注射HER2-CAR-T细胞制剂,通过组织切片染色观察HER2-CAR-T细胞对动物血管的刺激作用;以pMD 2.G载体上的水泡性口炎病毒囊膜糖蛋白(VSV-G)基因为目标序列,利用荧光定量PCR进行慢病毒载体安全性的验证;取接受HER2-CAR-T细胞输注的小鼠心、肝、肺、肾,HE染色观察其病变情况。结果成功制备了HER2-CAR-T细胞,这些细胞在体外不具备软琼脂集落形成能力,HER2-CAR-T细胞制剂对新西兰兔红细胞不产生溶血现象。新西兰兔耳缘静脉输注HER2-CAR-T细胞后未发现明显血管刺激反应,也未检测到VSV-G的特异性扩增,治疗组小鼠心、肝、肺、肾组织未见明显病变。结论所制备的HER2-CAR-T细胞具有可靠安全性。

关键词：安全性毒理学靶向人表皮生长因子2嵌合抗原受体T(HER2-CAR-T)细胞集落形成实验溶血血管刺激性器官毒性

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研究生免疫学思政教学案例库建设的探索与实践

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第9期40卷 859-862页

作者：方亮陈丽华空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

免疫学是生物学和医学领域的支柱性学科,对于生物学、医学、药学、生物技术等相关领域的研究生来说,免疫学也是一门专业必修课程。随着新时代党和国家对高等教育提出的新要求,课程思政成为加强高校人才培养和思想政治教育的新举措和新... 详细信息

免疫学是生物学和医学领域的支柱性学科,对于生物学、医学、药学、生物技术等相关领域的研究生来说,免疫学也是一门专业必修课程。随着新时代党和国家对高等教育提出的新要求,课程思政成为加强高校人才培养和思想政治教育的新举措和新方向。近年来我校研究生免疫学教学在思政改革方面取得了一定的进展和成绩,完成了思政教学案例库的建设。在建设过程中,我们以学科专业知识为主线,通过将思政内容系统化和分类化,创新性的凝练出包含多个类别的思政案例库。通过对案例库的使用,在研究生免疫学教学中有效解决了专业知识和思想政治教育较难融合这一关键问题,为教师提供有力的支持,同时提升了专业课程的教学效果,协助达成“立德树人,为战育人”的教学目标。

关键词：免疫学思政教学案例库

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