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2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议

作者：孙哲轶杨静文陈智武汉大学口腔医院口腔生物学教育部重点实验室

目的:基于"干细胞归巢"模式,探索建立SDF-1α介导的犬成熟恒牙原位牙髓再生模型,比较研究其再生组织与正常牙髓的形态特点以及自噬相关分子表达水平。方法:选取比格犬根尖孔闭合恒牙,牙髓暴露法诱导根尖周炎,根管预备消毒后... 详细信息

目的:基于"干细胞归巢"模式,探索建立SDF-1α介导的犬成熟恒牙原位牙髓再生模型,比较研究其再生组织与正常牙髓的形态特点以及自噬相关分子表达水平。方法:选取比格犬根尖孔闭合恒牙,牙髓暴露法诱导根尖周炎,根管预备消毒后针扎根尖出血,移植入负载SDF-1α的丝素蛋白支架,以单纯针扎出血诱导根管内形成血凝块为对照,建立成熟恒牙牙髓原位再生模型。HE、Masson三色法和苦味酸-天狼星红染色分析再生组织形态特点;免疫组织化学染色进一步检测自噬相关分子LC3和Atg5的表达。结果:血凝块对照组再生组织中主要为沿牙本质壁形成的较厚的牙骨质样组织,髓腔内有大小不一的骨样组织及少量含有小血管的结缔组织。负载SDF-1α的丝素蛋白支架组再生组织表现为血运较丰富的结缔组织,胶原纤维排列方式与正常牙髓类似,髓腔内未见骨样组织,沿牙本质壁形成较薄的矿化组织。此外,在再生组织中,Atg5和LC3均有表达升高,且负载SDF-1α的丝素蛋白支架组表达水平高于血凝块对照组。结论:基于"干细胞归巢"模式,丝素蛋白支架负载SDF-1α可有效实现原位牙髓再生,再生组织与正常牙髓类似,并伴随自噬相关分子表达升高。本研究将为牙髓再生的临床转化提供依据。

关键词：自噬 SDF-1α 犬干细胞归巢原位牙髓再生

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自噬参与SDF-1α介导的异位牙髓再生

自噬参与SDF-1α介导的异位牙髓再生

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2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议

作者：杨静文陈智武汉大学口腔医院口腔生物学教育部重点实验室

目的:探讨自噬对SDF-1α介导异位牙髓再生的调控效应。方法:冷冻干燥法制取多孔丝素蛋白支架并负载SDF-1α,扫描电镜和傅里叶红外光谱检测其表面形貌及物理化学特征。通过将支架整合经过预处理的牙根段(牙根段-丝素蛋白支架复合体)以模... 详细信息

目的:探讨自噬对SDF-1α介导异位牙髓再生的调控效应。方法:冷冻干燥法制取多孔丝素蛋白支架并负载SDF-1α,扫描电镜和傅里叶红外光谱检测其表面形貌及物理化学特征。通过将支架整合经过预处理的牙根段(牙根段-丝素蛋白支架复合体)以模拟牙髓微环境,接种DPSCs后,体外培养后扫描电镜观察细胞的形态或裸鼠皮下移植,建立异位牙髓再生模型。HE、Masson三色法、苦味酸.天狼星红染色、Western blot、免疫组织化学以及免疫荧光对再生组织进行组织学形态及增殖、成血管、成神经、成骨、成牙相关指标检测。Western blot、免疫组织化学、透射电镜以及免疫荧光共定位进一步检测自噬相关分子及其与血管内皮标记分子的共定位特点。结果:丝素蛋白支架孔径约为200±46μm,负载SDF-1α后并未改变支架的分子构象。DPSCs在上述支架可表现良好的铺展形态、增殖并伴随细胞外基质的分泌。牙根段-负载SDF-1α的丝素蛋白支架复合体整合人牙髓干细胞在裸鼠皮下可形成牙髓样组织,表现为富含血管和类似正常牙髓的新生胶原纤维形成,且牙本质壁沉积有DSP表达阳性的新生矿化组织。值得注意的是,再生组织中存在自噬及相关分子(Atg5,LC3)表达和自噬小体的形成。此外,LC3和血管内皮标记分子CD31呈现部分共定位的特征,提示自噬可能参与了异位再生牙髓组织的成血管过程。此外,再生牙髓样组织由供体细胞和宿主细胞共同组成。结论:丝素蛋白支架负载SDF-1α可有效实现异位牙髓再生;自噬可通过参与自体干细胞募集参与异位牙髓再生的过程。

关键词：自噬 SDF-1α 牙髓干细胞牙髓再生

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外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

外周胆碱酯酶抑制剂对严重创伤小鼠的保护作用

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2014第十届全国中西医结合灾害医学学术大会江苏省中西医结合学会灾害医学、重症医学专业委员会成立大会暨健康产业成果展示洽谈会

作者：刘政肖雅靳贺范霞杨雪唐婉琦严军梁华平第三军医大学大坪医院野战外科研究所第一研究室创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以... 详细信息

目的探讨外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明对严重创伤小鼠的保护作用。方法采用随机数字表法将18只体重18～19g的雌性C57BL/6小鼠随机分为3组,脂多糖对照组,2次打击模型组和新斯的明干预组(0.14mg/kg),每组6只。通过双后肢骨折并去眼球放血以及48h后注射脂多糖,构建"2次打击"小鼠模型模拟严重创伤并发院内感染。酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)和白细胞介素-10(IL-10)的水平。生化分析仪测定血清中谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)含量。另70只雌性C57BL/6小鼠构建2次打击模型后,随机分为生理盐水对照组(34只)和新斯的明干预组(36只),观察生存情况。结果较脂多糖对照组,2次打击模型组内毒素休克反应更为迅速、强烈,表现为明显湿冷、腹泻、萎靡、寒颤等。新斯的明下调2次打击小鼠血清TNF-α、IL-6水平,而不影响IL-10的表达。与模型组相较,新斯的明干预组血清ALT、AST和LDH含量显著降低。严重创伤后注射新斯的明似乎可以降低2次打击小鼠病死率(22.22%vs 41.18%),但差异无统计学意义(p=0.083)。结论外周胆碱酯酶抑制剂新斯的明能显著减轻严重创伤并发感染小鼠炎症反应,保护肝脏功能,但未能明显改善生存率。

关键词：创伤感染出血胆碱酯酶抑制剂

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脂多糖通过自噬作用促进氧化低密度脂蛋白诱导的泡沫细胞的形成

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现代生物医学进展 2014年第12期14卷 2205-2209页

作者：袁媛张利军王超郑鹏飞张秀敏叶菁冯旭阳第四军医大学病理学与病理生理学教研室陕西西安710032 唐都医院实验与检验输血科陕西西安710032 西京医院心脏内科陕西西安710032

目的:研究脂多糖(LPS)促进氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成的机制。方法:人源性THP-1细胞的培养,经ox-LDL诱导形成泡沫细胞。采用油红O染色鉴定泡沫细胞的形成,免疫荧光和Western blot方法检测自噬活性,观察自噬作用对泡沫... 详细信息

目的:研究脂多糖(LPS)促进氧化低密度脂蛋白(ox-LDL)诱导的泡沫细胞形成的机制。方法:人源性THP-1细胞的培养,经ox-LDL诱导形成泡沫细胞。采用油红O染色鉴定泡沫细胞的形成,免疫荧光和Western blot方法检测自噬活性,观察自噬作用对泡沫细胞脂质沉积的影响。结果:①经形态学观察,脂多糖可以促进ox-LDL诱导的泡沫细胞的形成。②脂多糖可以激活自噬作用,并且自噬活性在16h达到最强。③脂多糖可以增强自噬激活剂雷帕霉素(Rap)的促自噬作用(P<0.05),并且削弱自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-MA)的作用。④Rap单独作用不能影响泡沫细胞中脂质的累积,然而脂多糖能够增强Rap的作用,显著促进脂滴在泡沫细胞中的累积(P<0.05);3-MA可以抑制基础水平和脂多糖诱导后泡沫细胞中脂滴的积累。结论:脂多糖通过增强自噬作用促进泡沫细胞的形成。

关键词：脂多糖自噬泡沫细胞 ox-LDL

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兔脂肪干细胞增强脂肪移植效果的实验研究

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现代肿瘤医学 2014年第5期22卷 1034-1037页

作者：杨涛杨勇王艳胡晓光第四军医大学口腔医院头颈肿瘤外科军事口腔医学国家重点实验室陕西西安710032

目的:建立兔耳脂肪移植模型,观察兔脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)复合脂肪颗粒(adipose granule,AG)和富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)移植后的形态学变化,为临床脂肪干细胞移植提供实验依据。方法:以健康... 详细信息

目的:建立兔耳脂肪移植模型,观察兔脂肪干细胞(adipose-derived stem cells,ADSCs)复合脂肪颗粒(adipose granule,AG)和富血小板纤维蛋白(platelet-rich fibrin,PRF)移植后的形态学变化,为临床脂肪干细胞移植提供实验依据。方法:以健康新西兰家兔为实验动物,共取24只,随机分成4组(n=6):A组移植物为AG;B组AG+PRF;C组AG+ADSCs;D组AG+PRF+ADSCs。在术后1、3、6个月,用B超、游标卡尺测量移植脂肪后的体积变化。透射光活体观察各时间点新生血管的形成及HE染色分析其形态学改变。结果:术后1、3、6个月在脂肪存活率、免疫组化、透光观察等方面D组与A、B、C三组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论:ADSCs复合PRF、AG能够显著提高移植脂肪组织的成活率,可为临床脂肪干细胞移植提供实验依据。

关键词：脂肪移植脂肪干细胞脂肪颗粒富血小板纤维蛋白

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CaLY55减毒疫苗对侵袭性念珠菌感染小鼠的保护作用研究

CaLY55减毒疫苗对侵袭性念珠菌感染小鼠的保护作用研究

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全国首届真菌感染与宿主免疫学术研讨会

作者：王晓娟阎澜姜远英上海第二军医大学药学院新药研究中心

目的研究CaLY55减毒疫苗对小鼠系统性白念珠菌感染模型的保护作用,并阐明其保护机制.方法小鼠预先尾静脉注射CaLY55 2.5×106 cells,在免疫后第8、15、21、30天,分离小鼠血清并通过ELISA、免疫荧光(IFA)、中性粒细胞杀伤、CBA检... 详细信息

目的研究CaLY55减毒疫苗对小鼠系统性白念珠菌感染模型的保护作用,并阐明其保护机制.方法小鼠预先尾静脉注射CaLY55 2.5×106 cells,在免疫后第8、15、21、30天,分离小鼠血清并通过ELISA、免疫荧光(IFA)、中性粒细胞杀伤、CBA检测细胞因子等体外实验考察免疫血清体外抗白念珠菌作用.分离小鼠心、肝、脾、肺、肾制备匀浆,稀释不同倍数均匀涂于SDA平皿,计算脏器活菌落数目(CFU);用流式细胞术检测CaLY55免疫小鼠与对照组小鼠脾细胞CD4+、CD8+细胞的变化.其余免疫小鼠在不同时间点分别用致死剂量的白念珠菌标准株SC5314 1×106 cells攻击,观察接受攻击后小鼠40天存活率.结果小鼠尾静脉注射CaLY55 2.5×106 cells后30天生存率为100％.IFA实验发现免疫不同时间的抗血清均可与白念珠菌酵母态或菌丝结合;免疫之后的抗血清可增强体外中性粒细胞杀伤;免疫后小鼠血清TNF-α、IL-17、IL-12、IL-10与对照组相比显著升高;CFU实验表明CaLY55在小鼠心,肝,脾,肺,脑迅速富集并快速清除,肾脏则需要较长时间,而且富集量明显高于其它器官,说明CaLY55的靶器官主要是肾脏.免疫后小鼠脾细胞CD4+与阴性对照组分别为73.21％、27.70％;CD8+细胞则分别是50.93％、29.73％,并且CD4/CD8在免疫小鼠与对照组分别为1.44、0.93.预先用CaLY55免疫21天再用致死剂量标准株攻击后小鼠40天生存率是50％,而对照组全部死亡.结论 CaLY55减毒株主要富集在小鼠肾脏,预先注射减毒株可以保护侵袭性念珠菌感染的小鼠,其免疫保护机制涉及到体液免疫与细胞免疫.

关键词： CALY55 侵袭性念珠菌感染减毒株

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肾移植后体液性排斥反应的诊断、个体化治疗及转归

肾移植后体液性排斥反应的诊断、个体化治疗及转归

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GTAUF2014 & APSMHA2014第六届长城泌尿男科转化医学论坛暨第七届亚太男性健康与抗衰老研究学会年会

作者：王锁刚袁建林张更第四军医大学西京医院泌尿外科西安710032中国

目的:探讨肾移植后急、慢性体液性排斥反应的诊断与个体化治疗及预后,为体液性排斥反应患者的诊治提供宝贵的临床经验.方法:总结26例体液性排斥反应肾移植患者的临床资料.男20例,女6例,年龄为21-63岁,中位年龄46岁;肾移植时间7 d-10 y;...

目的:探讨肾移植后急、慢性体液性排斥反应的诊断与个体化治疗及预后,为体液性排斥反应患者的诊治提供宝贵的临床经验.方法:总结26例体液性排斥反应肾移植患者的临床资料.男20例,女6例,年龄为21-63岁,中位年龄46岁;肾移植时间7 d-10 y;3例为二次移植,余均为首次移植;CDC均＜5％;PRA阳性2例,余均为阴性.诊断主要依据临床表现,排除感染、外科并发症等,并结合实验室检查及移植肾病理,(和/或)结合以下指标:①组织学见小球炎及中性粒细胞或者单个核细胞在PTC内聚集;②移植肾组织C4d染色见PTC部位弥漫C4d沉积;③外周循环中出现有针对供体HLA抗体或者DSA的血清学证据.

关键词：

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基因熔解曲线谱型图技术分析肺结核患者CD4^+T细胞受体β链可变区基因多态性

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第二军医大学学报 2013年第12期34卷 1317-1322页

作者：张冬梅孙晓雷段义农汤伟周鸣鸣李正欣张菊张洁南通大学医学院病原生物学教研室南通226019 南通大学附属医院传染科南通226019

目的利用荧光定量PCR结合基因熔解曲线谱型图(gene melting curve spectratyping,GMCS)技术分析肺结核病患者外周血CD4+T细胞中T细胞受体(TCR)β链可变区(BV)基因多态性。方法提取15例健康人和30例肺结核患者外周血单个核细胞(periphera... 详细信息

目的利用荧光定量PCR结合基因熔解曲线谱型图(gene melting curve spectratyping,GMCS)技术分析肺结核病患者外周血CD4+T细胞中T细胞受体(TCR)β链可变区(BV)基因多态性。方法提取15例健康人和30例肺结核患者外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)中的总RNA,反转录成cDNA,以26个人TCRBV基因家族设计上游引物,共同的TCRβ链恒定区(BC)基因设计下游引物,荧光定量PCR扩增26个TCRBV基因家族谱系,样品谱系用荧光定量PCR中的DNA熔解曲线进行分析。结果在15例健康人外周血T细胞TCRβ链中,同一BV位点PCR产物的熔解曲线谱型相同。但是与健康人相比,30例肺结核患者的外周血TCRβ链26个BV位点熔解曲线谱型存在差异,差异比率为6.7%~33.3%,差异具有显著性(P<0.05,P<0.01)。此外,26个位点中有13个位点熔解曲线谱型差异比率≥20%。结论荧光定量PCR结合GMCS技术分析TCRBV基因家族谱系情况,方法稳定、简便,能较好地监测肺结核患者外周血T细胞TCR的β链谱型。

关键词： CD4阳性T淋巴细胞 T细胞受体β基因遗传多态现象肺结核

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TRPC3参与电磁辐射致培养的海马神经元凋亡

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第三军医大学学报 2013年第6期35卷 491-494页

作者：文莉莉米永杰陈纯海李茂全成都军区峨眉疗养院医务处 614200 成都医学院人体解剖与组织胚胎学教研室 610083 第三军医大学军事预防医学院劳动卫生学教研室重庆400038 公共卫生系卫生学教研室

目的研究电磁辐射后,瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与诱导海马神经元凋亡。方法以65 mW/cm2电磁波辐照原代培养的新生24 h以内Wistar大鼠海马神经元20 min,以未接受电磁波辐照的神经元为... 详细信息

目的研究电磁辐射后,瞬时受体电位通道蛋白3(transient receptor potential channel 3,TRPC3)是否参与诱导海马神经元凋亡。方法以65 mW/cm2电磁波辐照原代培养的新生24 h以内Wistar大鼠海马神经元20 min,以未接受电磁波辐照的神经元为对照组,将TRPC3-siRNA和对照寡核苷酸转染神经元后分别设立为辐照+TRPC3-siRNA干扰组和辐照+TRPC3假干扰组。采用实时定量RT-PCR法及蛋白质免疫印迹法检测TRPC3 mRNA和蛋白水平的表达,电磁辐射后用CCK8试剂盒比色法检测各组细胞存活率,Annexin V-FITC试剂盒染色后经流式细胞仪检测细胞凋亡,激光共聚焦显微镜观察胞内游离钙的变化。结果电磁辐射可明显增加神经元中TRPC3 mRNA和蛋白表达,细胞存活率为(58.8±3.6)%,凋亡率为(30.2±2.6)%,与对照组有显著差异(P<0.05);辐照+TRPC3干扰组细胞存活率为(86.3±4.1)%,凋亡率为(9.2±0.6)%,与辐照组有显著差异(P<0.05);辐射+TRPC3假干扰组与辐射组无明显差异(P>0.05)。辐照后胞内游离钙浓度显著升高,而TRPC3干扰后可以部分抑制其升高。结论 TRPC3表达增加所介导的细胞内游离钙升高可能是电磁辐射致海马神经元凋亡的原因之一。

关键词：电磁辐射 TRPC3 神经元凋亡

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血红素加氧酶-1在高糖诱导的间充质干细胞损伤中的作用研究

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生物医学工程学杂志 2013年第4期30卷 798-802页

作者：侯春丽沈雷吴杨霄杨明璨曾文李立陈文朱楚洪第三军医大学人体解剖学教研室国家教育部生物力学与组织工程重点实验室生物力学室重庆400038 齐齐哈尔医科大学人体解剖学教研室齐齐哈尔161006

本研究旨在探究血红素加氧酶-1(HO-1)高表达能否抑制高糖诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的损伤。实验采用高糖刺激BMSCs,通过激动剂和抑制剂分别上调和抑制BMSCs内HO-1的表达。通过MTT和ELISA法分别检测BMSCs的增殖及分泌生长因子的能... 详细信息

本研究旨在探究血红素加氧酶-1(HO-1)高表达能否抑制高糖诱导的骨髓间充质干细胞(BMSCs)的损伤。实验采用高糖刺激BMSCs,通过激动剂和抑制剂分别上调和抑制BMSCs内HO-1的表达。通过MTT和ELISA法分别检测BMSCs的增殖及分泌生长因子的能力。通过划痕实验以及Transwell实验检测BMSCs条件培养基对人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖及迁移能力的影响。研究发现,HO-1高表达不但可以促进BMSCs自身增殖,而且可以促进BMSCs分泌血管内皮生长因子(VEGF),进而加速HUVECs的增殖和迁移。结果表明,HO-1高表达的BMSCs不但可以抑制高糖损伤,而且可通过旁分泌促进血管内皮细胞的增殖和迁移,可能对糖尿病血管并发症的治疗具有重要作用。

关键词：高糖血红素加氧酶-1 骨髓间充质干细胞脐静脉内皮细胞

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