检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2013年第2期35卷 95-98页

作者：王杨陈彬姜晓梅王越付晓红何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨睾酮(testosterone,T)在乳腺癌细胞中对瓣状核酸内切酶(flap endonuclease 1,FEN1)表达的影响及其机制。方法以MCF-7作为研究对象,采用RT-PCR观察雌二醇(17β-estradiol,E2)单独作用以及分别与雌激素受体(estrogen receptor,ER)拮抗剂ICI182,780(ICI)和MAPK途径抑制剂U0126共同作用时FEN1表达的变化。以MCF-7aro(芳香化酶过表达的MCF-7)作为研究对象,采用RT-PCR观察加入单独的睾酮以及睾酮和芳香化酶抑制剂来曲唑(letro-zole)共同作用时FEN1表达的变化;采用Western blot观察睾酮单独作用以及分别与来曲唑和U0126共同作用时FEN1、p-ERK和p-Elk的变化。结果与对照组比较,加入雌二醇后MCF-7细胞中FEN1 mRNA的表达升高2.04倍(P<0.01),加入ICI和U0126后分别降低10.63倍和2.17倍(P<0.01)。加入睾酮后MCF-7aro细胞中FEN1 mRNA的表达升高1.66倍(P<0.01),蛋白的表达升高1.80倍(P<0.01);加入来曲唑后FEN1 mRNA的表达下降2.38倍,蛋白的表达降低1.84倍,加入U0126后蛋白的表达降低2.28倍(P<0.01);加入睾酮后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别升高2.28倍和2.60倍(P<0.01),加入来曲唑后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低2.60倍和2.37倍(P<0.01),加入U0126后ERK和Elk-1的磷酸化水平分别降低10.38倍和119.50倍(P<0.01)。结论睾酮可通过MAPK途径上调MCF-7 aro细胞中FEN1的表达。

关键词：乳腺肿瘤细胞系,肿瘤睾酮 DNA瓣核酸内切酶类

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小G蛋白RBJ致瘤模型的建立及其分子机制的临床标本验证

小G蛋白RBJ致瘤模型的建立及其分子机制的临床标本验证

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第三届免疫学博士生论坛

作者：俞宙陈涛涌杨明金曹雪涛第二军医大学免疫学研究所暨医学免疫学国家重点实验室浙江大学免疫学研究所

背景:RAS相关的小GTP酶在肿瘤的发生发展过程中发挥着很重要的作用,我们实验室最先发现的分子RBJ,作为第六种新的RAS相关的小GTP酶家族成员,它在肿瘤发生、发展过程中的作用还不清楚,我们课题组前期实验结果提示RBJ可以在细胞水平通过限... 详细信息

背景:RAS相关的小GTP酶在肿瘤的发生发展过程中发挥着很重要的作用,我们实验室最先发现的分子RBJ,作为第六种新的RAS相关的小GTP酶家族成员,它在肿瘤发生、发展过程中的作用还不清楚,我们课题组前期实验结果提示RBJ可以在细胞水平通过限制MEK出核活化ERK1/2,促进肿瘤的发生发展,但还需要在动物模型中验证其促瘤功能以及在临床标本中验证其发挥作用的分子机制。目的 :探讨RBJ在动物模型及临床标本中对肿瘤发生发展的影响及作用机制。方法 :在人胃肠道标本(包括对照、不同分期肿瘤)中通过免疫组化、定量PCR的方法,测定RBJ表达水平,并分析RBJ表达水平与肿瘤的发生以及肿瘤不同分期的相关性。用AOM-DSS诱导小鼠结肠癌的方法,诱导野生型小鼠、RBJ转基因小鼠、RBJ基因敲除小鼠结肠癌模型,分析RBJ在此模型中发挥的作用。利用免疫组化、组织芯片等方法,分析RBJ表达水平与磷酸化MEK、ERK表达水平之间的相互关系,进一步验证RBJ促进肿瘤发生发展的分子机制。利用基因组DNA测序的方法,检测在动物模型及临床标本中RAS、BRAF等基因突变的情况。结果 :RBJ在胃肠道肿瘤组织中的表达相较于正常组织要明显升高,而且RBJ的表达水平与肿瘤严重程度呈正相关。成功建立AOM-DSS诱导小鼠结直肠癌模型,并且发现在小鼠诱导结直肠癌模型中,RBJ的表达与小鼠结直肠癌的发生和发展呈正相关关系。在后续免疫组化和组织芯片的结果中我们发现,肿瘤组织中RBJ的表达水平与磷酸化MEK及磷酸化ERK的表达水平也呈正相关。通过对样本进行基因组DNA测序,我们发现RBJ的表达量不受RAS/BRAF基因突变的影响,并且在有或没有RAS/BRAF基因突变的样本中,RBJ的高表达都伴随着更多的磷酸化MEK和磷酸化ERK。以上结果与之前RBJ在细胞水平促进肿瘤细胞发生发展的分子机制是一致的。结论 :RBJ可以通过限制MEK的出核,继而加强MEK和ERK的磷酸化水平在体外细胞、动物模型及临床标本中促进肿瘤的发生和发展。这也提示我们在肿瘤治疗过程中,RBJ有可能成为一种潜在的治疗靶标。

关键词： RBJ MEK AOM-DSS诱导结直肠癌模型

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盐酸青藤碱诱导***926细胞自噬及其在抗炎中的作用

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第三军医大学学报 2013年第11期35卷 1084-1087页

作者：杨亭倪振洪龚薇何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞***926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的***926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子... 详细信息

目的探讨中药单体提取物盐酸青藤碱诱导人内皮细胞***926自噬的机制及其在抗炎中发挥的作用。方法Western blot检测分别以终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理12h后的***926细胞中自噬相关蛋白LC3Ⅱ、ERK2、磷酸化ERK2及炎症细胞因子HMGB1表达变化情况;荧光显微镜观察吖啶橙染色的经盐酸青藤碱诱导后***926细胞酸性小体变化情况。结果经终浓度为50、100μg/mL的盐酸青藤碱处理***926细胞后,与对照组比较,100μg/mL的盐酸青藤碱可使自噬相关蛋白LC3Ⅱ表达(0.67±0.05)及ERK2的磷酸化水平(1.08±0.05)上调(P<0.05),ERK抑制剂U0126可使LC3Ⅱ表达下调(P<0.05)及***926细胞中酸性小体减少;盐酸青藤碱可抑制***926中LPS诱导的HMGB1表达,自噬抑制剂氯喹可逆转该细胞中盐酸青藤碱对LPS诱导HMGB1表达的抑制作用(P<0.05)。结论盐酸青藤碱可通过ERK通路诱导***926细胞自噬,该自噬过程是盐酸青藤碱下调炎症细胞因子HMGB1进而发挥抗炎活性的机制之一。

关键词：盐酸青藤碱自噬 HMGB1 ERK 抗炎

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血清FGF-23与维持性血液透析患者透中低血压发生的关系

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中国中西医结合肾病杂志 2014年第4期15卷 314-317页

作者：卢宏涛谌卫张优张欢刘康吴海洋吴灏郭志勇第二军医大学附属长海医院肾内科上海200433 第二军医大学海军医学系学员二队上海200433

目的:探讨维持性血液透析(maintenance hemodialysis,MHD)患者发生透中低血压(intradialytic hypotension,IDH)与血清中可溶性klotho(soluble klotho,sKl)和成纤维细胞生长因子23(fibroblast growth factor23,FGF23)之间的关系。方法:横断面收集MHD患者病情资料,根据最近1个月内透析记录,将MHD患者分成无透中低血压组(N-IDH)和透析中低血压组(IDH)。收集患者同期实验室检查结果,并采集患者血清样本,检测血清FGF23与sKl水平。比较N-IDH与IDH患者之间生化指标差异。结果:共收集临床信息完整及血清标本完整患者80例,其中IDH发生率为77.5%,独立样本t检验分析结果提示五个指标在N-IDH和IDH组之间差异存在统计学意义,血铁蛋白(P=0.046)、血三酰甘油(P=0.045)、血iPTH(P=0.047)、钙磷乘积(P=0.042)和血清FGF23(P<0.001)。而sKl在两组间差异无统计学意义(P=0.747)。相关性检验提示IDH组的患者IDH发生频率与血清FGF23浓度的相关关系分析显示两者呈正相关(r=0.722,P<0.001)。结论:本组病例提示血清FGF23的水平与MHD患者透析中低血压的发生密切相关。

关键词：透中低血压成纤维细胞生长因子23 Fibroblast growth factor 23

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NVP-BEZ235增敏左旋棉酚杀伤肝癌HepG2细胞的作用

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第三军医大学学报 2013年第19期35卷 2024-2027页

作者：王滨倪振洪丁雯秦利燕连继勤何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235增敏左旋棉酚[(-)-gossypol]杀伤肝癌细胞HepG2的作用及可能机制。方法用NVP-BEZ235、左旋棉酚或二者联合处理HepG2细胞,CCK-8法检测不同处理对细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影... 详细信息

目的探讨PI3K/mTOR抑制剂NVP-BEZ235增敏左旋棉酚[(-)-gossypol]杀伤肝癌细胞HepG2的作用及可能机制。方法用NVP-BEZ235、左旋棉酚或二者联合处理HepG2细胞,CCK-8法检测不同处理对细胞增殖的影响,流式细胞术检测不同处理对细胞凋亡的影响,Western blot检测不同处理对细胞中mTOR磷酸化水平以及Mcl-1蛋白水平的影响。结果联合使用NVP-BEZ235和左旋棉酚可显著抑制HepG2细胞增殖,并促进细胞凋亡,其中左旋棉酚可上调HepG2细胞中mTOR磷酸化水平及Mcl-1蛋白水平,导致抵抗发生,NVP-BEZ235能够剂量依赖性抑制mTOR磷酸化(P<0.01),并抑制左旋棉酚对Mcl-1的上调作用。结论 NVP-BEZ235可通过抑制mTOR进而下调Mcl-1来增强左旋棉酚杀伤HepG2细胞的效果。

关键词：左旋棉酚 NVP-BEZ235 mTOR 肝细胞癌

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RasGRP3抑制巨噬细胞Toll样受体介导的炎症反应

RasGRP3抑制巨噬细胞Toll样受体介导的炎症反应

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：陈涛涌唐松青曹雪涛王建莉医学免疫学国家重点实验室暨第二军医大学免疫学研究所浙江大学免疫学研究所

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E3泛素连接酶Fbxo21在天然免疫中的功能及其分子机制研究

E3泛素连接酶Fbxo21在天然免疫中的功能及其分子机制研究

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第九届全国免疫学学术大会

作者：俞宙陈涛涌王建莉曹雪涛医学免疫学国家重点实验室暨第二军医大学免疫学研究所浙江大学免疫学研究所

研究背景:F-box蛋白是一类广泛存在于真核生物中,含有F-box结构域的蛋白家族,在泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)中因特异识别底物蛋白而参与细胞周期调控、转录调控、细胞凋亡、细胞信号转导等生命活动。我们课题... 详细信息

研究背景:F-box蛋白是一类广泛存在于真核生物中,含有F-box结构域的蛋白家族,在泛素-蛋白酶体途径(ubiquitin-proteasome pathway,UPP)中因特异识别底物蛋白而参与细胞周期调控、转录调控、细胞凋亡、细胞信号转导等生命活动。我们课题组通过siRNA技术筛选影响VSV病毒诱导的Ⅰ型干扰素或炎症因子的泛素连接酶,发现了F-box家族的成员Fbxo21可能在天然免疫中发挥重要作用,但是其在天然免疫过程的功能还未见报道。因此我们深入探讨了Fbxo21在天然免疫反应中的功能,可能为一些免疫相关性疾病的治疗的研究提供新的参考和方向。研究目的:明确FBXO21调控天然免疫的效应及其机制。研究方法:利用TLR配体,RLR配体及双链DNA病毒刺激RAW264.7细胞及腹腔巨噬细胞后,用定量PCR检测Fbxo21的表达量是否存在变化。利用RNA干扰技术降低Fbxo21的表达水平后,观察TLRs及各种病毒受体信号通路配体刺激后各个受体的表达水平是否存在异常,并检测细胞因子的表达水平。利用western blot技术研究信号通路变化。利用免疫共沉淀及质谱分析技术来研究Fbxo21的相互作用蛋白,并且体外验证靶蛋白,阐明其作用靶点及其泛素化修饰方式。结果:TLR配体及RLR配体VSV病毒刺激RAW264.7细胞及腹腔巨噬细胞后,细胞内Fbxo21的表达水平明显降低。在腹腔巨噬细胞中利用RNA干扰技术降低Fbxo21表达水平后,用VSV刺激细胞,干扰组细胞分泌的IL-6水平明显高于对照组,但TLR配体刺激组未发现明显差异。在VSV刺激后的干扰了Fbxo21的腹腔巨噬细胞中,产生了更强的NF-KB及JNK的活化。在免疫共沉淀后的质谱结果中,我们筛选出与Fbxo21可能的相互作用蛋白ASK1,并且在细胞中验证了两者的相互结合。Western blot实验发现,在干扰了Fbxo21的腹腔巨噬细胞中,ASK1的表达量有明显升高。我们的研究提示Fbxo21可能通过泛素化降解ASK1负向调控IL-6的表达。结论:Fbxo21可以负向调控VSV刺激后NF-KB及JNK的活化以及IL-6的表达,Fbxo21可以与ASK1相互结合,并且与其表达水平呈负相关关系,提示我们Fbxo21可能通过泛素化降解ASK1负向调控IL-6的表达。

关键词： Fbox21 RLR TLR IL-6 ASK1

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RasGRP3抑制巨噬细胞Toll样受体介导的炎症反应

RasGRP3抑制巨噬细胞Toll样受体介导的炎症反应

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第九届全国免疫学学术大会

作者：陈涛涌唐松青曹雪涛王建莉医学免疫学国家重点实验室暨第二军医大学免疫学研究所浙江大学免疫学研究所

研究背景:Toll样受体(TLR)的活化是一把双刃剑,过度的活化则导致损伤性的炎症反应和继发的自身免疫病,因此TLR的信号传导必须受到严格的调控。小G蛋白(如Ras、Rap)是一种分子量较小的可以结合GTP/GDP并水解GTP的重要蛋白质家族,其与TLR... 详细信息

研究背景:Toll样受体(TLR)的活化是一把双刃剑,过度的活化则导致损伤性的炎症反应和继发的自身免疫病,因此TLR的信号传导必须受到严格的调控。小G蛋白(如Ras、Rap)是一种分子量较小的可以结合GTP/GDP并水解GTP的重要蛋白质家族,其与TLR信号传导的关系目前研究极少,尤其是小G蛋白分子的调控分子与TLR以及天然免疫的关系目前尚未见相关报导。目的:探讨Ras鸟苷酸释放蛋白(Ras guanine nucleotide-releasing protein,RasGRP)对于TLR信号传导的调控作用及其分子机制。方法:首先使用q-PCR等方法探讨巨噬细胞中RasGRP1-4分子在TLR活化后的表达水平和变化趋势,寻找巨噬细胞优势表达的RasGRP分子。采用siRNA敲低相应RasGRP分子的表达后,采用不同浓度TLR配体处理巨噬细胞,q-PCR和ELISA方法检测细胞因子的表达水平以明确RasGRP分子的效应,并通过Western印迹检测TLR信号通路的改变。通过转基因小鼠的方法,建立高表达RasGRP3和功能缺陷的RasGRP3的转基因小鼠,使用TLR配体模拟感染的模型、Ⅱ型胶原诱导的关节炎(CIA)模型以及DSS诱导的结肠炎模型探讨RasGRP3在炎症反应中的作用。最后,采用CRISPR-Cas9介导的基因组编辑技术删除RAW264 7细胞RasGRP3的表达,验证其对TLR的调节效应和机制。结果:我们发现RasGRP3是巨噬细胞中优势表达的RasGRP分子,敲低RasGRP3的表达显著促进TLR3/4/9诱导的炎症因子TNF、IL-1β、IL-6和iNOS的表达或分泌,抑制Rap1的活化,提示RasGRP3通过活化Rap1负向调节TLR的信号传导,抑制巨噬细胞炎症炎症的产生。在模拟感染的转基因小鼠模型里,我们发现过表达RasGRP3的小鼠在受到TLR3/4/9配体刺激后,IL-6的产生显著下降;在CIA模型里,过表达RasGRP3的小鼠前肢关节表现为显著减弱的软骨损伤和显著改善的临床症状;在DSS诱导结肠炎模型里,过表达RasGRP3的小鼠结肠中炎症细胞的浸润和结肠损伤也显著抑制。信号分子的研究发现,RasGRP3促进Akt的去磷酸化但抑制ERK1/2的活化。结论:RasGRP3是重要的负向调节TLR信号传导的分子,RasGRP3通过抑制ERK1/2的活化抑制炎症因子的产生,在多种炎症性疾病中发挥保护作用,可能是巨噬细胞负向调节TLR活化的重要"刹车"机制。

关键词： TLR RasGRP3 Rap1 炎症反应巨噬细胞

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膜泡运输揭秘——解读2013年诺贝尔医学/生理学奖

膜泡运输揭秘——解读2013年诺贝尔医学/生理学奖

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2013年诺贝尔生理医学奖解读全国科普联动系列活动——陕西场报告

作者：李郁第四军医大学细胞生物学教研室

＜正＞～～

关键词：生理学高尔基体 ARF

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氦气的细胞学作用研究进展

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重庆医学 2014年第3期43卷 361-364页

作者：李雪史源第三军医大学大坪医院野战外科研究所儿科重庆400042

氦气可减轻心肌细胞和神经细胞缺血再灌注后的损伤，尽管氦气介导的细胞保护作用机制仍未阐明，但其部分信号传导通路已被证实。除通过不同的预处理和后处理方式发挥心、脑保护作用之外，氦气对肺、免疫系统及血管系统也有一定的保护作用。

关键词：氦细胞学血液动力学再灌注损伤细胞保护

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