检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2008年第9期29卷 1042-1045页

作者：李勤张毅丁宇烽胡振林孙树汉惠宁第二军医大学长海医院妇产科上海200433 第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活... 详细信息

目的:探讨孕妇血样采集后体外存放过程中血浆游离DNA水平的影响因素。方法:采集孕妇血样,体外4℃存放6、36h后,实时定量PCR检测孕妇外周游离DNA水平,Annexin Ⅴ/PI双染色法流式分析血样白细胞死亡情况,速率法检测血浆乳酸脱氢酶(LDH)活性,单相酶扩散法测定血浆DNA酶活性。结果:血样体外存放36h后,血浆中β-globin基因的拷贝数较存放6h的样品显著增加,而SRY基因拷贝数明显减少;4℃存放条件下,妊娠晚期孕妇外周血中胎儿DNA占总DNA百分比从6h的(10.3±5.6)%下降到36h的(3.0±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。体外存放6h的血样中基本未检出死亡细胞,而存放36h的血样中分别检出了坏死和凋亡的白细胞;36h样品血浆中LDH活性较6h样品显著升高(P<0.05)。单相酶扩散法结果表明,血浆DNA酶在4℃时虽然活性显著减弱,但仍然保持降解DNA的能力。结论:血样采集后体外存放时间过长会导致血浆总游离DNA增多,而胎儿DNA减少,这种变化可能与血样体外存放过程中白细胞死亡和血浆DNA酶对胎儿DNA的降解作用有关;胎儿DNA抽提应在血样采集后尽早(6h内)进行。

关键词：孕妇血浆胎儿游离DNA Dnase 乳酸脱氢酶

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小鼠神经细胞p35^(nck5a)基因5′非编码区基因表达调控功能初步研究

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第二军医大学学报 2002年第2期23卷 147-149页

作者：朱海英周常文王秀凤傅继梁李建秀王新民胡以平第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433 山东省东营市环保科研所基础医学部细胞生物学教研室

目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小... 详细信息

目的 :观察阿尔茨海默病 (AD)的相关基因 p35 nck5a基因 5′侧翼区指导报告基因表达的能力。方法 :将对本实验室所克隆的 p35 nck5a基因 5′侧翼片段连接于报告基因 β-半乳糖苷酶基因的上游构建表达载体 ,利用体外培养细胞和转基因小鼠实验体系来观察该片段在体内、外基因表达调控的差异。结果 :体外培养细胞中 p35 nck5a基因 5′侧翼序列不具有决定报告基因神经特异性表达的能力 ,但在基因组中整合有相同表达载体的转基因小鼠体内却能够指导报告基因的神经限制性表达。结论 :这种差异提示进行体内。

关键词： p35^nck5a基因小鼠转基因基因表达调控神经细胞 AD病

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核酸疫苗pcDNA3-γcC1诱导囊尾蚴细胞凋亡的作用

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第二军医大学学报 2000年第11期21卷 1090-1091,I002页

作者：孙树汉郭瀛军陈蕊雯杨桦第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞... 详细信息

目的 :观察核酸疫苗 pc DNA3- γc C1免疫接种后动物宿主体内囊尾蚴的细胞凋亡现象 ,探讨治疗型核酸疫苗的作用机制。方法 :分离、培养囊尾蚴混合细胞 ,用原位末端标记 (TUNEL)法分别检测免疫接种组、非接种组以及培养诱导对照组细胞凋亡情况。结果 :非接种组 ,且未经凋亡诱导的细胞核无凋亡所特有的阳性着色 ;经诱导或免疫接种组的细胞核均表现为极强的凋亡所特有的阳性着色。结论 :首次观察到核酸疫苗接种后引起寄生生物细胞凋亡的现象。

关键词：核酸疫苗囊尾蚴细胞凋亡 pcDNA3-γcC1

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糖皮质激素受体基因片段的克隆和目标载体的构建

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第二军医大学学报 1999年第10期20卷 726-728页

作者：姚玉成胡以平第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅ... 详细信息

目的：构建针对糖皮质激素受体（ＧＲ）基因第２外显子的目标载体，为获得糖皮质激素受体基因缺陷型胚胎干细胞准备条件。方法：通过限制性酶切对ＤＮＡ片段进行了结构分析，克隆相应ＤＮＡ片段进行ＤＮＡ序列测定，利用ｐＴＫ－Ｎｅｏ质粒框架和同源片段构建载体。结果：详细分析了ＧＲ基因第２外显子及其侧翼的基因组ＤＮＡ片段结构，克隆了同源片段，构建了目标载体。结论：这一载体的构建将为进一步建立ＧＲ基因剔除小鼠奠定基础。

关键词：糖皮质激素受体目标载体克隆 GR基因

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电镜技术在病理学诊断中的应用

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第二军医大学学报 2003年第6期24卷 628-628,649页

作者：颜永碧陆月良王英第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

为摸索出适合临床超微结构病理诊断的电镜技术，更好地发挥其对疾病诊断的作用，现根据多年工作积累并结合临床实际，介绍本实验室在疾病诊断中电镜技术的应用情况。

关键词：病理学诊断电镜技术临床应用疾病诊断

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雄激素受体基因微卫星CAG多态与食管癌的分级

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中国肿瘤临床 2004年第3期31卷 121-123页

作者：舒青张素珍马群风第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室西安市710032 第四军医大学唐都医院胸外科

目的：探讨食管癌组织中雄性激素受体(AR)基因外显子1微卫星位点(CAG)n的多态性与食管癌分级的关系,及其与肿瘤生物学特性的相关性。方法:应用PCR扩增方法,对41例食管癌组织和30例癌旁组织AR的第一外显子CAG微卫星数量进行测定,并进行... 详细信息

目的：探讨食管癌组织中雄性激素受体(AR)基因外显子1微卫星位点(CAG)n的多态性与食管癌分级的关系,及其与肿瘤生物学特性的相关性。方法:应用PCR扩增方法,对41例食管癌组织和30例癌旁组织AR的第一外显子CAG微卫星数量进行测定,并进行不同级别间的比较分析。结果:食管癌组织AR基因(CAG)n重复范围8～28,癌旁组织n范围在8～24;食管癌组织n范围在≤10或≥22的占34.1%,比癌旁组织高(13.3%),经χ2检验有显著性差异;在29对配对的标本中,多态性发生改变的占48.3%;AR基因CAG微卫星的数量随着食管癌细胞分化程度的降低而减少,其低分化食管癌(13.6)均数低于高分化食管癌(17.5),短组AR基因CAG微卫星分布比例随着食管癌的分化程度的升高而降低,长组AR基因CAG微卫星分布比例随着食管癌的分化程度的升高而增加。结论:在食管癌组织AR基因(CAG)n重复多态的改变是高发事件,AR基因的(CAG)n微卫星数量的减少与食管癌的恶性程度相关。

关键词：食管癌雄性激素受体基因 CAG微卫星多态性

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猪囊尾蚴抗原cC1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合诱导小鼠免疫应答

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第二军医大学学报 2004年第1期25卷 34-36页

作者：吴丹王庆敏陈蕊雯朱维佳陈祖欢孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 G... 详细信息

目的 :观察 c C1 DNA疫苗和蛋白质疫苗联合免疫对诱导 BAL B/ c小鼠免疫应答的影响。方法 :雌性 BAL B/ c小鼠随机分为 4组 :A组 (DNA疫苗组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 3次 ;B组 (联合免疫组 ) ,质粒 DNA以 1 0 d间隔免疫 2次后以 GST- c C1融合蛋白加强免疫 1次 ;C组 (蛋白质疫苗组 ) ,分别在第 0、3周免疫接种融合蛋白 ;D组 (pc DNA3对照组 ) ,以 1 0d间隔 ,3次免疫接种质粒 pc DNA3。 EL ISA法检测血清样品中的特异性抗体水平以及实验小鼠脾脏淋巴细胞分泌 IFN- γ和IL- 4水平 ,以 MTT法行脾脏淋巴细胞增殖实验。结果 :C组可诱导相对较强的小鼠免疫应答 ,其特异性 Ig G和 Ig G1以及脾脏淋巴细胞分泌 IL- 4水平均高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ,免疫的类型以 Th2应答为主。B组诱导的特异性抗体水平和淋巴细胞分泌细胞因子水平均明显高于 A组 (P<0 .0 5 ) ,B组和 A组诱导的免疫应答类型均以 Th1应答为主。结论 :以 DNA prim ing-protein boost的策略可有效诱导较 DNA疫苗单独使用更高的特异性抗体应答 ,且以

关键词：猪囊尾蚴抗原 cC1 DNA疫苗蛋白质疫苗小鼠免疫应答

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影响核酸疫苗应用研究的若干问题

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第二军医大学学报 2002年第4期23卷 353-354页

作者：孙树汉第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于... 详细信息

核酸疫苗又称基因疫苗或DNA疫苗,这种核酸既是载体又能在真核细胞中表达抗原,刺激机体产生特异而有效的免疫应答,尤其是能诱导产生具细胞毒杀伤性功能的T淋巴细胞,可有效预防病毒、细胞内寄生细菌和寄生虫所引起的传染病.核酸疫苗由于具有可诱发全面的免疫应答、提供同种异株交叉保护作用、能制备抗多种病原体的多价疫苗、兼有预防和治疗的作用等优点,且制备简单、成本较低、容易储存运输,自上世纪90年代初问世以来,已在多种疾病[1～3]的防治研究中显示出巨大的应用潜力.在美国,目前乙肝病毒、HIV 核酸疫苗、流感DNA疫苗、单纯疱疹病毒DNA疫苗已进入Ⅱ期临床研究,疟疾DNA 疫苗已进入Ⅲ期临床研究.在我国,某些兽用疫苗也已进入应用研究阶段.然而核酸疫苗是一个新生事物,围绕着增强核酸疫苗的免疫效果和安全性、改善纯化工艺等国际热点问题,在理论上还没有真正得到解决.这些问题大大限制了核酸疫苗的推广应用.

关键词：核酸疫苗免疫应答安全性应用研究免疫效果

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绿色荧光蛋白基因在小鼠胚胎干细胞中表达效率的影响因素分析

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第二军医大学学报 2001年第4期22卷 319-321页

作者：杨桦戴建新戴旭明傅继梁第二军医大学基础医学部医学遗传学教研室上海200433

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子... 详细信息

目的 :研究绿色荧光蛋白 (GFP)基因在小鼠胚胎干细胞系 R1中表达的影响因素。方法 :构建 3个不同的 GFP真核表达载体 ,并从转录、蛋白表达水平比较了它们整合于宿主细胞染色体中的表达效率。结果 :在 GFP蛋白表达水平上 ,含肽链延长因子 (EF)启动子的表达载体和所转染的克隆明显高于含 CMV启动子及含双拷贝 CMV - GFP表达单元的表达载体 ;而p CMV- GFP和 pd CMV - GFP所转染的克隆之间无显著差别 ;NIH3T3和 ES细胞之间比较 ,GFP的表达水平无显著差异。转录水平与蛋白质水平的测定结果相一致。结论 :(1)在 NIH 3T3和 R1胚胎干细胞系中 ,EF启动子引导下的 GFP基因表达效率明显高于 CMV启动子 ;(2 )外源基因表达单元的拷贝数在染色体中的少量增加 ,不能明显提高表达效率 ;(3)获得了在 R1胚胎干细胞系中稳定、高效表达 GFP的载体 ,为后续工作奠定了基础。

关键词：绿色荧光蛋白胚胎干细胞基因表达影响因素小鼠

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肾小球诊断样品由光镜的冰冻切片补做电镜制样的方法

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第二军医大学学报 2003年第1期24卷 60-60,69页

作者：颜永碧谢志芳陆月良第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室上海200433

现代肾脏病学已普遍将光镜、电镜诊断作为肾小球病诊断的常规，尤其电镜检查配合临床以明确诊断十分重要。然而，有时因为各种原因在电镜制备的肾组织穿刺（肾穿）标本中找不到肾小球，但临床又非常需要电镜的观察结果。目前普遍采用光... 详细信息

现代肾脏病学已普遍将光镜、电镜诊断作为肾小球病诊断的常规，尤其电镜检查配合临床以明确诊断十分重要。然而，有时因为各种原因在电镜制备的肾组织穿刺（肾穿）标本中找不到肾小球，但临床又非常需要电镜的观察结果。目前普遍采用光镜常规石蜡包埋的肾小球组织经脱蜡后改做电镜制样进行补救，但标本因固定和脱蜡等因素，效果并不太理想。我们通过摸索和比较几种补救措施，现介绍一种用冰冻切片的肾小球经光镜检测后再进行电镜制样的方法

关键词：肾小球冰冻切片电镜制样肾脏病诊断

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