检索结果-内蒙古大学图书馆

KRT6A调控胰腺导管腺癌细胞生物学行为的作用及作为诊断与预后判断靶标的研究

中国肿瘤生物治疗杂志 2024年第5期31卷 462-468页

作者：王浩泽杨轩陈昕苑顾炎海军军医大学基础医学院免疫学教研室暨免疫与炎症全国重点实验室上海200433

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(... 详细信息

目的:通过生物信息学分析以及细胞生物学实验研究角蛋白6A(KRT6A)对胰腺导管腺癌(PDAC)诊断、预后判断、免疫微环境以及PDAC细胞PANC1增殖、凋亡等生物学行为的影响。方法:通过GEPIA平台整合TCGA(The Cancer Genome Atlas)数据库与GTEx(Genotype-Tissue)数据库中的数据,分析KTRT6A在PDAC组织中的表达情况,并通过CIBERSORT工具分析KRT6A表达与PDAC组织中免疫细胞浸润的关系,然后通过GSEA方法研究与KRT6A基因表达相关的肿瘤信号通路。选取长海医院病理科保存的60例PDAC组织与癌旁组织标本进行免疫组化分析,验证KRT6A在肿瘤组织中表达情况;通过干扰RNA敲减PANC1细胞中KRT6A的表达,采用CCK-8实验以及流式细胞术检测敲减KRT6A对细胞的增殖、凋亡的影响。结果:利用TCGA与GTEx数据库数据分析发现,KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,且与患者较差的生存期存在关联(P=0.015)。利用CIBERSORT软件以及GSEA分析发现,KRT6A高表达的PDAC组织中M2型巨噬细胞浸润性升高(P=0.034),且与Wnt通路(NES:1.7359272,P<0.05)、磷酸戊糖途径(PPP)(NES:1.5613053,P<0.05)等信号通路上调有关联(P<0.05或P<0.01);免疫组化结果进一步验证了KRT6A在PDAC组织中呈高表达(P<0.001)。增殖和凋亡实验发现,干扰KRT6A能够显著抑制PANC1细胞的增殖(P<0.05)以及凋亡(P<0.001)。结论:KRT6A在人PDAC组织中呈高表达,敲减其表达能够抑制PANC1细胞的增殖和凋亡,具有作为PDAC诊断与预后判断新靶标的潜力。

关键词：胰腺导管腺癌 KRT6A基因 PANC1细胞增殖凋亡诊断预后

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细胞代谢在病毒与宿主互作中的作用

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中华微生物学和免疫学杂志 2024年第9期44卷 814-821页

作者：王晓慧蒋钰玉丁莹莹刘星光上海理工大学健康科学与工程学院上海200093 海军军医大学基础医学院病原生物学教研室免疫与炎症全国重点实验室上海200433

细胞代谢是生命的基本特征之一,宿主代谢状态与病毒感染过程及结局密切相关。一方面,病毒可以利用宿主细胞中的代谢产物完成生命周期,当病毒颗粒吸附到易感细胞表面并进入细胞后,宿主细胞合成的一系列生物分子参与病毒在细胞内运输过程... 详细信息

细胞代谢是生命的基本特征之一,宿主代谢状态与病毒感染过程及结局密切相关。一方面,病毒可以利用宿主细胞中的代谢产物完成生命周期,当病毒颗粒吸附到易感细胞表面并进入细胞后,宿主细胞合成的一系列生物分子参与病毒在细胞内运输过程,使病毒完成其复制周期,并感染更多的细胞;另一方面,代谢反应与代谢物可以在病毒感染的各个阶段调控宿主抗病毒反应,从而影响病毒感染的结局。因此,细胞代谢是影响病毒感染及宿主抗病毒应答的关键。本文将分别从病毒在生物体内复制周期的6个阶段阐述细胞代谢在病毒与宿主互作中的作用。

关键词：细胞代谢病毒复制抗病毒反应病毒-宿主互作

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构建治疗非酒精性脂肪性肝病的TREM2慢病毒载体

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空军军医大学学报 2024年第6期45卷 609-616页

作者：魏莉邵思佳芶恺琳高春辰秦鸿雁空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032

目的构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对AML12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染AML12肝细胞系... 详细信息

目的构建TREM2不同截断体的慢病毒治疗载体,观察其在体外非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)条件下对AML12肝细胞的影响,为后续靶向巨噬细胞的治疗奠定理论基础。方法通过慢病毒包装的方式建立TREM2或可溶性TREM2(sTREM2)稳定转染AML12肝细胞系,利用qRT-PCR技术、Western blotting技术、流式细胞术检测转染效率,利用免疫荧光染色技术检测TREM2或sTREM2的表达和细胞定位;利用流式细胞术检测TREM2或sTREM2对体外NAFLD条件下细胞凋亡的影响和对静息态下细胞周期的影响;利用油红O染色观察脂质沉积变化情况。结果与对照组相比,稳定转染细胞系中TREM2和sTREM2 mRNA水平明显升高,蛋白表达量明显升高,提示成功建立稳定转染细胞系。在体外NAFLD条件下,过表达TREM2可减轻AML12肝细胞的凋亡和脂质沉积(P<0.05)。静息态下,过表达TREM2或sTREM2均使得G1期细胞数目比例减少(P<0.05),S期细胞数目比例增多(P<0.01),而体外NAFLD条件均使得S期细胞数目比例减少(P<0.01),G2期细胞数目比例增多(P<0.01)。结论肝细胞中TREM2的过表达可减少肝细胞凋亡和脂质沉积,进而保护肝细胞在NAFLD条件下免受损伤。

关键词：非酒精性脂肪性肝病 AML12肝细胞 TREM2 细胞凋亡

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M1巨噬细胞回输治疗小鼠肝癌的研究

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空军军医大学学报 2024年第7期45卷 749-755页

作者：卢羿同杨嘉蒙魏调霞赵俊龙秦鸿雁空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032

目的研究回输M1型骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)对原位肝肿瘤小鼠模型的治疗作用。方法①分离野生小鼠的骨髓细胞并体外诱导成BMDMs(即M0型巨噬细胞),在IFN-γ+LPS诱导下极化为M1型巨噬细胞。通过肝内接种Luciferase-Hepa1-6细胞建立原位... 详细信息

目的研究回输M1型骨髓来源的巨噬细胞(BMDMs)对原位肝肿瘤小鼠模型的治疗作用。方法①分离野生小鼠的骨髓细胞并体外诱导成BMDMs(即M0型巨噬细胞),在IFN-γ+LPS诱导下极化为M1型巨噬细胞。通过肝内接种Luciferase-Hepa1-6细胞建立原位小鼠肝癌模型。在接种肿瘤7 d后,经尾静脉回输PBS(对照组)、M0型和M1型巨噬细胞,通过小动物活体成像技术检测小鼠肝脏肿瘤的生长状态。接种21 d后,分离并观察肝脏肿瘤大小及称取质量,确定回输不同类型巨噬细胞对小鼠肝脏肿瘤进展的影响。利用流式细胞仪分析肝脏肿瘤癌旁组织内巨噬细胞亚群变化。②分离GFP转基因小鼠的骨髓细胞,诱导分化成M0型和M1型巨噬细胞后经尾静脉回输至肝癌小鼠体内,利用流式细胞仪及免疫荧光等方法检测回输1、3、7 d后肝脏内GFP阳性的BMDMs细胞数。结果与对照组相比,回输M0型和M1型BMDMs均促进了肝肿瘤的生长(P<0.05)。回输M0型或M1型BMDMs后,癌旁组织中枯否细胞增多,骨髓单核来源的炎性巨噬细胞增多(P<0.05)。经尾静脉回输1×10^(6)个M0型或M1型GFP+BMDMs,1 d后约3×10^(3)个细胞驻留于肝脏中,并随着时间增长逐渐减少。结论回输M1型巨噬细胞并未能达到治疗肝肿瘤的目的,反而促进肝肿瘤的生长。

关键词：肝癌巨噬细胞细胞治疗肿瘤相关巨噬细胞

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炎症应答中去泛素化酶圆柱瘤蛋白相互作用分子筛选和验证

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空军军医大学学报 2024年第6期45卷 617-624页

作者：杨羽淇安冬洁何飞秦鸿雁空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室陕西西安710032

目的筛选炎症应答中与去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)相互作用分子,探究并验证CYLD和参与NF-κB信号通路调节的桥梁蛋白14-3-3家族分子之间是否在细胞内存在相互作用。方法通过免疫共沉淀(Co-IP)飞行质谱筛选可能与CYLD相互作用分子,在不... 详细信息

目的筛选炎症应答中与去泛素化酶圆柱瘤蛋白(CYLD)相互作用分子,探究并验证CYLD和参与NF-κB信号通路调节的桥梁蛋白14-3-3家族分子之间是否在细胞内存在相互作用。方法通过免疫共沉淀(Co-IP)飞行质谱筛选可能与CYLD相互作用分子,在不同的刺激条件下诱导骨髓原代巨噬细胞向M1和M2极化,利用qRT-PCR、Western blotting技术检测CYLD及可能相互作用的候选分子14-3-3在巨噬细胞内的表达水平。结果CYLD抗体可以捕获14-3-3蛋白全部的7种亚型(β、γ、ε、η、ζ、δ、θ),提示CYLD很可能与14-3-3蛋白存在相互作用,选取质谱结果中得到特异性肽段最多的3种14-3-3亚型γ、ε、η(14-3-3γ/ε/η),检测结果显示在M0、M1、M2型巨噬细胞中CYLD和14-3-3γ/ε/η均有表达。构建了Myc-CYLD和Flag-14-3-3γ/ε/η真核过表达载体,用Flag抗体成功沉淀出CYLD蛋白,Co-IP结果提示CYLD和14-3-3γ/ε/η三种亚型均存在相互作用。免疫荧光实验显示CYLD和14-3-3在巨噬细胞内存在共定位现象。结论巨噬细胞炎症应答中CYLD和14-3-3γ/ε/η三种亚型可能存在物理上的相互作用。

关键词：巨噬细胞圆柱瘤蛋白 14-3-3亚型炎症应答

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胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)抗辐射作用的研究进展

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辐射防护 2022年第2期42卷 102-110页

作者：朱梦梅欧阳涛华天桢李琨于兵海军军医大学(第二军医大学)基础医学院上海200433 海军军医大学(第二军医大学)基础医学院细胞生物学教研室上海200433

电磁辐射、电离辐射、光辐射等辐射导致的组织器官损伤过程中常伴有活性氧(ROS)的激活和DNA损伤,而超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内广泛存在的一种抗氧化金属酶,在氧化-抗氧化平衡调控中发挥着重要的作用,并且参与了众多疾病的发生与发展... 详细信息

电磁辐射、电离辐射、光辐射等辐射导致的组织器官损伤过程中常伴有活性氧(ROS)的激活和DNA损伤,而超氧化物歧化酶(SOD)是生物体内广泛存在的一种抗氧化金属酶,在氧化-抗氧化平衡调控中发挥着重要的作用,并且参与了众多疾病的发生与发展,其中胞外超氧化物歧化酶(EC-SOD)主要分布于细胞外基质中。大量研究表明EC-SOD在多种组织器官的辐射损伤中发挥着抗辐射的作用,其主要通过降低ROS水平、抗血管生成,抗趋化和抗炎等方式防止细胞和组织的进一步损伤。因此,本文将对EC-SOD及其模拟物或类似物在辐射防护中的保护作用及其机制进行综述,为EC-SOD应用于辐射防护提供理论参考。

关键词：胞外超氧化物歧化酶辐射损伤抗辐射活性氧

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急性肝性脑病小鼠视觉功能障碍的机制研究

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神经解剖学杂志 2024年第5期40卷 533-540页

作者：李柯楠拜云虎王振华倪子薇朱昌磊刘慧杨雁灵王亚云空军军医大学基础医学院国家级基础医学教学示范中心西安710032 空军军医大学第一附属医院肝胆外科西安710032 延安大学医学院神经生物学教研室延安716000

目的:研究急性肝性脑病(AHE)模型小鼠视觉功能变化及其机制。方法:将12只成年雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组及对照组各6只,利用硫代乙酰胺(TAA)制备小鼠AHE模型,采用ELISA试剂盒检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)... 详细信息

目的:研究急性肝性脑病(AHE)模型小鼠视觉功能变化及其机制。方法:将12只成年雄性C57BL/6J小鼠,随机分为实验组及对照组各6只,利用硫代乙酰胺(TAA)制备小鼠AHE模型,采用ELISA试剂盒检测小鼠血清丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)水平;采用比色法检测血清氨水平;采用旷场实验及高架十字迷宫实验进行小鼠行为学检测;评估小鼠神经功能评分;采用苏木素-伊红(HE)染色进行小鼠肝脏及单眼(左眼)视网膜病理学检查;采用视觉电生理进行小鼠双眼视觉功能检测。采用逆行示踪腺相关病毒对c-Fos-Cre^(ERT2)小鼠丘脑腹外侧核(VL)进行标记。结果:与对照组相比较,AHE组小鼠肝功能指标异常并且出现神经功能改变;HE结果显示,肝脏组织出现明显肝细胞坏死、结构紊乱等改变;视网膜组织与对照组小鼠相比较无显著差异;视觉电生理结果显示,AHE小鼠双眼视觉功能改变(P<0.05);注射逆行示踪病毒结果显示,AHE模型激活的VL核团神经元主要接受来自同侧的视觉皮质神经元的传入投射。结论:TAA诱导的AHE小鼠视觉功能障碍主要为功能性改变,而非器质性改变,且与视觉皮质至VL通路激活有关。

关键词：急性肝性脑病视网膜视觉电生理丘脑腹外侧核视觉皮质小鼠

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川陈皮素在体内外模型中对肠干细胞增殖的影响

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陆军军医大学学报 2023年第21期45卷 2195-2205页

作者：吴静峰郭科男张宁吴天宇周子默陆治宇王锋超陈文生陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院消化内科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系复合伤研究所创伤与化学中毒全国重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院实验动物学教研室重庆400038

目的探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin,NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型,加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型,在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB... 详细信息

目的探讨在体内外模型中常用有效剂量川陈皮素(nobiletin,NOB)对肠道干细胞的调节作用。方法构建小鼠结肠癌细胞系MC38的3D培养模型,加入不同浓度NOB,观察克隆死亡和存活。构建小鼠小肠类器官模型,在类器官培养体系中添加不同浓度的NOB,观察类器官的出芽和生长,利用MTT染色后的类器官成像进行面积和吸光值计算。在50、100μmol/L浓度NOB干预体系中不同时间撤掉NOB,观察类器官生长。在50μmol/L浓度NOB处理类器官的体系中分别加入R-spondin1、CHIR99021加强Wnt通路激活信号,观察类器官的生长。对C57/B6J小鼠灌胃不同浓度NOB,连续给药4 d,观察肠道隐窝和绒毛长度比,观察隐窝细胞凋亡,以及隐窝底部干细胞龛中Olfm4/BrdU染色阳性的细胞数量。结果与对照组相比,50μmol/L NOB即可显著促进肿瘤细胞MC38成球后死亡,显著降低克隆形成率(P<0.001)。与对照组相比,NOB从50μmol/L起可以显著抑制肠类器官的出芽,50~200μmol/L NOB可以显著抑制类器官的生长(P<0.001),并且具有剂量依赖效应;NOB撤药后在50μmol/L时肠类器官生长容易恢复,在100μmol/L时难以恢复到正常水平。增强Wnt通路的激活可以部分挽救NOB对肠类器官的抑制作用。在体给予高于常用浓度的NOB不能诱导肠隐窝细胞凋亡,不影响肠干细胞的数目和增殖,不影响隐窝和绒毛比。结论NOB具有抑制正常肠干细胞的能力,可能通过调控干细胞相关通路如Wnt发挥作用,但其在在体不能发挥抑制干细胞增殖的效应;这提示NOB在常规浓度应用的安全性,同时提醒对NOB在在体肿瘤模型中发挥的抑制作用需要进行更深入的评估。

关键词：川陈皮素小肠干细胞小肠类器官细胞增殖在体

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合并慢性阻塞性肺疾病对晚期非小细胞肺癌患者免疫治疗的影响

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陆军军医大学学报 2023年第11期45卷 1189-1196页

作者：毕周奎单亦凡张文静游雅婷赵才林陈旻旻夏婷婷李亚斐白莉陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院呼吸与危重症医学科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系流行病学教研室重庆400038

目的探讨慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary disease,COPD)对晚期非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者接受免疫检查点抑制剂(immune checkpoint inhibitors,ICIs)治疗的疗效和免疫检查点抑制剂相关肺炎(checkpoint inhibitor pneumonitis,CIP)发生率的影响。方法采用回顾性队列研究设计方案,纳入2019年1月至2021年8月在陆军军医大学第二附属医院接受至少2次ICIs治疗的Ⅲb-Ⅳ期NSCLC患者379例,根据慢性阻塞性肺疾病全球倡议(global initiative for chronic obstructive lung disease,GOLD)2021或胸部高分辨CT诊断是否合并COPD,其中184例为NSCLC合并COPD组(NSCLC-COPD组),195例为单纯NSCLC组(NSCLC组),收集疗效终点指标包括客观缓解率(objective response rate,ORR)、无进展生存期(progression free survival,PFS)、总生存期(overall survival,OS)和CIP的发生率,分析COPD对晚期NSCLC患者接受ICIs治疗疗效和CIP发生率的影响。结果NSCLC-COPD组接受ICIs治疗的ORR显著优于NSCLC组(45.7%vs 35.4%,P=0.042)。调整混杂因素后的多因素Logistic分析显示,合并COPD是ORR的独立预后因素(HR=0.587,95%CI:0.379~0.909;P=0.017)。与NSCLC组相比,NSCLC-COPD组患者中位PFS更长(14.6月vs 10.9月;P=0.023)。调整混杂因素后的多因素Cox分析显示,合并COPD可能是PFS的良性预后因素(HR=0.768;95%CI:0.581~1.015;P=0.064)。COPD与OS无明显相关性。所有患者中13例患者发生CIP,其中NSCLC-COPD组9例(4.9%),NSCLC组4例(2.1%),两组发生率无统计学差异(P=0.162)。结论NSCLC合并COPD的患者接受ICIs治疗的ORR、PFS显著优于单纯NSCLC患者,提示COPD是晚期NSCLC患者接受ICIs治疗获得较好疗效的潜在预测因素。合并COPD并未增加CIP的发生风险。

关键词：非小细胞肺癌慢性阻塞性肺疾病免疫检查点抑制剂

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1-硝基芘通过线粒体损伤致卵巢颗粒细胞功能障碍

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陆军军医大学学报 2023年第9期45卷 947-956页

作者：崔浩楠何世军王立宏杨望杨彬伟凌曦邹鹏张国伟敖琳曹佳陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系毒理学研究所重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事预防医学系环境卫生学教研室重庆400038

目的探讨1-硝基芘(1-nitropyrene,1-NP)通过诱导线粒体损伤对人卵巢颗粒细胞KGN的增殖、周期进展及性激素合成的影响。方法采用不同浓度(0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L)1-NP染毒KGN细胞48 h,EdU掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细... 详细信息

目的探讨1-硝基芘(1-nitropyrene,1-NP)通过诱导线粒体损伤对人卵巢颗粒细胞KGN的增殖、周期进展及性激素合成的影响。方法采用不同浓度(0.625、1.25、2.5、5、10μmol/L)1-NP染毒KGN细胞48 h,EdU掺入法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞周期,ELISA检测细胞培养上清中雌二醇及孕烯醇酮浓度,DCFH-DA探针检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,MitoSOX探针检测线粒体超氧化物(mitochondrial superoxides,MitoSOX)水平,JC-1探针检测线粒体膜电位,ATP试剂盒检测细胞内ATP含量,Western blot检测细胞增殖、周期进展、DNA损伤反应以及性激素合成相关蛋白的表达。采用线粒体抗氧化剂IDE、1-NP单独和联合处理细胞,再次检测上述指标。结果不同浓度1-NP染毒后KGN细胞增殖显著降低(P<0.05)。2.5、5、10μmol/L的1-NP处理细胞后,细胞增殖标志物PCNA蛋白表达显著降低,5、10μmol/L的1-NP处理后G2/M期细胞比例显著升高(P<0.05)。1-NP(10μmol/L)处理3 h即可诱导γ-H2AX表达增加(P<0.01);不同浓度1-NP处理后,DNA损伤反应通路蛋白p-ATM、p53和p21cip1表达明显升高(P<0.05),G2/M期阻滞相关蛋白CDK-1和CyclinB1表达明显降低(P<0.05)。此外,1-NP处理后KGN细胞的雌二醇、孕烯醇酮浓度显著下降(P<0.05),性激素合成相关蛋白CYP19、CYP11A1的表达也受到抑制(P<0.05)。线粒体及氧化应激相关指标检测结果显示,1-NP导致KGN细胞中ROS、MitoSOX水平显著升高,线粒体膜电位和ATP水平呈剂量依赖性下降。与10μmol/L 1-NP单独染毒组相比,IDE与1-NP联合处理组G2/M期细胞比例显著下降,雌二醇、孕烯醇酮水平出现一定程度升高,DNA损伤反应、细胞周期进展以及性激素合成相关蛋白的表达也出现明显恢复。同时,IDE与1-NP联合处理显著改善1-NP诱导的线粒体损伤,包括降低细胞ROS和MitoSOX水平,提高线粒体膜电位和ATP水平。结论1-NP可诱导线粒体损伤,造成卵巢颗粒细胞KGN的增殖抑制、周期阻滞、性激素合成障碍,而提高线粒体功能则能部分缓解1-NP诱导的KGN细胞功能障碍。

关键词： 1-硝基芘人卵巢颗粒细胞系周期阻滞性激素线粒体

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