检索结果-内蒙古大学图书馆

现代生物医学进展 2013年第27期13卷 5205-5208页

作者：钟代星王秦豪茹懿药立波李霞第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:构建重组泛素连接酶tTRIP-U-box,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究通过靶向降解接头蛋白TRAF(TNF Receptor Associated Factor)家族蛋白,从而抑制破骨细胞活性提供基础。方法:分别设计引物,扩增tTRIP(TRAF-interacting pro... 详细信息

目的:构建重组泛素连接酶tTRIP-U-box,并克隆进入pFLAG-CMV4真核表达载体,为研究通过靶向降解接头蛋白TRAF(TNF Receptor Associated Factor)家族蛋白,从而抑制破骨细胞活性提供基础。方法:分别设计引物,扩增tTRIP(TRAF-interacting protein)分子C端伸展的coiled-coiled结构域以及E 3泛素连接酶CHIP的U-box结构域,再利用重组PCR,将tTRIP与U-box进行融合,双酶切之后将其插入真核表达载体pFLAG-CMV4,经过酶切鉴定及测序后,转染HEK-293T细胞系,Western印迹验证重组质粒的表达。结果:PCR结果显示tTRIP截短分子和tTRIP-U-box条带大小分别为660bp和1188bp,重组质粒经酶切鉴定和测序证实正确,转染后可见融合蛋白的表达。结论:成功构建真核重组表达载体pFLAG-CMV4-tTRIP-U-box,并且转染HEK-293T细胞系后证实其能够正确表达。

关键词：重组泛素连接酶破骨细胞基因表达

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Toll样受体7胞内区功能关键位点筛选及其机制研究(英文)

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第二军医大学学报 2012年第3期33卷 233-239页

作者：魏伟章意亮郭瀛军孙树汉第二军医大学基础部医学遗传学教研室上海200433

目的筛选出TLR7 TIR区对其信号传递起关键作用的位点,并解释该位点的作用机制。方法针对TLR7野生型序列,设计构建一系列TLR7缺失突变与点突变质粒。将这些质粒转染入HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测这些质粒对NF-κB信号通路的... 详细信息

目的筛选出TLR7 TIR区对其信号传递起关键作用的位点,并解释该位点的作用机制。方法针对TLR7野生型序列,设计构建一系列TLR7缺失突变与点突变质粒。将这些质粒转染入HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告基因检测这些质粒对NF-κB信号通路的影响。利用免疫共沉淀与蛋白质印迹实验验证TLR7突变体与其下游接头蛋白MyD88结合能力的变化。结果通过对TLR7胞内区截短突变分析,发现在其TIR区存在一个由16个氨基酸残基组成的区域对其信号传递至关重要。进一步的研究发现,该区域存在一个RXR信号基序。该基序位于1004位与1006位的两个保守精氨酸残基,为TLR7正常信号传递所必需。通过免疫共沉淀与蛋白质印迹实验,可以发现TLR7位于1004位的精氨酸对其与下游蛋白MyD88的结合至关重要。结论成功鉴定出TLR7 TIR区1004位的精氨酸对其信号传递起重要作用,该位点是通过影响TLR7与MyD88结合的方式发挥功能。

关键词： Toll样受体7 天然免疫信号转导

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电磁脉冲辐射致大鼠皮层神经元超微结构损伤效应及对空间学习记忆能力的影响

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神经解剖学杂志 2013年第4期29卷 360-364页

作者：张进邓斌徐浩李俊钢邓克强刘太阳生徐礼鲜第四军医大学口腔医学院第四军医大学口腔医学院麻醉科西安710032 厦门警备区医院厦门361104 第四军医大学人体解剖与组织胚胎学教研室暨梁球琚脑研究中心西安710032

目的:电磁脉冲辐射(electromagnetic pulse,EMP)可以引起中枢神经系统(CNS)损伤和神经行为学的改变。因此,研究EMP对CNS短期的生物学效应具有重要意义。方法:本文通过电子显微镜技术和Morris水迷宫技术,研究了场强为400 kV/m,脉冲为200... 详细信息

目的:电磁脉冲辐射(electromagnetic pulse,EMP)可以引起中枢神经系统(CNS)损伤和神经行为学的改变。因此,研究EMP对CNS短期的生物学效应具有重要意义。方法:本文通过电子显微镜技术和Morris水迷宫技术,研究了场强为400 kV/m,脉冲为200次的EMP辐射后短时间内对大鼠皮层神经元超微结构及空间学习记忆能力的影响。结果:辐照射后6 h的大鼠皮层神经元超微结构显示,神经元胞核内异染色质增多;核膜有不同程度凹陷、破损及皱缩。胞质内有明显的线粒体肿胀;胞内粗面内质网呈囊性变、脱颗粒。EMP辐射后24 h时,部分神经元出现染色质浓集、边移,甚至细胞核明显皱缩而失去结构,类似凋亡细胞特点,并有凋亡小体出现。Morris水迷宫结果显示,与正常对照组相比,EMP损伤后,大鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.05);动物在平台象限停留时间明显缩短(P<0.01)。结论:400 kV/m的EMP可引起大脑皮层神经元超微结构发生损伤,且导致实验动物空间学习记忆能力的下降。

关键词：电磁脉冲辐射超微结构凋亡学习记忆能力大脑皮层

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脂肪因子作为心脑血管疾病防治靶点的研究

脂肪因子作为心脑血管疾病防治靶点的研究

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作者：缪朝玉王培徐添颖李志勇管云枫中国人民解放军第二军医大学

该项目属生物与医药技术领域。心脑血管疾病是人类的第一杀手，严重威胁人类的健康。脂肪是机体最大的、活跃的内分泌器官，可分泌多种生物活性肽/蛋白质，统称为脂肪因子。脂肪因子在调节代谢和脏器功能中具有重要意义，是肥胖流行导... 详细信息

标准号: 1500110273

该项目属生物与医药技术领域。心脑血管疾病是人类的第一杀手，严重威胁人类的健康。脂肪是机体最大的、活跃的内分泌器官，可分泌多种生物活性肽/蛋白质，统称为脂肪因子。脂肪因子在调节代谢和脏器功能中具有重要意义，是肥胖流行导致心脑血管疾病的关键连接分子。该项目主要研究脂肪因子在心脑血管生理稳态和疾病发生中的作用及信号转导机制，并从脂肪因子新的视角，挖掘心脑血管疾病防治的新靶点。该项目在建立计算机化血压遥控测量、脑血流监测、血管功能检测、组织形态分析、活细胞共聚焦观测、高通量筛选等一系列先进技术平台基础上，利用多种自发性疾病模型、实验性疾病模型和基因工程动物模型，主要取得三方面科学发现。第一，找到了血管外膜脂肪调节血管生长的第一个物质分子Visfatin，确定了外膜脂肪释放的Visfatin和血流来源的Visfatin是以烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)活性方式促进血管平滑肌生长；揭示了血管外膜脂肪肾素血管紧张素系统(RAS)是临床重要治疗药物RAS抑制剂发挥作用的新靶位，提出了脂肪因子功能失衡是导致血管疾病发生发展的新机制。第二，首次确认了Visfatin(又名Nampt)可作为脑卒中防治新靶点，阐明了该靶点经Nampt-SIRT1-AMPK新途径对抗细胞凋亡/坏死、经Nampt-SIRT1-mTOR新通路激活缺血早期细胞自噬，从而促进神经细胞存活、发挥抗脑卒中作用；创建了基于Nampt靶点的高通量筛选系统，获得了多个新型活性化合物；确定了Nampt天然酶产物NMN可作为脑卒中防治候选新药。第三，阐明了限食发挥有益作用的新的生物学机制，可通过Leptin受体介导的STAT3通路，使中枢肥胖基因FTO表达下调，从而减轻体重、减少脂肪、改善胰岛素敏感性，为模拟限食延缓心脑血管疾病提供了新的干预靶点。该项目已在Ann Neurol 2011(IF=11.09)、Autophagy 2012(IF=12.04)、Cardiovasc Res 2009(IF=5.80)、Br J Pharmacol 2012(IF=5.07)等期刊上发表SCI论文16篇，SCI他引288次，单篇最高SCI他引84次，SCI他引超过27次有5篇，入选ESI全球高被引论文2篇。该项目获国家发明专利3项，另有5项专利已公开。许多研究结果、结论已被Nat Med、Lancet、Lancet Neurol、J Clin Invest、PNAS等重要他人研究所验证和引用，并得到了临床医学Lancet、心血管病学Eur Heart J、药理学Trends Pharmacol Sci、代谢领域Annu Rev Nutr、神经生物学Prog Neurobiol等重要专家综述的高度评价。相关理论成果已主编出版《心血管药理学》等专著教材。在国际上，应邀起草长达百页的研究指南；应邀发表编辑部专评；应邀做大会报告多次；应邀撰写专家综述多篇；应邀主编出版"脂肪因子与心脑血管疾病研究前沿"专辑，该专辑联合了美国、德国、希腊等9家实验室。这些有力推动了心脑血管药理学与脂肪生物学的交叉学科发展，并为转化研究奠定了重要基础。该项目在国家杰青项目、973项目结题时均被评为优秀项目，并被推荐为973计划项目重大研究成果。项目负责人获全国巾帼建功标兵、上海领军人才、军队拔尖人才，入选国家教育部创新团队。研究骨干获上海市科技启明星、总后优秀青年科技人才。

关键词：脂肪因子作用机制信号转导机制心血管疾病脑血管疾病防治靶点

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脾窝异位辅助性肝移植和多器官联合移植关键技术的建立及应用

脾窝异位辅助性肝移植和多器官联合移植关键技术的建立及应用

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作者：窦科峰陶开山韩骅王禾岳树强王德盛赵广跃易定华袁建林李霄中国人民解放军第四军医大学

单一器官移植技术已成熟，但某些疾病引起的肝功能及多脏器功能衰竭需行辅助性部分肝移植和多器官联合移植治疗。辅助性肝移植原有术式存在移植空间小、门脉血流竞争、移植肝萎缩等问题；多脏器联合移植手术技术复杂、难度极大，患者生... 详细信息

标准号: 1500250254

单一器官移植技术已成熟，但某些疾病引起的肝功能及多脏器功能衰竭需行辅助性部分肝移植和多器官联合移植治疗。辅助性肝移植原有术式存在移植空间小、门脉血流竞争、移植肝萎缩等问题；多脏器联合移植手术技术复杂、难度极大，患者生命濒危。针对上述问题，课题组率先创建新的辅助性肝移植和多器官联合移植关键技术，取得以下创新性成果：首创脾窝异位辅助性部分肝移植术式，为先天性代谢性肝病提供新的治疗手段。先天性代谢性肝病如Wilson’s病，是因铜代谢障碍引起肝功能和神经系统损害，仅需辅助性植入部分肝脏即可获满意疗效。因原有辅助性肝移植术式存在移植空间小、门脉血流竞争、移植肝萎缩等问题，国外报道原位辅助性肝移植2年死亡率高达23%。为此，课题组在国际上首创脾窝异位辅助性部分肝移植新术式。该术式切除肿大脾脏，将移植肝植入脾窝，解决了移植空间小的问题，进而又解决了“血管数量不匹配”、“血管口径不匹配”、“血管不够长” 及“胆汁流向”等难题，并成功应用于Wilson's病的临床治疗。在该基础上，课题组又开展国际首例劈裂式“两人异位”肝移植，用同一供肝分别对两位患者行原位部分肝移植、脾窝异位辅助性部分肝移植，实现“一肝两用”，提高供肝利用率。共完成脾窝异位辅助性部分肝移植14例，首例患者已健康存活6年8个月。首次建立辅助性肝移植的“一体两肝”评价体系，为评估辅助性肝移植临床疗效、指导治疗提供客观依据。为客观、准确评价移植患者体内自身肝与移植肝的功能，课题组在术中和术后，综合运用形态学、组织学、影像学、实验室和功能检查，建立了 “一体两肝”评价体系，并发现移植肝对自身肝有明显保护作用，提出了该术式的适应症和禁忌症。开展亚洲首例肝胰肾和心肝肾一期联合移植,建立了多器官联合移植“三原则”，为多器官联合移植提供宝贵经验。多器官联合移植是复杂的系统工程，并非单一器官移植简单累加。课题组建立了多器官联合移植“三原则”：一是根据器官重要性确定移植顺序；二是根据重要脏器的生理功能要求调节血流动力学状态；是根据免疫共存学说提出小剂量免疫抑制方案。并成功实施亚洲首例肝胰肾一期联合移植(2005年)和亚洲首例心肝肾一期联合移植(2008年)。肝胰肾联合移植患者是世界存活时间最长且健在的受体。发现在移植肝修复再生中以Notch信号和肝干/祖细胞为核心的新调控机制。辅助性肝移植术后移植肝缺血-再灌注损伤及损伤后修复再生的机制不清。课题组构建了Notch基因敲除小鼠模型，发现Notch信号阻断后会加重肝缺血再灌注损伤，其对稳定肝脏超微结构、促进肝细胞增殖起重要作用；肝干/祖细胞分泌肝细胞生长因子，促进肝修复再生。该研究丰富并完善了肝脏修复再生机制。发表论文192篇，其中SCI论文41篇，单篇IF最高11.66,总IF125,被引458次。主编、参编专著11部，其中英文专著2部。在17所三甲医院推广应用。脾窝异位辅助性肝移植术被写入2009年中国外科新进展。获中华医学科技一等奖和陕西省科技一等奖各1项。

关键词：肝移植治疗血流动力学肝病治疗

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PI3K／Akt信号通路与神经保护

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国际脑血管病杂志 2013年第2期21卷 143-147页

作者：杨帆周其全第三军医大学高原军事医学系高原疾病学教研室教育部高原医学重点实验室全军高原医学重点实验室重庆400038

PI3K／Akt通路是由磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidy linositol 3-kinase，PBK）始动的生物信号转导通路，在细胞增殖、细胞周期调控、凋亡启动、血管生成等方面发挥着关键作用。此外，PI3K／Akt通路还与中枢神经系统损伤的保护机制密切... 详细信息

PI3K／Akt通路是由磷脂酰肌醇3-激酶（phosphatidy linositol 3-kinase，PBK）始动的生物信号转导通路，在细胞增殖、细胞周期调控、凋亡启动、血管生成等方面发挥着关键作用。此外，PI3K／Akt通路还与中枢神经系统损伤的保护机制密切相关。深入研究PI3K／Akt、下游分子及其调控机制可能为脑损伤的治疗提供新的思路和方法。

关键词：磷脂酰肌醇3-激酶类原癌基因蛋白质c-akt 脑缺血血脑屏障神经保护药

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LXR对胆固醇稳态影响的研究进展

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现代生物医学进展 2013年第18期13卷 3584-3586页

作者：叶航羊王菲刘小花郭冬妹江渝第三军医大学基础部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

胆固醇是细胞膜的重要组成部分,构成生命的基本分子之一,也是胆汁酸和类固醇激素合成的底物,其代谢平衡受到诸多因素的精密调节。虽然胆固醇是细胞和人体生理功能所必需的,但血清总胆固醇增高可导致2型糖尿病、高胆固醇血症以及动脉粥... 详细信息

胆固醇是细胞膜的重要组成部分,构成生命的基本分子之一,也是胆汁酸和类固醇激素合成的底物,其代谢平衡受到诸多因素的精密调节。虽然胆固醇是细胞和人体生理功能所必需的,但血清总胆固醇增高可导致2型糖尿病、高胆固醇血症以及动脉粥样硬化等疾病。肝X受体(LXR)是一种重要的细胞核受体,是配体依赖的转录因子,包含LXRα和LXRβ两种亚型,LXRα在肝脏、小肠、巨噬细胞、脂肪组织中均有表达,而LXRβ有着广泛的表达。LXR与视黄醇类X受体结合后,形成异二聚体,刺激靶基因的表达。激活的LXR通过调节肠道对饮食胆固醇的吸收、肝脏对胆固醇的合成和降解以及胆汁酸的代谢,控制着胆固醇稳态。此外,LXR还参与调节脂肪形成、糖代谢、巨噬细胞的天然免疫和炎症反应等生理活动。因此,LXRs有望成为治疗动脉粥样硬化、阿尔茨海默氏等疾病的药物靶点。

关键词： LXR 胆固醇代谢

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静压力下兔髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化

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中国口腔颌面外科杂志 2014年第4期12卷 295-300页

作者：黄林剑李辉谢千阳张旻陈永进杨驰蔡协艺上海交通大学医学院附属第九人民医院·口腔医学院口腔外科上海市口腔医学重点实验室上海200011 第四军医大学口腔医学院陕西西安710032

目的：研究兔髁突软骨细胞对静压力的分子生物学响应。方法：体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞,使用形态学观察,COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色方法对P2代髁突软骨细胞进行鉴定;100kPa静压力条件下,分别对P2代髁突软... 详细信息

目的：研究兔髁突软骨细胞对静压力的分子生物学响应。方法：体外分离培养4周龄健康雌性新西兰大白兔髁突软骨细胞,使用形态学观察,COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色方法对P2代髁突软骨细胞进行鉴定;100kPa静压力条件下,分别对P2代髁突软骨细胞进行0、1、2、3和4 h的加压处理;采用CCK-8检测压力加载后各组细胞活性的变化;通过Western免疫印迹分析髁突软骨细胞COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达变化。采用SPSS19.0软件包对数据进行统计学分析。结果：兔髁突软骨细胞呈多角形,＂铺路石＂样排列,细胞爬片COL2A1和SOX9免疫细胞化学染色鉴定结果为阳性。100kPa静压力加载1 h时,细胞活性显著降低（P=0.04）,但在2~4 h后,细胞活性恢复并与对照组无显著差异。Western印迹结果显示,压力加载3 h和4 h时,COL2A1、SOX9、COL1A1和ALP的表达显著升高。其中,在压力加载4 h组ALP的表达量比3 h组低。结论：兔髁突软骨细胞对压力微环境的改变具有一定的适应能力,100kPa静压力加载4 h不会对髁突软骨细胞活性产生不可逆损伤。适宜的压力加载对髁突软骨细胞的成软骨和成骨能力有促进作用。髁突软骨细胞压力微环境的改变,可能影响颞下颌关节适应性改建和颞下颌关节紊乱病的病理过程。

关键词：髁突软骨细胞静压力 COL2A1 SOX9 COL1A1 ALP

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miRNA-144靶向调节钙粘蛋白11对间充质干细胞成骨分化的抑制效应

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第三军医大学学报 2013年第10期35卷 922-926页

作者：康夏康菲杨波郭洪峰权毅董世武第三军医大学基础医学部人体解剖学教研室重庆市生物力学重点实验室重庆400038 成都军区总医院骨科成都610083

目的证实miRNA-144靶向调节钙粘蛋白11(Cad-11)表达,抑制间充质干细胞(mesenchymal stem cell,MSCs)的成骨分化。方法通过双荧光素酶报告系统对Cad-11与miRNA-144的靶基因关系进行鉴定;将pre-miR-144及anti-miR-144分别转染MSCs,成骨诱导7、14 d后,实时定量PCR和蛋白印迹方法检测细胞中Cad-11及成骨标志物Runx2、ALP的表达情况,分析其与MSCs成骨分化的变化关系。黏附实验检测miRNA-144对MSCs成骨分化过程中黏附的影响。结果 Cad-11是miRNA-144的靶基因;miRNA-144在成骨诱导第7、14天可明显抑制Cad-11、Runx2和ALP的表达(P<0.05),同时降低MSCs的黏附性。结论 miRNA-144通过抑制Cad-11的表达对间充质干细胞的成骨分化起负向调控的作用。

关键词： miRNA-144 钙粘蛋白11 间充质干细胞骨生成

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抑癌基因NDRG2对人结肠癌细胞系Caco-2增殖的影响

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现代生物医学进展 2013年第8期13卷 1401-1404,1578页

作者：李剑英吴琳徐欣元张健沈岚第四军医大学生物化学与分子生物学教研室陕西西安710032

目的:采用重组慢病毒系统,在过表达和抑制NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)基因后,检测人结肠癌细胞系Caco-2的增殖情况。方法:分别采用NDRG2过表达慢病毒载体pLenti6-NDRG2和NDRG2干涉慢病毒载体pLKO.1-shNDRG2制备病毒并感染... 详细信息

目的:采用重组慢病毒系统,在过表达和抑制NDRG2(N-myc downstream regulated gene 2)基因后,检测人结肠癌细胞系Caco-2的增殖情况。方法:分别采用NDRG2过表达慢病毒载体pLenti6-NDRG2和NDRG2干涉慢病毒载体pLKO.1-shNDRG2制备病毒并感染Caco-2细胞,经14天耐药的筛选,获得稳定感染的细胞株;采用Real time RT-PCR和Western blot方法明确NDRG2在稳转细胞株中的表达情况,同时采用MTT方法检测细胞的增殖能力,通过流式细胞仪检测细胞周期变化情况。结果:Real time RT-PCR和Western blot结果表明,在慢病毒pLenti6-NDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2表达上调;pLKO.1-shNDRG2稳定感染的Caco-2细胞中,NDRG2的表达下调。MTT实验结果表明,NDRG2过表达细胞株中细胞的增殖能力下降,而pLKO.1-shNDRG2慢病毒感染Caco-2后细胞的增殖能力明显增加;流式细胞术结果显示,过表达NDRG2使Caco-2细胞在G0/G1期细胞增多而S期的细胞减少,抑制细胞内源性NDRG2后G0/G1期细胞减少而S期细胞增多。结论:通过过表达和抑制NDRG2基因,验证了NDRG2作为抑癌候选基因能够有效抑制结肠癌细胞Caco-2的增殖。

关键词： NDRG2 肿瘤慢病毒增殖

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