检索结果-内蒙古大学图书馆

第三届免疫学博士生论坛

作者：张鹏刘星光孟君曹雪涛第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室

研究背景:Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)作为重要的模式识别受体,能选择性识别病原相关分子模式,启动天然免疫应答。TLR信号过度活化或活化不足会导致机体免疫功能异常,因而TLR活化受到严密调控。CD1d分子是经典的脂质抗原递呈分... 详细信息

研究背景:Toll样受体(Toll-like receptor,TLR)作为重要的模式识别受体,能选择性识别病原相关分子模式,启动天然免疫应答。TLR信号过度活化或活化不足会导致机体免疫功能异常,因而TLR活化受到严密调控。CD1d分子是经典的脂质抗原递呈分子,能通过特异性激活自然杀伤T细胞(NKT细胞),发挥抗感染抗肿瘤的免疫功能。既往有研究报道CD1d分子交联后能触发细胞内下游信号的活化,诱导细胞因子的产生。然而关于CD1d逆向信号在抗原递呈细胞介导的天然免疫应答中所起的作用和生物学机制尚未见深入研究,CD1d逆向信号与TLR信号之间的关系及它们之间是否存在交叉调控值得进一步探讨。研究目的 :通过研究经典脂质抗原递呈分子CD1d在TLR介导的天然免疫反应当中的作用和信号机制,丰富感染免疫的内源性调控机制,为感染性疾病的治疗提供新思路。研究方法 :CD1d基因敲除小鼠和对照小鼠腹腔注射TLR配体或感染致病性病原体,观察血清中细胞因子产生的变化及对病原体的清除情况。小鼠腹腔巨噬细胞中观察CD1d缺失或CD1d抗体交联对TLR配体刺激后炎性细胞因子、I型干扰素产生及信号通路活化的影响。通过免疫共沉淀寻找能与CD1d相互作用的关键信号分子,探讨可能的相互作用机制。研究结果 :CD1d缺陷小鼠腹腔注射TLR配体LPS、poly(I:C)、Cp G后,血清中炎性细胞因子TNF-a、IL-6和I型干扰素IFN-β的产生较野生型小鼠明显减少。致病性大肠杆菌或李斯特菌感染后,CD1d缺陷小鼠血清中炎性细胞因子TNF-a、IL-6和I型干扰素IFN-β的产生较野生型小鼠明显减少,对病原体的清除能力也明显减弱。小鼠腹腔巨噬细胞中,CD1d缺陷使TLR配体刺激后炎性细胞因子TNF-a、IL-6和I型干扰素IFN-β的产生明显减少,而CD1d抗体交联则显著促进TLR配体刺激诱导的炎性细胞因子和I型干扰素的产生。CD1d缺陷小鼠腹腔巨噬细胞中LPS诱导的MAPK信号通路活化未受影响,但NF-κB和IRF3信号通路活化较野生小鼠明显减弱。相应的,小鼠腹腔巨噬细胞中CD1d抗体交联不影响LPS诱导的MAPK信号通路活化,但能显著增强NF-k B和IRF3信号通路活化。通过免疫共沉淀后质谱分析的方法发现TLR信号活化后,CD1d可以与酪氨酸激酶Pyk2结合。CD1d缺陷小鼠腹腔巨噬细胞中LPS诱导的Pyk2磷酸化活化较野生型小鼠明显减弱,而CD1d抗体交联能显著促进Pyk2的磷酸化活化。小鼠腹腔巨噬细胞中干扰Pyk2的表达能显著抑制TLR配体刺激诱导的炎性细胞因子和I型干扰素的产生。研究结论 :脂质抗原递呈分子CD1d通过招募并活化酪氨酸激酶Pyk2,从而正向调控TLR介导的天然免疫反应,对于维持机体免疫反应处于适度活化状态至关重要。

关键词： Toll样受体天然免疫 CD1d Pyk2

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新型体外滋养细胞胎盘屏障模型(PCB-HPT)的建立和鉴定

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现代妇产科进展 2014年第8期23卷 611-614页

作者：张磊高洁赵宁宁张维璐肖丹徐锐西安第四军医大学军事预防医学院流行病学教研室特殊作业环境危害评估与防治教育部重点实验室西安710032

目的:建立具有极性和完整性的体外滋养细胞胎盘屏障模型。方法:以永生化的、通过系统鉴定的人早孕滋养细胞株构建胎盘屏障模型(PCB-HPT)。采用细胞生长周期评估细胞屏障构建时间;采用透射电镜评估滋养细胞屏障的极性;采用上皮细胞电阻... 详细信息

目的:建立具有极性和完整性的体外滋养细胞胎盘屏障模型。方法:以永生化的、通过系统鉴定的人早孕滋养细胞株构建胎盘屏障模型(PCB-HPT)。采用细胞生长周期评估细胞屏障构建时间;采用透射电镜评估滋养细胞屏障的极性;采用上皮细胞电阻测量评估滋养细胞屏障的完整性。结果:该滋养细胞胎盘屏障模型采用0.4μm孔径、0.47cm2NUNC插入式细胞培养皿培养,建议小室接种细胞总数为6×104cells,细胞屏障构建完整的培养时间为3d,屏障可维持36～48h。光镜下细胞培养至融合后具有典型的"铺路石"样外观;透射电镜观察显示,屏障具有极性,滋养细胞屏障可形成紧密连接并产生较高的跨内皮阻抗(TER)达600Ω;证实该屏障具有完整性。结论:建立了具有极性和完整性的体外滋养细胞胎盘屏障模型,为研究妊娠期间病原体和物质跨越胎盘屏障机制研究提供了体外研究模型。

关键词：滋养细胞胎盘屏障极性完整性

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丙型肝炎病毒(HCV)非结构区NS3-5B蛋白的真核表达载体构建及其在BHK-21细胞中的表达

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科学技术与工程 2013年第36期21卷 10794-10797,10805页

作者：韩佩君雷迎峰吕欣杨敬姚敏乔卿华党品香尹文第四军医大学基础医学部微生物学与病原生物学教研室西安710032

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体... 详细信息

通过PCR方法扩增出HCV NS3-5b全长基因序列,克隆入真核表达载体pIRES2-EGFP中,构建重组质粒pIRES2-EGFP-NS3-5b。利用脂质体将该质粒转染至BHK-21细胞,通过荧光成像和Western Blot检测NS3-5b基因的表达。结果显示成功构建了真核表达载体pIRES2-EGFP-NS3-5b,并且NS3/4A蛋白和NS5B蛋白得到特异性表达,为下一步建立HCV RdRp活性的细胞评价系统和动物模型评价系统奠定了实验和理论基础。

关键词：丙型肝炎病毒(hepatitis e virus HCV) NS3-5B蛋白真核表达

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Notch信号通路在T淋巴细胞发育和功能中的作用

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国际遗传学杂志 2013年第4期36卷 173-177页

作者：韩俊高春辰叶和和张萍韩骅第四军医大学药学系第四军医大学医学遗传学与发育生物学教研室

T淋巴细胞的发育是由严格的遗传程序调控的精细过程,而Notch信号通路是这一高度复杂遗传程序中最为关键的一环。Notch还与T细胞的激活和功能密切相关。此外,大量的临床和实验室研究证实,Notch信号途径的关键分子是多种人类遗传病的致病... 详细信息

T淋巴细胞的发育是由严格的遗传程序调控的精细过程,而Notch信号通路是这一高度复杂遗传程序中最为关键的一环。Notch还与T细胞的激活和功能密切相关。此外,大量的临床和实验室研究证实,Notch信号途径的关键分子是多种人类遗传病的致病基因。Notch1受体基因的染色体易位或点突变是大多数成人T淋巴母细胞白血病的原因。该文将结合此研究室的工作,综述这一领域的相关进展。

关键词： Notch信号途径 T淋巴细胞细胞分化 T细胞激活

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间断复氧对大鼠血细胞的影响

间断复氧对大鼠血细胞的影响

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中华医学会第七次全国高原医学学术会议暨中国病理生理学会第九次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议

作者：蔡明春刘晓鹏李锦松徐刚黄瑊罗永昌高钰琪第三军医大学高原军事医学系高原生理学与高原生物学教研室高原医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室重庆 400038 空军航空医学研究所北京 100142

吸氧是改善高原缺氧的重要措施,但长期吸氧对高原移居者有何影响缺乏实验研究.本研究观察减压条件下间断增压对大鼠血细胞的影响,了解高原环境下长期间断供氧对机体的影响.结论显示，在高原间断供氧可维持白细胞和血小板数目稳定，有利... 详细信息

吸氧是改善高原缺氧的重要措施,但长期吸氧对高原移居者有何影响缺乏实验研究.本研究观察减压条件下间断增压对大鼠血细胞的影响,了解高原环境下长期间断供氧对机体的影响.结论显示，在高原间断供氧可维持白细胞和血小板数目稳定，有利于机体撤离高原后红细胞数量形态的恢复。

关键词：高原移居者血细胞间断复氧数量性状

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大鼠Ⅰ型肺泡上皮细胞的分离、培养及生物学特性研究

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解放军医学杂志 2014年第5期39卷 374-378页

作者：李勇杜娟余静王海燕岳彩黎曾灵蒋建新第三军医大学大坪医院野战外科研究所第四研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的改良细胞分离方法,得到高纯度的原代Ⅰ型肺泡上皮细胞(ATⅠ)并进行培养,初步观察其生物学特性。方法采用SPF级SD大鼠,通过酶消化法、IgG贴壁法和免疫磁珠法获得高纯度ATⅠ并进行培养,采用台盼蓝染色计算细胞活力,免疫荧光DAPI法鉴... 详细信息

目的改良细胞分离方法,得到高纯度的原代Ⅰ型肺泡上皮细胞(ATⅠ)并进行培养,初步观察其生物学特性。方法采用SPF级SD大鼠,通过酶消化法、IgG贴壁法和免疫磁珠法获得高纯度ATⅠ并进行培养,采用台盼蓝染色计算细胞活力,免疫荧光DAPI法鉴定细胞纯度和表型,倒置显微镜观察细胞生长规律,计数法绘制细胞生长曲线。结果每只体重120g左右的SD大鼠可获得(2.1±0.5)×106个ATⅠ,细胞活力为93.8%±1.6%,细胞纯度为91.0%±0.6%。培养3d后细胞完全黏附、伸展,培养7d后汇合形成单层扁平状。免疫荧光检测显示,培养的原代细胞水通道蛋白5(AQP5)和小窝蛋白1(Cav-1)呈阳性表达,表面活性蛋白C前体(pro-SPC)呈阴性表达。获取的ATⅠ可在体外增殖,生长曲线显示原代ATⅠ在对数增长期的倍增时间约为66h。结论改良细胞分离方法可以得到高纯度的ATⅠ,培养后细胞生长良好,可为研究以ATⅠ损伤为特征的肺部疾病提供可靠的体外模型。

关键词：肺泡上皮细胞,Ⅰ型细胞分离细胞培养技术

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间断复氧对大鼠心脏的影响

间断复氧对大鼠心脏的影响

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中华医学会第七次全国高原医学学术会议暨中国病理生理学会第九次全国缺氧和呼吸病理生理学术会议

作者：蔡明春刘晓鹏徐刚李锦松黄瑊罗永昌高钰琪第三军医大学高原军事医学系高原生理学与高原生物学教研室高原医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室重庆 400038 空军航空医学研究所北京 100142

吸氧是改善高原缺氧的重要措施,但长期吸氧对高原移居者有何影响缺乏实验研究.本研究观察减压条件下间断增压大鼠心脏结构变化,了解高原环境下长期间断供氧对机体的影响.结论表示，在高原间断供氧可降低心脏氧自由基损伤，减轻右心室压... 详细信息

吸氧是改善高原缺氧的重要措施,但长期吸氧对高原移居者有何影响缺乏实验研究.本研究观察减压条件下间断增压大鼠心脏结构变化,了解高原环境下长期间断供氧对机体的影响.结论表示，在高原间断供氧可降低心脏氧自由基损伤，减轻右心室压力，降低心肌肥厚程度:有利于撤离高原后心脏形态恢复。

关键词：移居者高原环境心脏结构间断供氧生理功能

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FNBP1参与HeLa细胞的形态控制与生长调控

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第三军医大学学报 2013年第19期35卷 2046-2050页

作者：李鑫温泉周云飞何玉霞张军重庆医科大学分子医学与肿瘤研究中心重庆400016 重庆医科大学细胞生物学及遗传学教研室重庆400016

目的研究FNBP1在HeLa细胞形态控制及生长调控过程中的作用。方法运用RT-PCR、Western blot法在mRNA和蛋白水平验证FNBP1在HeLa细胞中的表达;运用RT-PCR、Western blot法检测靶向siRNA干扰HeLa细胞内源FNBP1的表达情况,并于完全沉默和表... 详细信息

目的研究FNBP1在HeLa细胞形态控制及生长调控过程中的作用。方法运用RT-PCR、Western blot法在mRNA和蛋白水平验证FNBP1在HeLa细胞中的表达;运用RT-PCR、Western blot法检测靶向siRNA干扰HeLa细胞内源FNBP1的表达情况,并于完全沉默和表达恢复2个时相点检测HeLa细胞在细胞形态、细胞周期等方面的变化。结果FNBP1在HeLa细胞中稳定表达;FNBP1表达沉默后,HeLa细胞形态发生纤维状转变;FNBP1表达恢复后,HeLa细胞形态恢复至上皮状;FNBP1表达沉默后,干扰组处于S期的细胞为30.36%,较正常组(25.45%)明显增多(P<0.05);而G2期干扰组细胞比例(9.28%)低于正常组(11.88%,P<0.05);HeLa细胞周期在S期出现阻滞。结论 FNBP1作为关键调控分子,为HeLa细胞的形态建成及维持所必需;FNBP1可能参与HeLa细胞周期调控相关过程。

关键词： FNBP1 HeLa细胞形态控制生长调控

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二价金属转运体1参与脉络丛上皮细胞铅吸收的机制

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实用预防医学 2014年第7期21卷 769-772页

作者：于海波张洁琼宋晗骆文静陈景元郑刚第四军医大学劳动与环境卫生学教研室特殊作业环境危害评估与防治教育部重点实验室陕西西安710032

目的研究二价金属转运体1(DMT1)参与脉络丛上皮细胞系Z310细胞铅转运的机制。方法采用原子吸收分光光度法检测Z310细胞铅吸收的时间效应。免疫荧光法观察DMT1在Z310细胞内的表达。采用siRNA干涉DMT1表达,荧光实时定量PCR检测DMT1的表达... 详细信息

目的研究二价金属转运体1(DMT1)参与脉络丛上皮细胞系Z310细胞铅转运的机制。方法采用原子吸收分光光度法检测Z310细胞铅吸收的时间效应。免疫荧光法观察DMT1在Z310细胞内的表达。采用siRNA干涉DMT1表达,荧光实时定量PCR检测DMT1的表达水平。原子吸收分光光度法检测DMT1 siRNA干涉对细胞铅吸收影响。结果醋酸铅暴露后,Z310细胞铅吸收量呈时间-依赖性增高;DMT1在Z310细胞中有较丰富的表达,主要在胞质中呈较均匀的分布。与阴性对照组相比,siRNA干涉后,Z310细胞DMT1 mRNA表达水平下降了74.8%。DMT1siRNA干涉后细胞铅吸收量减少了52.3%(P<0.01)。结论在脉络丛上皮细胞吸收铅的过程中,DMT1起到重要的转运作用。

关键词：铅二价金属转运体1 脉络丛上皮细胞铅吸收 DMT1

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阻断跨膜氯离子转运减轻钙超载诱导的心肌损伤

阻断跨膜氯离子转运减轻钙超载诱导的心肌损伤

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第十届全国钙信号和细胞功能研讨会

作者：张建英武锋顾晓明金振晓孔令恒张圆周京军高峰第四军医大学生理学教研室西京医院心内科西京医院心外科西安医学院基础医学教研室

研究目的:氯离子是机体内最为丰富的阴离子,临床研究资料表明,心脏搭桥患者术后的血清氯离子增高程度与房颤的发生率密切相关。基础实验发现,氯通道阻断剂SITS和NPPB显著减少缺血‐再灌注(ischemia/reperfusion,IR)或缺氧‐复氧心肌死... 详细信息

研究目的:氯离子是机体内最为丰富的阴离子,临床研究资料表明,心脏搭桥患者术后的血清氯离子增高程度与房颤的发生率密切相关。基础实验发现,氯通道阻断剂SITS和NPPB显著减少缺血‐再灌注(ischemia/reperfusion,IR)或缺氧‐复氧心肌死亡。因为胞内钙超载被认为是缺血―再灌注心肌死亡的始动因素,所以我们认为,减少

关键词：钙超载氯离子钙矛盾心肌损伤

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