检索结果-内蒙古大学图书馆

生物化学与生物物理进展 2012年第2期39卷 142-150页

作者：王文博许刚王岩陶清源任浩戚中田第二军医大学微生物学教研室全军生物侦检与防护重点实验室上海市医学生物防护重点实验室上海200433

探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF.体外制备RNA转录体,并电穿... 详细信息

探索了F蛋白缺失及核心蛋白(Core)二级结构改变对丙型肝炎病毒(HCV)复制和感染性的影响.利用定点突变方法,将J6JFH1的核心基因引进5个终止密码子以中断F蛋白的表达,从而获得F蛋白缺失的病毒复制子J6JFH1/ΔF.体外制备RNA转录体,并电穿孔转染Huh7.5.1细胞,采用免疫荧光、实时荧光定量PCR方法以及病毒感染等方法,观察F蛋白缺失对病毒复制、蛋白质表达及转染细胞上清感染性病毒颗粒产生的影响.在此基础上,构建5个单一突变病毒体,对HCV核心蛋白进行二级结构分析,观察核心蛋白二级结构对HCV复制和翻译的影响.结果显示,转染48 h后,J6JFH1/ΔF与野生型J6JFH1相比,J6JFH1/ΔF转染阳性细胞数明显降低,细胞内HCV RNA水平降低约95%,J6JFH1/ΔF转染后不同时间点细胞上清中HCV RNA拷贝数和病毒颗粒也明显降低.5个单一突变体不影响核心基因二级结构,病毒在细胞内复制和感染性与野生型水平一致.J6JFH1/ΔF所产生的改变可能是由于5处突变导致核心基因二级结构改变而造成的.结果说明,HCV F蛋白缺失不影响病毒的复制翻译及病毒颗粒的包装释放,核心蛋白二级结构的改变对病毒复制和翻译则产生较大影响.

关键词：丙型肝炎病毒 F蛋白核心蛋白二级结构病毒复制

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趋化因子受体5及其配体促进乳腺癌细胞的趋化和侵袭的研究

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中国医药 2013年第1期8卷 86-88页

作者：郭满盈张茵罗雪平陈扬王栋解放军第九八医院检验科第二军医大学解剖学教研室解放军第九八医院院部

目的探讨趋化因子受体5（CCR5）及其配体（RANTES）对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的促进作用。方法用反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法测定乳腺癌细胞株MCF-7的CCR5mRNA及蛋白水平，RANTES的作用下，以无血清RPMI1640培养液作为阴... 详细信息

目的探讨趋化因子受体5（CCR5）及其配体（RANTES）对乳腺癌细胞趋化活性和侵袭活性的促进作用。方法用反转录聚合酶链反应、免疫组织化学法测定乳腺癌细胞株MCF-7的CCR5mRNA及蛋白水平，RANTES的作用下，以无血清RPMI1640培养液作为阴性对照组，含乳腺癌细胞的无血清RPMI1640培养液为对照组，加有CCRSmAb的乳腺癌细胞无血清RPMI1640为实验组，通过趋化小室法检测MCF-7细胞的趋化活性和侵袭活性，并与CCR5的封闭进行对照研究。结果迁移至多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组，实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（73．0±9．8）、（7．6±1．5）个／HP，差异有统计学意义（t=11．85，P〈0．01）；穿透Matrigel基质胶到达多聚碳酸酯膜背面的乳腺癌细胞数明显多于相应的阴性对照组，实验组和对照组迁移至多聚碳酸酯膜背面的细胞分别为（19．7±4．0）、（2．3±-0．6）个／HP，差异有统计学意义（t=7．37，P〈0．01）。乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5mRNA及蛋白质的表达，其配体RANTES对MCF-7细胞有明显的趋化活性和侵袭活性，CCR5的封闭也能抑制MCF-7细胞的这种趋化活性和侵袭活性。结论乳腺癌细胞株MCF-7有CCR5的表达，且其表达能够促进MCF-7细胞的趋化和侵袭。

关键词：乳腺肿瘤乳腺细胞,培养的受体,趋化因子

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细胞色素P450CYP3A65斑马鱼模型建立及对环境污染物的生物响应

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中国药理学与毒理学杂志 2014年第6期28卷 870-877页

作者：李春杰赵建张世勇潘微彤蒲韵竹贾启燕查晓丹尚艳楠黄春倩刘艳琴钟玉绪李前丁日高付爱玲赵宝全西南大学药学院重庆400715 军事医学科学院毒物药物研究所毒理学与抗毒药物研究国家重点实验室北京100850 内蒙古通辽市科尔沁区第一人民医院骨一科内蒙古通辽028000

目的：建立细胞色素P450CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼用于快速、直观检测重金属（铜、镉、锌）及类二噁英化合物五氯联苯（ PCB126）等环境污染物。方法 PCR方法钓取斑马鱼CYP3A65基因调控序列，构建于pT2AL200R150G转座载体克隆位点，... 详细信息

目的：建立细胞色素P450CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼用于快速、直观检测重金属（铜、镉、锌）及类二噁英化合物五氯联苯（ PCB126）等环境污染物。方法 PCR方法钓取斑马鱼CYP3A65基因调控序列，构建于pT2AL200R150G转座载体克隆位点，将pTol2-CYP3A65-EGFP 质粒与pCS-TP 转座酶mRNA共同注射入斑马鱼胚胎单细胞，通过荧光筛选，遗传选育和建立荧光标记转基因斑马鱼品系 Tg （ CYP3A65-EGFP）；利用该转基因斑马鱼胚胎及幼鱼检测上述3种重金属及 PCB126的生物学响应。结果成功建立了CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼品系，绿色荧光在肝和消化道表达；该转基因斑马鱼对3种重金属及PCB126产生生物学响应。染毒96 h后，铜0.1和0.2μmol·L^－1、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组、PCB126所有浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01）；铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组及锌24μmol·L^－1组荧光相对表达量显著减弱（ P＜0.01）；染毒168 h 后，铜0.1和0.2μmol·L^－1组、镉0.35和0.7μmol·L^－1组、锌1.5和3μmol·L^－1组及PCB1262～32μmol·L^－1浓度组荧光相对表达量显著增强（ P＜0.01），铜0.9μmol·L^－1组、镉2.7和5.4μmol·L^－1组、锌12和24μmol·L^－1组荧光相对表达量减弱（ P＜0.05），随着浓度增加荧光减弱，呈现出量效关系。结论 CYP3A65荧光标记转基因斑马鱼模型可以用来检测铜、镉、锌及PCB126等环境污染物。

关键词：细胞色素P450 CYP3A65 斑马鱼,转基因铜镉锌多氯联苯化合物

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Bax基因P53结合位点多态性与食管鳞癌易感性的关联研究

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第三军医大学学报 2012年第10期34卷 963-966页

作者：刘波涛王凯许雪青熊刚郭洪官兴颖白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038 西南医院胸心外科

目的探讨Bax基因P53结合位点多态性与我国西南地区食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carci-noma,ESCC)发病的关联性。方法利用SNaPshot技术检测201例食管鳞癌病例组及183例健康对照的Bax基因rs1009316位点多态性的分布情况,分... 详细信息

目的探讨Bax基因P53结合位点多态性与我国西南地区食管鳞状细胞癌(esophageal squamous cell carci-noma,ESCC)发病的关联性。方法利用SNaPshot技术检测201例食管鳞癌病例组及183例健康对照的Bax基因rs1009316位点多态性的分布情况,分析不同基因型与食管鳞癌易感性的关联。结果食管鳞癌病例组和对照组中rs1009316的CC和CT/TT基因型频率分别为59.2%、40.8%和73.2%、26.8%,CT/TT相比CC增加食管鳞癌的发病风险(OR值为1.884,95%CI为1.224～2.901),T等位基因增加食管鳞癌的发病风险(OR值1.620,95%CI为1.103～2.379)。分层分析发现,无吸烟史群体中,T等位基因(OR值为1.858,95%CI为1.050～3.288)及CT/TT基因型(OR值为2.178,95%CI为1.143～4.147)分别增加食管鳞癌的发病风险。结论在中国西南地区人群中,Bax基因P53结合区域的多态性位点rs1009316是食管鳞癌的危险因素之一。

关键词： Bax P53 单核苷酸多态性(SNP) 食管鳞状细胞癌危险因素

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骨髓基质细胞移植对大鼠脊髓损伤后COX-2基因表达的影响

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解放军医学院学报 2013年第7期34卷 764-767页

作者：于德水吕刚梅晰凡曹阳王岩松刘立波辽宁医学院附属第一医院骨科辽宁锦州121001 中国医科大学神经生物学教研室辽宁沈阳110001

目的观察骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤后COX-2 mRNA表达的影响。方法分离培养BMSCs并传代。取Wistar雌性大鼠72只随机分为3组:A组18只(假手术组)、B组27只(细胞培养基对照组)和C组27只(BMSCs组)。... 详细信息

目的观察骨髓基质细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)移植对大鼠脊髓损伤后COX-2 mRNA表达的影响。方法分离培养BMSCs并传代。取Wistar雌性大鼠72只随机分为3组:A组18只(假手术组)、B组27只(细胞培养基对照组)和C组27只(BMSCs组)。B组和C组脊髓损伤后进行DMEM或BMSCs损伤周围区注射。应用RT-PCR法和免疫荧光方法检测损伤脊髓组织内COX-2 mRNA的表达及COX-2蛋白分布情况。结果 COX-2 mRNA在A组大鼠脊髓组织中低水平表达。脊髓损伤移植术后,C组COX-2 mRNA表达水平均显著高于相应时间点的B组(P<0.01)。免疫荧光结果显示,A组COX-2仅表达于脊髓内的血管。脊髓损伤后,B组和C组COX-2表达分布则发生变化,主要见于损伤周围区脊髓内的血管和少数脊髓腹侧灰质内的神经元。结论 BMSCs移植能够增加脊髓损伤后COX-2 mRNA的表达。

关键词：脊髓损伤骨髓基质细胞细胞移植环氧化酶-2

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RI基因真核表达载体的构建及其对人脐静脉内皮细胞的影响

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第三军医大学学报 2012年第16期34卷 1591-1595页

作者：李红彦潘湘阳姚雪熊东梅陈俊霞重庆医科大学基础医学院细胞生物学与遗传学教研室分子医学与肿瘤研究中心重庆400016

目的构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,并检测核糖核酸酶抑制因子(ribonuclease inhibitor,RI)基因与血管生成素(angiogenin,ANG)的关系及对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)增殖及迁移能力的影响。方法用RT-PCR方法扩增RI基因,酶切后将其插入pcDNA3.1,构建融合表达载体pcDNA3.1-RI,在脂质体介导下转染HUVECs,RT-PCR检测RI、ANG基因的mRNA表达水平;Western blot检测RI、ANG、MMP-2、MMP-9的表达水平;CO-IP法检测ANG和RI的相互作用,MTT法检测细胞的增殖活力,流式细胞仪检测细胞周期分布。结果真核表达质粒构建成功;转染pcDNA3.1-RI组细胞RI基因的mRNA及蛋白的表达较2个对照组(转染pcDNA3.1空载体组和未转染质粒组)均呈显著性增加(P<0.05),而ANG基因的mRNA及蛋白的表达均降低(P<0.05),MMP-2、MMP-9蛋白表达水平亦降低(P<0.05);CO-IP法检测到ANG和RI在细胞内能结合;转染pcDNA3.1-RI质粒到HUVECs细胞后细胞的增殖活力明显降低(P<0.05),G0～G1期比例明显增加,S期减少。结论成功构建的真核表达质粒能显著增加RI基因及其蛋白水平的表达,RI可以直接在转录水平上降低ANG的表达,在细胞内与ANG结合,从而影响内皮细胞的增殖、迁移能力。

关键词：核糖核酸酶抑制因子人脐静脉内皮细胞血管生成素真核表达

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MiR-208通过下调P21介导胰岛素刺激血管平滑肌细胞异常增殖的实验研究

MiR-208通过下调P21介导胰岛素刺激血管平滑肌细胞异常增殖的实验...

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中华医学会第十五次全国心血管病学大会

作者：张晔王燕王旭开曾春雨第三军医大学大坪医院心血管病专科医院心内科第三军医大学分子遗传教研室

目的血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖是高血压发生发展的重要病理生理机制之一,高浓度胰岛素促进VSMC增殖,诱发或加重高血压的血管病变。鉴于胰岛素复杂的生理效应,胰岛素引起VSMC的异常增殖仍有许多不清楚之处,我们推测可能存在其他的关... 详细信息

目的血管平滑肌细胞(VSMC)异常增殖是高血压发生发展的重要病理生理机制之一,高浓度胰岛素促进VSMC增殖,诱发或加重高血压的血管病变。鉴于胰岛素复杂的生理效应,胰岛素引起VSMC的异常增殖仍有许多不清楚之处,我们推测可能存在其他的关键分子及机制。寻找高胰岛素

关键词：胰岛素 P21 MiR-208 异常增殖平滑肌细胞

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一种同时分离培养大鼠肝细胞及肝枯否细胞技术的建立

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现代生物医学进展 2013年第13期13卷 2420-2424页

作者：王敏兰亚胡皓时永全韩英周新民第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学重点实验室陕西西安710032 延安大学附属医院陕西延安716000

目的:建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法。方法:采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性... 详细信息

目的:建立简便、经济的同步分离培养肝细胞及kupffer细胞的方法。方法:采用肝脏原位灌洗结合离体胶原酶灌注消化的方法获得总细胞悬液,差速离心分离肝细胞及肝非实质细胞,经多次低速离心可分离肝细胞,经percoll密度梯度离心以及选择性贴壁法得到纯化的kupffer细胞。台盼蓝染色鉴定细胞活力。使用倒置相差显微镜、HE染色、PAS染色及白蛋白免疫组织化学染色对培养肝细胞的形态及功能进行检测。使用光学显微镜、荧光显微镜及CD68免疫荧光染色鉴定分离的kupffer细胞。结果:体外成功的同步分离培养了肝细胞及kupffer细胞,肝细胞产率为1.37±0.53×108/大鼠,kupffer得率为3.45±0.41×106/g肝脏。细胞存活率及纯度都可达90%。肝细胞培养24 h后呈典型肝细胞形态,7天后仍具有糖原合成和白蛋白合成能力。贴壁后的kupffer细胞呈典型的星型或三角形,且其标志分子CD68免疫荧光染色阳性。结论:应用改良的原位灌注方法可以很好的同时分离具有活性及功能的肝细胞和kupffer细胞。

关键词：肝细胞枯否细胞分离方法大鼠

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间充质干细胞恶性转化风险分析

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医学分子生物学杂志 2013年第3期10卷 167-171页

作者：才延辉闫博赵晶中国人民解放军第四军医大学口腔医学系八年制临床医学2009级西安市710032 中国人民解放军第四军医大学生物化学与分子生物学教研室西安市710032

间充质干细胞（MSCs）作为组织修复的种子细胞和细胞治疗载体已进入临床试验，但其安全性近年来受到质疑。首先从5个层次总结了MSCs恶性表型的鉴定方法。MSCs的应用包括体外扩增培养和体内注射治疗两个阶段，由于前一阶段可控性相对较... 详细信息

间充质干细胞（MSCs）作为组织修复的种子细胞和细胞治疗载体已进入临床试验，但其安全性近年来受到质疑。首先从5个层次总结了MSCs恶性表型的鉴定方法。MSCs的应用包括体外扩增培养和体内注射治疗两个阶段，由于前一阶段可控性相对较强，因此分析了MSCs来源、培养代数和培养环境对其恶变的可能影响。最后，还概括了目前利用MSCs体外培养模型推断得出的其恶变可能的分子机制．包括原癌基因活化、抑癌基因失活、病毒感染、miRNA含量调节、细胞因子诱导。

关键词：间充质干细胞恶性转化

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中国Top1与国际Top1的差距——看哈佛大学细胞生物学系

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医学争鸣 2012年第2期3卷 16-17页

作者：陈志南第四军医大学细胞工程研究中心/细胞生物学教研室陕西西安710032

细胞是机体结构和功能的基本单位，细胞生物学以细胞为研究对象，揭示细胞的增殖、分化、遗传、运动、衰老等基本生命活动规律，是生命科学的基石。细胞生物学是生命科学的基础学科，与医学、药学以及生物学其他学科广泛交叉与融合，成... 详细信息

细胞是机体结构和功能的基本单位，细胞生物学以细胞为研究对象，揭示细胞的增殖、分化、遗传、运动、衰老等基本生命活动规律，是生命科学的基石。细胞生物学是生命科学的基础学科，与医学、药学以及生物学其他学科广泛交叉与融合，成为生命科学的交汇点，并外延至重大疾病的转化医学。

关键词：细胞生物学哈佛大学国际中国生命活动规律生命科学转化医学机体结构

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