检索结果-内蒙古大学图书馆

作者：吴畏第三军医大学

学位级别：硕士

背景：已分化的体细胞可以通过体细胞核移植、干细胞提取物共培养、特定因子诱导和细胞融合等方法重编程为多能干细胞，在再生医学领域有巨大的应用前景。其中体细胞核移植技术难度大、成功率低，干细胞提取物共培养和特定因子诱导的方... 详细信息

背景：已分化的体细胞可以通过体细胞核移植、干细胞提取物共培养、特定因子诱导和细胞融合等方法重编程为多能干细胞，在再生医学领域有巨大的应用前景。其中体细胞核移植技术难度大、成功率低，干细胞提取物共培养和特定因子诱导的方法也都存在耗时长、效率低下等缺点。相比之下，细胞融合诱导体细胞重编程耗时最短，重编程效率也最高，但融合细胞为四倍体，限制了其临床应用，而更适合于用作体细胞重编程机制研究。细胞融合主要有化学方法(如聚乙二醇诱导融合法)、生物方法(如病毒诱导融合法)和物理方法(如电场诱导融合法)三种，这三种方法均已应用于诱导体细胞重编程的研究。其中聚乙二醇在诱导细胞融合过程中，对细胞损伤较大、残留细胞毒性且融合率较低，而病毒诱导细胞融合则存在病毒制备困难、操作复杂、灭活病毒的效价差异大、实验重复性差等缺点。电融合操作简单、无化学毒性、对细胞损伤小、融合率也更高，已成为研究体细胞重编程的重要手段。在重编程过程中，体细胞多能性基因的表观遗传学修饰是体细胞重编程的关键所在。这些表观遗传学的修饰包括：染色质重塑、组蛋白修饰和DNA的去甲基化，其中DNA去甲基化在体细胞重编程中尤为重要。虽然在哺乳动物体内尚未发现明确的去甲基化酶，但已有研究证实AID(Activation-induced cytidine deaminase)和Tet(ten-eleven translocation)酶可能分别通过对核酸的脱氨酶作用和羟基化实现DNA的去甲基化。目的：采用本实验室自主研发并经过改良的微流控电融合芯片，进行小鼠成纤维细胞和小鼠胚胎干细胞电融合实验，通过流式细胞术筛选出融合细胞，研究融合细胞的细胞生物学特性，证实融合细胞发生了体细胞重编程，并探讨体细胞重编程的去甲基化机制。方法及结果：本研究分为两个部分第一部分：细胞电融合及融合细胞的细胞生物学特性研究 1、通过将非融合区用绝缘材料封闭，使电场集中在融合区，改良了微流控电融合芯片，构建了高通量的细胞电融合平台，通过此平台将转染了绿色荧光的mESCs与转染了红色荧光的NIH3T3细胞进行电融合，其平均排队率为44.35%，平均融合率为59.88%，实现了NIH3T3/RFP和mESCs/GFP的高效融合。 2、通过流式细胞仪筛选出同时表达绿色荧光和红色荧光的融合细胞，在小鼠胚胎干细胞培养基中进行培养，发现其能够形成类似于mESCs的克隆。qPCR实验发现，NIH3T3细胞不表达多能性基因OCT4和Nanog，mESCs和融合细胞OCT4和Nanog基因mRNA水平较高，且两者统计学无差异。而融合细胞体细胞标记性基因CKAP2和LaminA/C表达下调，与NIH3T3相比分别下降了89%和95%，且融合细胞和mESCs的CKAP2和LaminA/C基因mRNA水平无统计学差异，说明NIH3T3/RFP和mESCs/GFP融合后，融合细胞的多能性基因和体细胞标记性基因表达水平均达到了与mESCs类似的水平，证实了融合细胞发生了体细胞重编程。第二部分：基于微流控芯片的体细胞重编程去甲基化机制的研究 1、利用斑点杂交方法检测细胞融合前后甲基化水平的变化，发现NIH3T3的5mC水平较高，几乎不表达5hmC，而mESCs和融合细胞则5hmC水平较高，几乎不表达5mC。通过BSP检测，发现NIH3T3的OCT4和Nanog基因启动子区的甲基化比例分别为64.38%和80%，mESCs的OCT4和Nanog基因启动子区的甲基化比例则为0%和4%，细胞融合后融合细胞OCT4和Nanog基因启动子区甲基化水平也分别降至16.88%和20%。再通过glucMS-qPCR方法检测发现融合细胞在融合后24h、48h、72h和96h的OCT4基因启动子区的甲基化比例分别为85.51%、64.06%、54%和28.04%，各时间点之间甲基化比例有统计学差异，说明融合细胞逐步发生了去甲基化。 2、qPCR检测发现，细胞融合后融合细胞的AID,Tet1,Tet2表达上调，分别是NIH3T3的2.9倍，10.5倍和14.4倍，是mESCs的2.1倍，2.2倍和2.3倍，三者之间均有统计学差异。Tet3表达下调，与NIH3T3相比下降了94%，与mESCs水平相似，融合细胞与mESCs两者之间无统计学差异。而NIH3T3,mESCs和融合细胞的TDG和MBD4基因表达水平相似，三者之间无统计学差异。免疫荧光检测也发现了AID在融合细胞和mESCs表达较高，而在NIH3T3中几乎不表达，提示Tet1,Tet2，AID,TDG和MBD4可能参与了融合细胞的去甲基化过程。结论： 1、通过改良的微流控电融合芯片，构建了高通量的细胞电融合平台，可实现mESCs与NIH3

关键词：微流控芯片电融合体细胞重编程 DNA去甲基化

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mmu-miR-294调控MMP3靶基因对LLC细胞侵袭迁移的影响

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第三军医大学学报 2013年第12期35卷 1200-1204页

作者：金俊余孙建国张岸梅王欣欣廖荣霞邱钧马虎陈正堂第三军医大学新桥医院全军肿瘤诊治研究所重庆400037 第三军医大学基础医学部医学英语教研室重庆400038 解放军第174医院肿瘤科厦门361003 遵义医学院附属医院肿瘤科贵州遵义563003

目的预测并验证小鼠mmu-miR-294调控的靶基因,探讨其在肺癌发生发展中的生物学功能。方法生物信息学预测mmu-miR-294可能调控的靶基因金属蛋白酶(MMP3),双荧光素酶检测验证mmu-miR-294调控MMP3的真实性;脂质体2000介导转染mmu-miR-294... 详细信息

目的预测并验证小鼠mmu-miR-294调控的靶基因,探讨其在肺癌发生发展中的生物学功能。方法生物信息学预测mmu-miR-294可能调控的靶基因金属蛋白酶(MMP3),双荧光素酶检测验证mmu-miR-294调控MMP3的真实性;脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物进入Lewis(LLC)细胞株,通过Transwell实验检测细胞侵袭、迁移能力的改变。结果重组质粒经XbaⅠ单酶切能获得约5 000 bp和100 bp的酶切片段,阳性克隆测序,双荧光素酶报告基因检测证明合成寡核苷酸链序列插入正确;脂质体2000介导转染mmu-miR-294模拟物,过表达实验组MMP3蛋白水平较对照组明显降低。转染mmu-miR-294模拟物后LLC细胞的侵袭迁移能力显著降低(P<0.01)。结论低表达mmu-miR-294有助于维持LLC的侵袭转移特性,增加其表达水平可以有效抑制LLC的侵袭迁移能力。mmu-miR-294可能通过调控其靶基因MMP3表达而发挥功能。

关键词： mmu—miR-294 肺癌干细胞肺癌 MMP3

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微泡超声空化的肝创伤止血作用及其病理机制

微泡超声空化的肝创伤止血作用及其病理机制

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作者：赵晓晨第三军医大学

学位级别：硕士

研究背景:创伤性肝损伤是腹外伤中最严重、死亡率最高的脏器损伤之一。在腹部外伤中，创伤性肝损伤的发生率仅次于脾损伤，而死亡率却占首位，高达10％-15％，其中，外伤所致不可控制的出血是导致患者死亡的主要原因。我们知道，肝脏具... 详细信息

研究背景: 创伤性肝损伤是腹外伤中最严重、死亡率最高的脏器损伤之一。在腹部外伤中，创伤性肝损伤的发生率仅次于脾损伤，而死亡率却占首位，高达10％-15％，其中，外伤所致不可控制的出血是导致患者死亡的主要原因。我们知道，肝脏具有物质代谢、合成蛋白质、解毒、内分泌等许多重要的生理功能，肝功能的异常必然会影响到机体的预后和转归，因此，尽早止住活动性出血、尽量实施保留脏器的治疗、为再次手术赢得时间是创伤早期救治中的重要环节。目前，创伤性肝损伤的治疗方法主要有剖腹手术治疗和腹腔镜、选择性动脉栓塞、ERCP和CT引导等微创治疗。肝脏是人体最大的实体器官，其血运丰富，质地柔软、易脆，抗牵拉强度低，手术缝合修补比较困难。手术止血治疗过程中应用较为广泛的止血方法是填料止血，直接作用于创面达到压迫止血的目的，该方法的缺点是需要二次手术取出纱布，并且并发症较高；另一种方法是采用明胶海绵等止血材料填塞，此方法耗时较长且对操作者熟练程度要求高；而微创技术大多要求有大型仪器设备，操作比较复杂。微创肝创伤止血技术是近年发展方向，主要有：介入血管栓塞、微波或者射频热凝固止血、高强度聚焦超声热凝固止血以及超声引导下注射止血剂等。因此，尽管这些治疗方法有各自的优势，但在实际应用不能满足及时诊断、快速止血的要求，存在相应的不足。微泡超声空化是一已知的物理现象，体内超声空化的发生依赖微泡的形成、生长和压缩崩溃内爆。超声造影剂微泡是一种有效的空化核，其增强超声空化血管损伤的生物学效应已在血管、心肌等多方面的研究中被证实。肝脏血流丰富、肝内血窦血流缓慢、微泡有肝内聚集特征，更有利于发挥微泡超声空化对肝内血管的机械损伤作用。前期研究发现，微泡增强的超声空化效应通过损伤辐照靶区的肝实质微小血管，可对毛细血管内皮细胞甚至小静脉造成严重的机械损坏，造成广泛的微小血肿和水肿；还可导致肝细胞气球样变性、浑浊肿胀，压迫肝内血窦，致肝内血管回流受阻，血管闭塞，具有暂时性阻断局部正常肝脏血液循环的作用。目的: 在前期微泡增强的超声空化效应阻断局部正常肝血流的基础上，通过建立兔肝脏切割伤模型，探讨脉冲式治疗超声联合静脉注射微泡，是否能快速有效治疗肝创伤后出血，及其止血作用的病理机制。材料与方法: 1.主要实验材料 1.1实验动物：健康新西兰白兔20只，雌雄不限，体重1.8–2.5kg，由新桥医院实验动物中心提供。 1.2超声化治疗仪：CZ-960型，治疗头频率831kHz，峰值声压为4.8MPa，采取工作8s间歇8s的交替治疗模式，平均声强(ISPTA)为1.39W/cm2。 1.3超声诊断仪：使用GE公司Logiq9型彩色多普勒超声诊断仪，探头为9L高频线阵探头，频率5～9MHz，具有编码谐波超声造影模式。 1.4脂质微泡：使用本科室实验室研制的脂氟显脂质造影剂，主要核心气体为全氟丙烷，乳白色液体，粒径范围2～10μm，其中98％在8μm以下，浓度为(4～9)×109/ml。超声造影时剂量为0.02ml/kg，用于超声治疗时剂量为0.1ml/kg（微泡溶入5ml生理盐水中制成微泡混悬液）。 1.5麻醉试剂：2%戊巴比妥钠和陆眠宁II注射液。电子天平称取2.0g戊巴比妥钠粉剂，以100ml超纯水溶解后，磁力搅拌器搅拌均匀，并用0.22μm滤器过滤除菌，分装于100ml无菌瓶中备用。陆眠宁II注射液主要成分为乙二胺四乙酸、二甲苯胺噻唑、盐酸二氢埃托啡和氟哌啶醇，由中国军事医学科学院军事兽医研究所研制。 2.实验方法： 2.1肝切割伤动物模型的建立：健康新西兰大白兔20只，雌雄不限，体质量1.8–2.5kg。麻醉后开腹暴露肝脏，用手术刀片在兔肝左叶（避开右叶胆囊区）制备一个长20mm、深5mm的切口。 2.2实验分组及处理：将建模后的新西兰大白兔随机分为三组，即超声联合微泡组（MEUS组）8只、单纯超声组（US组）6只和假照组（Sham组）6只。MEUS组采用4.8MPa的脉冲式治疗超声联合经静脉注射微泡（0.1ml/kg）治疗肝切割伤后出血；US组使用超声辐照和同等剂量的生理盐水替代微泡；Sham组经静脉注射同等剂量生理盐水，同时仅予以超声探头假照，不发射能量。 2.3实验步骤：实验兔采用复合式麻醉，先肌注陆眠宁II（0.1ml/kg），再建立耳缘静脉通道，注射2%戊巴比妥钠（0.2ml/kg）。麻醉后采用剑下正中线切口，暴露肝脏后，轻轻将兔肝左叶拖出腹腔用于实验。各组先用二维超声和多普勒超声观察肝叶形态、血流情况等，MEUS组和Sham组建模前先经耳缘静脉造影团注“脂氟显”微泡（0.01ml/kg）对肝脏进行超声造影观察，并记录峰值声学密度值（PI）。建立

关键词：超声微泡肝脏出血机制

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急性肾损伤生化标志物NGAL免疫学检测体系及其初步临床应用

急性肾损伤生化标志物NGAL免疫学检测体系及其初步临床应用

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作者：何莹第三军医大学

学位级别：硕士

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL)是Kjeldsen等人1993年研究中性粒细胞中92kDa的明胶酶，即MMP9时发现的一种新的脂质运载蛋白(又名lipocalin)。NGAL存在于中性粒细胞中的过氧化物... 详细信息

中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白(neutrophil gelatinase associated lipocalin，NGAL)是Kjeldsen等人1993年研究中性粒细胞中92kDa的明胶酶，即MMP9时发现的一种新的脂质运载蛋白(又名lipocalin)。NGAL存在于中性粒细胞中的过氧化物酶阴性颗粒中，并在人体组织细胞中广泛分布，如支气管、胃、小肠、胰腺、肾、前列腺、胸腺等。研究表明，NGAL蛋白具有运输疏水性小分子、调节MMP9活性、参与体内Fe转运等功能，并可能参与免疫炎症反应以及肿瘤的发生发展，特别是肿瘤的浸润转移等过程。近年研究发现，NGAL与肾脏关系十分密切。NGAL通过介导铁的转运来刺激早期原始肾脏系膜细胞转化为肾脏上皮细胞，从而启动肾脏发育。此外，NGAL可以通过转运细胞内铁从而消除铁在细胞内堆积引起的细胞损伤，也可以引起白细胞凋亡减轻炎症反应而发挥保护肾脏的作用。众多实验室和临床研究表明，肾损伤时NGAL表达明显增高并分泌释放入体液中。尤其是尿液中的NGAL水平与肾脏损伤的程度密切相关且很早就表现出来，NGAL被认为是新的早期肾损伤生化标志物。为将NGAL转化入临床应用，制备特异性NGAL抗体并建立相应的NGAL免疫检测方法非常重要。在本研究中，我们利用生物信息学工具分析NGAL蛋白的性质并通过HEK293T细胞重组表达了重组人NGAL蛋白(rhNGAL)作为抗体制备的筛选原和标准品。以购买的NGAL重组蛋白为免疫原制备出特异性NGAL单克隆抗体并建立起NGAL免疫学检测方法。在此基础上以293T细胞表达的rhNGAL为标准品对该方法进行全面的方法学评价，最后对57例临床标本进行了检测，初步证明本检测方法能够区分正常标本和肾脏损伤标本NGAL水平的差异。主要研究内容和结果 1. pcDNA3.1/His A NGAL的构建及其在HEK293T细胞中的表达和纯化通过分子生物学软件工具的预测发现NGAL蛋白且具有较多的糖基化位点和磷酸化位点，说明NGAL蛋白翻译后修饰加工和蛋白结构比较复杂，原核表达的蛋白不易形成正确的蛋白构象，难以获得理想的检测抗体。鉴于NGAL分子特点和前期工作经验，本研究利用基因工程技术构建了pcDNA3.1/His A NGAL真核表达载体，在HEK293T细胞中表达rhNGAL并进行纯化，获得0.18mg rhNGAL用作制备单克隆抗体筛选原和标准品，为下一步研究奠定必要的基础。 2.抗人NGAL单克隆抗体的制备和鉴定利用购买的NGAL重组蛋白作为免疫原经皮下多点注射和腹腔注射途径免疫Balb/c小鼠，经两次细胞融合和筛选获得10株分泌抗NGAL的单克隆抗体细胞株，经进一步检测筛选最后制备获得4株高效特异的抗NGAL单克隆抗体。随后利用ELISA和WB等方法对4株抗体进行了鉴定：4株抗体亚类如下：1F2，1G2和4H11是IgG1，1H5是IgG2b。4株抗体抗原结合力强，特异性良好，不与无关蛋白反应。在IHC染色中4株抗体均可以与肾组织切片中天然抗原结合，阳性主要定位于肾小管上皮细胞胞浆中。通过截短表达NGAL蛋白和合成B细胞表位肽的方法鉴定抗体的抗原表位，其中单克隆抗体1H5的B细胞表位位于NGAL蛋白第20至36位氨基酸处。而其余3株抗体无法与截短的NGAL蛋白片段和表位肽反应。本部分工作成功制备了特异性好、效价高的NGAL单克隆抗体，为下一步NGAL免疫学检测方法的建立奠定了基础 3. NGAL ELISA定量检测方法建立和初步临床应用研究本研究以第二部分制备获得的高效特异性单克隆抗体为原料，两两配对筛选，建立了以1F2为捕获抗体，酶标1G2为检测抗体的双抗体夹心ELISA方法。应用棋盘滴定法确定ELISA体系最佳工作条件。通过方法学评价可知本方法线性范围0～40ng/ml，灵敏度达到4.8ng/ml，平均回收率101.9％，最大批内CV≤10.04%，最大批间CV≤9.76%。我们收集了57例临床尿液标本，其中24例为正常对照组，33例为肾损伤患病组。用本ELISA系统进行样本检测，患病组尿液NGAL水平明显高于正常对照组尿NGAL水平，有统计学意义(P<0.01)。随后选取3例肾病患者尿液和1例健康体检者尿液为抗原，1F2和1G2为一抗做WB分析表明肾病患者尿液标本出现阳性条带而体检者尿液标本为阴性，表明1F2和1G2单克隆抗体能够识别体液标本中天然抗原。本ELISA检测体系经方法学评价，各方面参数良好，临床小样本检测与临床诊断相符，为研发具有自主知识产权的NGAL免疫检测试剂并以此为基础发展NGAL其他灵敏快捷的相关医学检验技术奠定了基础。

关键词： NGAL 单克隆抗体 ELISA 急性肾损伤临床应用

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实验性单侧前牙反(牙合)修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白和PTH/PTHrP受体-1表达的影响

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华西口腔医学杂志 2013年第2期32卷 122-126页

作者：郭敏张婧鹿蕾王艳丽张勉王美青第四军医大学口腔医学院解剖生理学教研室

目的探讨实验性单侧前牙反(牙合)修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)及PTH/PTHrP受体-1 (PTH1R)表达的影响.方法在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反(牙合)关系,2、4、8周后取颞下颌关节(TMJ),... 详细信息

目的探讨实验性单侧前牙反(牙合)修复体对大鼠髁突软骨中甲状旁腺激素相关蛋白(PTHrP)及PTH/PTHrP受体-1 (PTH1R)表达的影响.方法在6周龄SD大鼠左侧上、下切牙粘接金属不良修复体,使其呈反(牙合)关系,2、4、8周后取颞下颌关节(TMJ),苏木精-伊红(HE)染色观察组织形态学变化,免疫组织化学染色及实时定量聚合酶链反应检测PTHrP、PTH1R的表达情况.结果 8周时,实验组髁突软骨出现明显退行性变,PTHrP阳性细胞较对照组显著增多(P＜0.01),PTH1R阳性细胞明显减少(P＜0.01)；实验组髁突软骨PTHrP mRNA的表达显著高于对照组(P＜0.01),而PTH1R mRNA表达明显降低(P＜0.01).结论髁突软骨PTHrP的高表达因PTH1R的低表达不能有效发挥作用,可能是髁突软骨骨关节病样变的重要分子机制之一.

关键词：咬合颞下颌关节骨关节病软骨甲状旁腺激素相关蛋白 PTH/PTHrP受体-1

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MMP-9在高压氧治疗急性一氧化碳中毒脑损伤中的作用

MMP-9在高压氧治疗急性一氧化碳中毒脑损伤中的作用

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亚太潜水与高气压医学学术会议暨第二届海峡两岸高压氧医学学术会议、中华医学会第二十二次全国高压氧医学学术会议

作者：薛莉王文岚李娅谢小萍任杰李金声第四军医大学航空航天医学系卫生与卫生勤务学教研室

目的通过高压氧治疗急性CO中毒大鼠,研究皮层神经细胞凋亡与MMP-9表达变化的关系,探索MMP-9在高压氧治疗急性CO中毒脑损伤中的作用。方法体重180-200g的雄性SD大鼠,建立急性一氧化碳中毒模型。应用免疫组织化学以及免疫荧光的方法,测定... 详细信息

目的通过高压氧治疗急性CO中毒大鼠,研究皮层神经细胞凋亡与MMP-9表达变化的关系,探索MMP-9在高压氧治疗急性CO中毒脑损伤中的作用。方法体重180-200g的雄性SD大鼠,建立急性一氧化碳中毒模型。应用免疫组织化学以及免疫荧光的方法,测定染毒后以及高压氧治疗后第七天Bcl-2、caspase-3、Neuron、MMP-9、GFAP表达水平的变化。结果在中毒组中,Bcl-2、caspase-3表达量均有所升高(P<0.05),Neuron所标记的神经细胞数目比

关键词：急性一氧化碳中毒 MMP-9 高压氧治疗

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小鼠微小RNA miR-21真核表达载体构建及其在293细胞的活性表达

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局解手术学杂志 2014年第2期23卷 111-114页

作者：龙爽粟永萍任泂孙慧勤王涛第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的构建小鼠微小RNA miR-21的真核表达载体,在人胚肾293细胞中验证其活性表达,为进一步以此载体研究miR-21的功能打下基础。方法根据小鼠miR-21的成熟序列及其上下游约170 bp的序列设计引物,利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增含有miR-21... 详细信息

目的构建小鼠微小RNA miR-21的真核表达载体,在人胚肾293细胞中验证其活性表达,为进一步以此载体研究miR-21的功能打下基础。方法根据小鼠miR-21的成熟序列及其上下游约170 bp的序列设计引物,利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增含有miR-21前体的片段382 bp,克隆到质粒pRc/CMV,对重组质粒经双酶切及测序分析,鉴定完全正确后转染人胚肾293细胞,G418(1 000 mg/L)筛选后获得miR-21稳定表达细胞系,Northern blot验证其在293细胞的过表达;同时构建pmiR-21-Luc reporter荧光素酶报告质粒,与miR-21重组质粒共转染293细胞进行荧光素酶活性分析,验证其调控活性。结果成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,其可以在293细胞中稳定高效表达,荧光素酶活性实验证实其有生物活性。结论成功构建小鼠miR-21的真核表达载体,为进一步探讨miR-21的生物学功能奠定了实验基础。

关键词： miR-21 真核表达载体 293细胞

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Calpain2对肝癌细胞浸润和转移能力的影响

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现代生物医学进展 2013年第27期13卷 5247-5250页

作者：李一鸣陈博郭云山蒋建利唐娟第四军医大学学员旅九队陕西西安710032 第四军医大学细胞工程研究中心国家肿瘤生物学重点实验室陕西西安710032

目的:肝细胞癌(HCC)是一类常见的恶性肿瘤,主要表现为进展迅速、易复发及预后不良。侵袭转移作为肝癌的最主要的恶性表型,是造成较高致死率的主要原因。Calpain是钙激活中性蛋白酶,广泛参与了细胞多种生命过程。其中Calpain1和Calpain2... 详细信息

目的:肝细胞癌(HCC)是一类常见的恶性肿瘤,主要表现为进展迅速、易复发及预后不良。侵袭转移作为肝癌的最主要的恶性表型,是造成较高致死率的主要原因。Calpain是钙激活中性蛋白酶,广泛参与了细胞多种生命过程。其中Calpain1和Calpain2是Calpain家族主要成员,对于维持肿瘤细胞恶性表型有重要作用。本研究通过RNA干涉技术下调人肝癌Huh7细胞中Calpain2基因的表达,检测下调Calpain2对人肝癌Huh7细胞黏附,侵袭和迁移能力的影响,明确Calpain2在人肝癌细胞浸润和转移过程中的作用。方法:合成Calpain2的RNAi片段,瞬时转染人肝癌细胞Huh7,降低Huh7细胞中Calpain2的表达,运用细胞黏附实验,细胞侵袭实验及划痕愈合实验检测干涉Calpain2对肝癌细胞的黏附,侵袭和迁移能力的影响。结果:合成Calpain2的RNAi片段,瞬时转染人肝癌细胞Huh73,36小时后,细胞中Calpain2的蛋白水平明显下降,干涉Calpain2后人肝癌细胞Huh7的黏附率,侵袭率及划痕修复率的显著下降。结论:以上实验结果表明Calpain2能够促进肝癌细胞黏附,侵袭及划痕修复能力,Calpain2能够促进肝癌细胞的浸润和转移的作用,是肝癌发生发展过程中的肿瘤促进因子。因此,Calpain2可以作为抑制肝癌侵袭和转移的潜在靶点,靶向Calpain2的药物可能成为治疗肝癌侵袭转移的新方法。

关键词：肝癌 Calpain2 黏附侵袭迁移

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幽门螺杆菌感染与呼吸系统疾病研究进展

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成都医学院学报 2013年第1期8卷 8-11页

作者：白莉刘湘李亚斐第三军医大学新桥医院呼吸内科重庆400037 第三军医大学流行病学教研室重庆400038

幽门螺杆菌（helicobacterpylori，HP）感染率接近世界人口的50％，在我国和其他发展中国家HP感染率更是高达80％。已经证实HP感染不仅与如慢性胃炎伴胃黏膜萎缩、消化性溃疡、胃癌、胃Malt淋巴瘤等胃肠道疾病密切相关。随着研究的深入... 详细信息

幽门螺杆菌（helicobacterpylori，HP）感染率接近世界人口的50％，在我国和其他发展中国家HP感染率更是高达80％。已经证实HP感染不仅与如慢性胃炎伴胃黏膜萎缩、消化性溃疡、胃癌、胃Malt淋巴瘤等胃肠道疾病密切相关。随着研究的深入，发现HP感染还与心脑血管疾病、结缔组织疾病、呼吸系统疾病等胃肠外疾病的发生密切相关，其机制可能与HP感染诱导大量炎症介质、细胞因子和急性炎症反应物合成和释放、增加氧自由基生成等，引起全身的慢性炎症反应及触发自身免疫应答导致全身多系统的损害有关。目前有许多研究正致力于评估HP感染和呼吸系统疾病的相关性，本文就其研究现状做一综述。

关键词：幽门螺杆菌呼吸系统疾病感染

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补铁对慢性铅暴露导致的听力损伤及血迷路屏障破坏的保护作用

补铁对慢性铅暴露导致的听力损伤及血迷路屏障破坏的保护作用

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中国毒理学会第六届全国毒理学大会

作者：刘新秦郑刚沈学锋骆文静陈景元第四军医大学军事预防医学院劳动与环境卫生学教研室

目的研究铅暴露对听力的损伤作用,并从血-迷路屏障（BLB）损伤以及紧密连接蛋白表达水平改变等角度研究铅损伤听力的机制。同时研究补铁对铅暴露所致听力损伤的防护作用,为进一步明确补铁对铅暴露所引起耳毒性的防护作用提供理论依据。... 详细信息

目的研究铅暴露对听力的损伤作用,并从血-迷路屏障（BLB）损伤以及紧密连接蛋白表达水平改变等角度研究铅损伤听力的机制。同时研究补铁对铅暴露所致听力损伤的防护作用,为进一步明确补铁对铅暴露所引起耳毒性的防护作用提供理论依据。方法以断乳SD大鼠,自由饮用含300 ppm Pb（AC）的去离子水8周,建立慢性铅中毒模型。采用原子吸收法检测大鼠血铅水平,听性脑干反应（ABR）检测确定听觉阈值。FITC-鬼笔环肽染色观察外毛细胞形态变化;透射电镜观察耳蜗血管纹微血管壁的通透性及其内皮细胞间紧密连接结构的变化。免疫荧光法检测耳蜗血管纹紧密连接蛋白ZO-1,Occludin,Claudin-5的表达水平。结果慢性铅暴露引起大鼠血铅水平显著提高（P<0.05）,达到铅中毒水平。铅暴露组大鼠ABR阈值与对照组相比提高约39%（P<0.05）,提示听力损伤。鬼笔环肽染色结果显示铅暴露致大鼠耳蜗外毛细胞形态结构改变,表现为纤毛排列紊乱,出现倒伏或融合消失的情况;透射电镜结果显示:铅暴露导致大鼠耳蜗微血管壁对硝酸镧分子的通透性增加,而内皮细胞间紧密连接结构破坏;免疫荧光结果显示,铅暴露大鼠耳蜗血管纹紧密连接蛋白ZO-1,闭合蛋白,密封蛋白5的表达水平与对照组相比均显著下降（P<0.01）。铅暴露期间补铁(7 mg Fe/kg,2次/周)可以显著抑制铅引起的ABR阈值增高（P<0.05）,并显著减少硝酸镧分子在BLB的通过量（P<0.01）。另外,免疫荧光结果表明补铁可以逆转铅暴露所致的紧密连接蛋白表达水平下降。结论慢性铅暴露引起大鼠听觉系统损伤,表现为听阈增高、耳蜗外毛细胞形态改变。铅可能通过下调耳蜗微血管内皮细胞紧密连接蛋白的表达水平,造成紧密连接结构破坏,从而引起大鼠耳蜗BLB通透性的增高。这种BLB结构和功能的损伤可能导致内耳微环境的紊乱,参与铅所引起耳毒性的病理过程。补铁可在一定程度上抑制铅所引起的听力损伤,并对BLB的结构和功能产生了较显著的保护作用,提示补铁对于铅中毒所致听力损伤的防治可能具有良好的应用前景。

关键词：铅暴露听力血迷离屏障紧密连接蛋白补铁

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