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红景天苷对低氧环境下大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞缝隙连接蛋白Connexin43表达的影响

中国中西医结合学会泌尿外科专业委员会第十四次全国学术会议暨2016年广东省中西医结合学会泌尿外科专业委员会学术年会

作者：颜俊锋赵剑锋张高岳黄晓军陈刚吕伯东浙江中医药大学第二临床医学院浙江中医药大学附属第二医院泌尿外科浙江省中医药重点中西医结合男科实验室

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（CCSMCs）缝隙连接蛋白（Connexin43）表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组（21%O浓度）、低氧组（1%O浓度）、低氧+红景天苷8μg/ml组、低氧+... 详细信息

目的:探讨红景天苷对低氧SD大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞（CCSMCs）缝隙连接蛋白（Connexin43）表达的影响。方法:体外培养SD大鼠CCSMC,免疫组化法鉴定细胞;设正常对照组（21%O浓度）、低氧组（1%O浓度）、低氧+红景天苷8μg/ml组、低氧+红景天苷16μg/ml组、低氧+红景天苷32μg/ml组和低氧+红景天苷64μg/ml组,分别培养48 h;Western blot测定Cx43相对表达量。结果:体外培养CCSMCs生长良好,抗a-SMA和抗Desmin抗体免疫组化染色阳性;与常氧对照组相比,低氧组Cx43总蛋白和磷酸化表达量显著升高（P<0.05）,磷酸化比例未见明显变化,与低氧不加药组相比,不同浓度红景天苷干预后Cx43表达量仍升高,但是Cx43蛋白磷酸化比例降低,差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:低氧促进大鼠阴茎海绵体平滑肌细胞Cx43表达升高,安全剂量下红景天苷无法逆转上述缺氧改变,但是降低了Cx43磷酸化比例。推测红景天苷能通过降低Cx43磷酸化抑制缺氧引起的缝隙连接通道形成,保护平滑肌细胞功能。

关键词：阴茎海绵体平滑肌细胞低氧勃起功能障碍缝隙连接 Connexin43 红景天苷大鼠

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脂肪来源干细胞在小鼠放射性损伤涎腺组织中归巢的实验研究

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实用口腔医学杂志 2013年第3期29卷 323-327页

作者：胡翰青王艳邢红艳梁军王启明刘斌刘彦普第四军医大学口腔医学院颌面外科西安710032 解放军第九四医院口腔科第四军医大学唐都医院放疗科第四军医大学口腔医学院口腔生物学教研室及实验动物中心

目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)在C57小鼠放射性损伤涎腺组织中的归巢现象。方法:体外培养C57小鼠ASCs;建立C57小鼠涎腺放射损伤模型;荧光染料DiI标记的普通C57小鼠ASCs及GFP转基因C57小鼠ASCs、分别以每次2... 详细信息

目的:观察脂肪来源干细胞(adipose-derived stem cells,ASCs)在C57小鼠放射性损伤涎腺组织中的归巢现象。方法:体外培养C57小鼠ASCs;建立C57小鼠涎腺放射损伤模型;荧光染料DiI标记的普通C57小鼠ASCs及GFP转基因C57小鼠ASCs、分别以每次2×105/ml从尾静脉注射至涎腺放射损伤模型小鼠体内,注射3次,间隔6 h,末次注射24 h后处死小鼠,将下颌下腺制作成冷冻切片,荧光显微镜观察。结果:建立了C57小鼠ASCs细胞系及小鼠放射性涎腺损伤动物模型。尾静脉注射ASCs后在小鼠放射性损伤涎腺组织中观察到标记细胞。结论:ASCs能够归巢到小鼠放射性损伤涎腺组织中。

关键词： C57小鼠 ASCs 放射性损伤涎腺组织归巢

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脂多糖体外诱导牙周膜成纤维细胞发生内质网应激

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第3期29卷 277-279,281页

作者：王颖刘蓉蓉龚玖瑜王勤涛陈丽华第四军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032 第四军医大学第三附属医院牙周黏膜病科陕西西安710032

目的观测脂多糖(LPS)是否诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)发生内质网应激。方法体外培养HPDLF,分别用LPS(0.1、1、10μg/mL)刺激0、3、6、9 h后收集细胞,提取RNA。采用实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOPmRNA表达水平,通... 详细信息

目的观测脂多糖(LPS)是否诱导人牙周膜成纤维细胞(HPDLF)发生内质网应激。方法体外培养HPDLF,分别用LPS(0.1、1、10μg/mL)刺激0、3、6、9 h后收集细胞,提取RNA。采用实时荧光定量PCR检测葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、CHOPmRNA表达水平,通过RT-PCR检测XBP1mRNA表达水平及剪切活化情况。结果 LPS作用HPDLF 3 h后GRP78、CHOP、XBP1mRNA表达水平显著上调,其中XBP1mRNA表达水平在6 h达到高峰,并且出现活化的剪切形式XBP1s,而GRP78、CHOPmRNA表达水平持续上调。结论 LPS作用HPDLF后细胞发生内质网应激,且存在浓度和一定的时间依赖性。

关键词：脂多糖牙周膜成纤维细胞内质网应激 GRP78 XBP1 CHOP

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miR-25在人胃癌组织中的表达分析及其靶基因TOB1的鉴定

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中国肿瘤临床 2013年第9期40卷 529-533页

作者：黎伯胜左钱飞肖斌邹全明郭刚第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市400038

目的:分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本,用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧... 详细信息

目的:分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本,用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧光蛋白报告载体(pMIR-GFP-TOB1)(含有miR-25结合位点的TOB1的3'UTR片段),利用荧光素酶活性实验和GFP荧光强度报告实验鉴定miR-25的预测靶基因(TOB1)。qRT-PCR法和Western blot法分别检测TOB1的mRNA和蛋白质的表达水平。结果:miR-25在80%(8/10)的胃癌组织样本中表达上调。miR-25模拟物显著抑制了荧光素酶的活性(P<0.01)和GFP荧光强度。miR-25模拟物显著下调了AGS细胞中TOB1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达。结论:miR-25在人胃癌组织中表达上调,miR-25能结合TOB1的3'UTR并下调TOB1的mRNA和蛋白质的表达。

关键词： miR-25 TOB1 胃癌

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流体剪切应力对人骨肉瘤MG-63细胞基因表达的影响

流体剪切应力对人骨肉瘤MG-63细胞基因表达的影响

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第十四届国际骨质疏松研讨会暨第十二届国际骨矿研究学术会议

作者：张连昌张舒曹新生第四军医大学航空航天医学国家教育部重点实验室

目的:近期研究表明,骨骼细胞所受到力学刺激因素在骨的生长和吸收过程中起着十分重要的作用。骨细胞如成骨细胞、破骨细胞和骨衬细胞都是力学敏感细胞。力学敏感细胞可以感受力学信号刺激,将其转化为特定的生物化学信号,并通过细胞间隙... 详细信息

目的:近期研究表明,骨骼细胞所受到力学刺激因素在骨的生长和吸收过程中起着十分重要的作用。骨细胞如成骨细胞、破骨细胞和骨衬细胞都是力学敏感细胞。力学敏感细胞可以感受力学信号刺激,将其转化为特定的生物化学信号,并通过细胞间隙连接或者旁分泌作用传导至相邻骨骼细胞,进而导致骨的结构发生改变,这就是骨骼细胞的力学信号转导功能。然而,骨骼细胞的力学信号转导功能的分子机制尚未阐明。因此,我们对人骨肉瘤MG-63细胞的基因表达谱进行了芯片分析。方法:MG-63细胞常规培养72 h。随后,将MG-63细胞随机分为流体剪切应力(FSS)组和对照组。流体剪切应力组置于流体剪切系统中进行实验,FSS为1.5 Pa,作用时间为60 min。同时取对照组细胞置于含培养基的培养皿中,作为无FSS作用组。暴露结束后提取总RNA,并用Affymetrix基因芯片进行芯片分析,最后对两组间基因表达差异进行统计学分析。结果:与对照组相比,剪切应力组中有数千个基因的表达变化具有统计学意义。根据基因功能分析,我们发现大部分上调基因与细胞增殖、分化和蛋白合成相关;大部分下调基因与细胞的凋亡相关。结论:已有研究证明,流体剪切应力可以刺激成骨细胞的增殖。本研究所发现的剪切应力作用后差异表达的基因将有助于深入探讨骨骼细胞力学信号转导功能的机制。这些基因在骨骼细胞的力学信号转导功能中的确切作用还需要进一步的研究。

关键词：流体剪切应力 MG-63细胞基因芯片

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锌指蛋白ZBTB20对胰岛β细胞表达果糖1,6-二磷酸酶FBP1和分泌胰岛素的调节作用

锌指蛋白ZBTB20对胰岛β细胞表达果糖1,6-二磷酸酶FBP1和分泌胰岛...

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中国生理学会张锡钧基金第十二届全国青年优秀生理学学术论文交流及评奖会议

作者：张晔谢志芳周露婷李玲张海周光迪麻献华刘志民章卫平第二军医大学病理生理学教研室第二军医大学细胞生物学教研室第二军医大学附属长征医学内分泌科

胰岛β细胞合成、分泌胰岛素是机体血糖稳态调节的重要机制之一。果糖1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-Bisphosphatase,FBPase,分1、2两型)是葡萄糖异生作用重要的限速酶之一,与葡萄糖在细胞内的代谢状态关系密切。胰岛素分泌作为一种"... 详细信息

胰岛β细胞合成、分泌胰岛素是机体血糖稳态调节的重要机制之一。果糖1,6-二磷酸酶(Fructose-1,6-Bisphosphatase,FBPase,分1、2两型)是葡萄糖异生作用重要的限速酶之一,与葡萄糖在细胞内的代谢状态关系密切。胰岛素分泌作为一种"代谢-分泌耦联"的生物学过程,也与β细胞内葡萄糖的代谢调控紧密联系,但是FBPase在其中的作用不清楚。通过我们的研究

关键词：胰岛素胰岛素分泌 ZBTB20 锌指蛋白磷酸酶

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ERα及ERβ在HBV相关肝细胞癌中的表达及临床意义

ERα及ERβ在HBV相关肝细胞癌中的表达及临床意义

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中华医学会第十三次全国感染病学术会议

作者：罗晓丽谭文婷周媛但芸婕刘娜娜郭红邓国宏第三军医大学西南医院全军感染病研究所第三军医大学新桥医院消化内科

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)α及β在乙型肝炎病毒(hepatitis B vrius,HBV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法收集组织学病理诊断为肝细胞癌,并均为慢性乙型肝... 详细信息

目的探讨雌激素受体(estrogen receptor,ER)α及β在乙型肝炎病毒(hepatitis B vrius,HBV)相关肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)组织中的表达水平及其与临床病理特征的关系。方法收集组织学病理诊断为肝细胞癌,并均为慢性乙型肝炎的28例患者的肝癌组织及其相关临床资料,采用免疫组化EnVision法检测ERa和ERβ的表达情况,并分析其与临床病理特点的关系。结果 ERa及ERB在HBV相关HCC组织中表达主要以细胞浆为主,其阳性表达率分别为35.7%(10/28)和46.4%

关键词：肝细胞癌 HBV 临床意义

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吡柔比星通过PLCε-Bcl-2通路抑制膀胱癌细胞增殖

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第二军医大学学报 2014年第7期35卷 708-713页

作者：欧俐苹杜红飞吕长坤宋学东范砚茹罗春丽重庆医科大学检验医学院临床检验诊断学教育部重点实验室重庆市重点实验室重庆400016

目的探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2mg/L的吡柔比星处理24、48、72h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶C... 详细信息

目的探讨吡柔比星对膀胱癌细胞增殖的影响及其作用机制。方法膀胱癌细胞T24和BIU-87分别用0.4、0.8、1.6、3.2mg/L的吡柔比星处理24、48、72h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡率,qRT-PCR、RT-PCR检测磷脂酶Cε(PLCε)mRNA及凋亡调控基因Bcl-2mRNA的表达,蛋白质印迹法检测PLCε蛋白的表达。将膀胱癌细胞分为空白组、吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、吡柔比星联合PLCε干扰腺病毒载体(Ad-shPLCε)处理组,检测并比较各组细胞增殖和Bcl-2蛋白的表达量。结果在膀胱癌细胞T24、BIU-87中,吡柔比星对细胞的抑制率呈浓度、时间依赖性,即随着药物浓度增加、处理时间延长,细胞抑制率升高;吡柔比星促进T24和BIU-87细胞凋亡,并且抑制PLCε和Bcl-2表达。吡柔比星处理组、Ad-shPLCε处理组、Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组均能抑制细胞增殖和Bcl-2表达,且Ad-shPLCε联合吡柔比星处理组的抑制作用高于吡柔比星处理组,差异有统计学意义(P<0.05)。结论吡柔比星能有效抑制膀胱癌细胞的增殖,可能与其抑制PLCε癌基因及下游Bcl-2基因的表达有关。

关键词：吡柔比星磷脂酶Cε Bcl-2 膀胱肿瘤细胞增殖

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分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响

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现代生物医学进展 2013年第35期13卷 6848-6851,6936页

作者：李焱张杰武赟杨劲杨珂郭海英第三军医大学学员旅五队重庆400038 第三军医大学基础部细胞生物学教研室重庆400038

目的:探讨分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响。方法:用带有Wnt5a基因的腺病毒及对照组腺病毒作为载体感染体外培养的melan-a黑素细胞;MTT法测定细胞增殖率;体外氧化DOPA反应法测定酪氨酸酶活性;NaOH法... 详细信息

目的:探讨分泌性的糖蛋白Wnt5a对永生化小鼠黑素细胞系melan-a细胞产黑素的影响。方法:用带有Wnt5a基因的腺病毒及对照组腺病毒作为载体感染体外培养的melan-a黑素细胞;MTT法测定细胞增殖率;体外氧化DOPA反应法测定酪氨酸酶活性;NaOH法测定黑素含量;RT-PCR方法检测melan-a细胞中MITF的表达。结果:与AdGFP对照组相比,AdWnt5a处理组melan-a细胞的增殖率明显降低(P<0.01);DOPA反应法和NaOH法检测结果发现,Wnt5a能显著降低melan-a细胞内酪氨酸酶活性(P<0.01)以及黑素含量(P<0.05);RT-PCR结果表明,Wnt5a显著下调melan-a细胞内MITF的表达(P<0.01)。结论:以上结果显示,AdWnt5a处理组melan-a细胞的增殖率、酪氨酸酶活性、产黑素的量及MITF的表达均有所下降。实验结果提示,Wnt5a能有效抑制melan-a细胞产黑素的能力,并且其作用机制可能与下调MITF的表达有关。

关键词： Wnt5a 黑素细胞黑素

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聚乳酸-聚己内酯组织工程纤维环支架的制备及其性能研究

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 914-918页

作者：李玉东徐源周强宋磊刘威甘翼搏李培李松涛莫秀梅第三军医大学西南医院全军矫形外科中心组织工程国家地方联合工程实验室重庆市再生重建医学工程技术研究中心重庆市组织工程实验室重庆400038 东华大学化工与生物工程学院上海201620

目的探讨新的静电纺丝方法制备聚乳酸-聚己内酯[P(LLA-CL)]纳米纱作为组织工程纤维环支架的可行性,检测其理化性能及细胞相容性。方法在传统静电纺丝方法制备P(LLA-CL)纳米纤维支架的基础上,改用动态水流接收装置制备相同成分的纳米纱支... 详细信息

目的探讨新的静电纺丝方法制备聚乳酸-聚己内酯[P(LLA-CL)]纳米纱作为组织工程纤维环支架的可行性,检测其理化性能及细胞相容性。方法在传统静电纺丝方法制备P(LLA-CL)纳米纤维支架的基础上,改用动态水流接收装置制备相同成分的纳米纱支架,并对材料的表面形态、纤维直径、孔径、孔隙率、力学性能进行评估,分离培养兔纤维环细胞种植到支架上,观察细胞在材料上的生长形态、黏附、增殖、渗透情况。结果 P(LLA-CL)纳米纤维支架表面呈致密的网状结构,纤维排列无方向性,而P(LLA-CL)纳米纱支架表面呈疏松的网状结构,纤维排列有一定的取向;纳米纤维支架的孔径为(4.57±1.87)μm,孔隙率(74.2±1.5)%,纳米纱的孔径为(38.43±15.54)μm,孔隙率(86.7±9.3)%,两者比较差异有统计学意义(P<0.05);两者的力学性能相似。扫描电镜(SEM)显示纤维环细胞在纳米纤维支架上呈多边形生长,在纳米纱支架上呈长梭形生长;CCK-8结果显示细胞在两种支架材料上的黏附均很好,细胞在纳米纱上的增殖较纳米纤维支架明显增加;HE染色提示细胞虽然只能生长在纳米纤维支架表面,但却很好地渗透到纳米纱支架内部。结论静电纺丝方法制备的P(LLA-CL)纳米纱支架具有良好的三维孔隙结构和细胞相容性,有望成为较理想的组织工程纤维环支架。

关键词：纤维环组织工程支架聚乳酸-聚己内酯纳米纱

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