检索结果-内蒙古大学图书馆

医学与哲学（B） 2012年第12期33卷 44-46页

作者：王瑞安第四军医大学西京医院病理科基础医学院病理学与病理生理学教研室国家肿瘤学重点实验室陕西西安710032

繁殖力受三个方面的因素制约,即寿命、形体和食物链的位置。寿命越长,繁殖力越弱;形体越大,繁殖力越弱;在食物链的位置越高,繁殖力越弱。繁殖力制约法则是维持生物界物种平衡和多样性的基本法则。现在的肿瘤生长理论中,肿瘤细胞一方面&q... 详细信息

繁殖力受三个方面的因素制约,即寿命、形体和食物链的位置。寿命越长,繁殖力越弱;形体越大,繁殖力越弱;在食物链的位置越高,繁殖力越弱。繁殖力制约法则是维持生物界物种平衡和多样性的基本法则。现在的肿瘤生长理论中,肿瘤细胞一方面"抗凋亡",另一方面却不断增殖,显然与这一法则相矛盾。

关键词：寿命繁殖力法则肿瘤理论

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对我国检验医学教育改革的一些思考

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国际检验医学杂志 2012年第20期33卷 2559-2560页

作者：黄辉邓均蒋丽莉方立超李艳郑峻松第三军医大学医学检验系临床检验学教研室重庆400038

检验医学是利用细胞学、生物化学、免疫学、微生物学、分子生物学等多学科的理论与技术，对人体的血液、体腔液、排泄物、分泌物和组织细胞等标本进行实验室检查，为疾病的诊断与鉴别诊断、治疗方案选择、疗效监测、预后评估等提供客观... 详细信息

检验医学是利用细胞学、生物化学、免疫学、微生物学、分子生物学等多学科的理论与技术，对人体的血液、体腔液、排泄物、分泌物和组织细胞等标本进行实验室检查，为疾病的诊断与鉴别诊断、治疗方案选择、疗效监测、预后评估等提供客观依据的学科，检验医学是联系自然科学、基础医学和临床医学的桥梁与纽带。近二十年来，检验医学得到了迅速发展，从只注重标本检验，发展为集实验室检测、实验项目开发、实验室咨询和实验室管理等为一体的学科。如何应对检验医学的迅速发展，培养高素质的检验人才，促进我国检验医学的发展，是检验医学教育的一项重要课题。

关键词：检验医学教育医学教育改革实验室检查鉴别诊断标本检验分子生物学实验室检测实验室管理

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SKF97541抑制大鼠骶髓后联合核神经元

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中国药理学通报 2012年第3期28卷 383-387页

作者：马红雨宋世平董磊罗丹吕建晓杨鲲空军总医院临床检验中心北京100142 军事医学科学院附属医院检验科北京100071 第四军医大学解剖学教研室暨梁球锯脑研究中心陕西西安710032

目的研究GABAB受体特异性激动剂SKF97541对骶髓后联合核(SDCN)神经元的作用。方法在大鼠骶段脊髓横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元。电流钳记录模式下,观察SKF97541对神经元膜电位和动作电位发放的影响。电压钳模式... 详细信息

目的研究GABAB受体特异性激动剂SKF97541对骶髓后联合核(SDCN)神经元的作用。方法在大鼠骶段脊髓横切薄片上,利用全细胞膜片钳法记录骶髓后联合核神经元。电流钳记录模式下,观察SKF97541对神经元膜电位和动作电位发放的影响。电压钳模式下,观察谷氨酸能兴奋性突触后电流(EPSCs)对SKF97541处理的变化。结果SKF97541(0.5μmol.L-1)通过作用于GABAB受体,减少SDCN神经元动作电位发放,同时促进细胞膜超极化。SKF97541在电压钳模式下,减少谷氨酸介导的微小EPSCs的频率,但对振幅无影响,提示SKF97541通过作用于突触前GABAB受体抑制谷氨酸释放。突触前刺激引起的突触后电位,也被SKF97541抑制。结论在骶髓后联合核,SKF97541通过作用于突触后GABAB受体,直接抑制神经元的兴奋性和动作电位发放;并通过突触前GABAB受体,抑制谷氨酸的释放。以上结果提示SKF97541的抑制作用可能抑制骶髓后联合核神经元对伤害性信息的传递。

关键词：脊髓骶髓后联合核谷氨酸 GABAB受体 SKF97541 全细胞记录大鼠

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复方中药“天芪航力片”提取物对+Gz致大鼠脑损伤的防护作用

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神经解剖学杂志 2012年第1期28卷 43-48页

作者：杜挺媛王永春高原刘新宇王永新辛益妹张舒詹皓孙喜庆第四军医大学航空航天医学系航空航天生物动力学教研室西安710032 空军航空医学研究所北京100142

目的:观察复方中药"天芪航力片"提取物对+10 Gz暴露后大鼠脑损伤的影响,进一步探讨其可能的防护作用机制。方法:36只雄性SD大鼠随机分为对照组、+10 Gz组和"天芪航力片"防护组,每组12只。于灌胃给药14 d后,给予+10... 详细信息

目的:观察复方中药"天芪航力片"提取物对+10 Gz暴露后大鼠脑损伤的影响,进一步探讨其可能的防护作用机制。方法:36只雄性SD大鼠随机分为对照组、+10 Gz组和"天芪航力片"防护组,每组12只。于灌胃给药14 d后,给予+10 Gz、5 min的加速度暴露,观察各组大鼠脑超微结构、脑ATP酶含量、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量及血液流变学的变化。结果:脑组织电镜和组织化学染色结果显示,与对照组比,+10 Gz组大鼠脑皮层神经细胞出现线粒体肿胀、嵴模糊不清及溶酶体增多等损伤变化,大鼠脑ATP酶含量显著降低(P<0.05);"天芪航力片"防护组脑组织损伤较轻,大鼠脑ATP酶含量无明显变化。与对照组和+10 Gz组比,"天芪航力片"防护组SOD均显著升高(P<0.05)。与对照组相比,+10 Gz组的高、中、低切全血黏度,血浆黏度均显著升高(P<0.05),"天芪航力片"防护组,高、中、低切全血黏度、红细胞压积均显著下降(P<0.05);与+10 Gz组相比,"天芪航力片"防护组,高、中、低切全血黏度、红细胞压积均显著下降(P<0.05)。结论:复方中药"天芪航力片"提取物对+10 Gz暴露引起的脑损伤具有保护作用,其防护机制可能与改善高G暴露引起的大鼠血液流变学改变、降低脂质过氧化损伤及减轻能量代谢障碍有关。

关键词：持续性正加速度血液流变学脑损伤防护大鼠

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嗅鞘细胞移植延缓RCS大鼠视网膜色素变性进程的研究

嗅鞘细胞移植延缓RCS大鼠视网膜色素变性进程的研究

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作者：霍姝佳第三军医大学

学位级别：博士

视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP）是一组以感光细胞或视网膜色素上皮（retinal pigmented epithelium，RPE）功能异常为表现的遗传性致盲性眼病，目前临床上尚无有效的方法来阻止或逆转其退行性改变。近年来对视网膜色素变... 详细信息

视网膜色素变性（retinitis pigmentosa，RP）是一组以感光细胞或视网膜色素上皮（retinal pigmented epithelium，RPE）功能异常为表现的遗传性致盲性眼病，目前临床上尚无有效的方法来阻止或逆转其退行性改变。近年来对视网膜色素变性疾病的临床及基础研究取得一定进展，细胞移植作为视网膜变性疾病的再生性疗法为治疗开劈了新的途径。然而，诸如干细胞、色素上皮细胞等成体细胞移植，因存在供体细胞来源、免疫排斥、伦理等多种问题限制了其进一步的研究和应用。在RP过程中，发生了一系列复杂的形态和功能变化。原发于RPE吞噬功能障碍的RP，由于脱落的盘膜堆积在视网膜下腔，导致光感受器细胞外节代谢异常，从而引发光感受器细胞死亡，并累及内核层，继而引起大范围视网膜神经元的凋亡、坏死及突触重构4。Müller细胞在正常视网膜中具有参与视网膜糖代谢、调节视网膜血流、参与神经递质循环、调节视网膜水电解质平衡、参与感光色素循环过程及控制神经元兴奋性等功能。在视网膜色素变性早期，Müller细胞活化、增殖，向外迁徙并在视网膜下间隙形成胶质瘢痕，使残存的视网膜无法从色素细胞和脉络膜获得营养因子和生存支持，光感受器细胞和神经元逐渐死亡，完全阻断了感光细胞外节的再生。同时，Müller细胞在增殖过程中表达了一系列表面抑制分子，抑制了正常的组织修复和神经再生3,20。 RP的神经元丢失和胶质增生与中枢神经系统（central nervous system，CNS）损伤的病理过程非常相似。CNS受损后，以星形胶质细胞为主的胶质细胞在受损部位形成胶质瘢痕，阻碍了神经轴突的再生。近年来嗅鞘细胞(olfactory ensheathing cells, OECs)移植治疗神经损伤和神经系统退行性疾病是医学领域乃至整个生命科学领域的研究热点5。有研究认为OECs的修复作用是在嗅成纤维细胞（olfactory nerve fibroblasts, ONFs）的协同作用下实现的14。移植的OECs打破胶质瘢痕的阻挡，引导再生的轴突进入CNS，从而与靶器官形成新的功能连接。OECs是目前唯一一种在成熟阶段还有生长能力的特殊类型的神经胶质细胞，广泛分布于嗅黏膜、嗅神经和嗅球的表面两层（嗅神经纤维层和嗅小球层）6-8，具有可自体移植的优势，是细胞移植修复中枢神经系统损伤中很有希望的种子细胞之一9-13。近年来OECs在视网膜疾病和视神经创伤治疗方面的应用已有报道15-19。其可以包绕视网膜节细胞（retinal ganglion cell，RGC）的轴突，延缓受损的RGC的坏死，并促进视神经轴突的再生。然而目前OECs在RP治疗方面的应用还未见报道。综合上述的研究背景以及我实验室的前期研究结果，我们提出假设：嗅鞘细胞移植抑制Müller细胞所形成的胶质瘢痕，保护视网膜神经元，从而延缓RP的视网膜退行性变进程。针对以上假设，本研究采用OECs/ONFs混合细胞（由于ONFs只是OECs的支持成分，所以以下简称OECs）在体移植技术，利用经典视网膜色素变性模型RCS大鼠，对比嗅鞘细胞移植后移植组、伪手术组和对照组视网膜的结构和功能变化。并初步探讨了OECs的作用机制。主要内容及研究结果如下： 1、嗅鞘细胞离体和在体的生物学特性研究。通过原代培养法获得大量的嗅鞘细胞和嗅球成纤维细胞的混合细胞，经巩膜外路法移植入30天龄的RCS-P+大鼠视网膜下腔。结果显示，移植后OECs呈多样化的伸展形态，在移植后1周、3-4周和6-8周三个时间点，移植细胞大量存活，细胞总数在移植后3-4周数量最多，6-8周时数量下降。移植细胞在视网膜下腔移植点向周围逐渐迁移，并向视网膜内层迁移。而在术后4周和8周两个时间点，同样方法移植入正常大鼠视网膜下腔的OECs未见明显迁移。结果提示：OECs可在变性的视网膜环境中生存和迁移，其迁移能力与视网膜环境密切相关。 2、将表达绿色荧光蛋白的OECs移植入RCS大鼠视网膜下腔，于移植后4周、8周、12周三个时间点观察视网膜的形态和功能变化。结果显示，OECs移植组Müller细胞的增殖被抑制，其在视网膜下腔形成胶质瘢痕的面积减少，Western blot蛋白定量提示，其增殖相关蛋白GFAP表达的水平较伪手术组相比有显著下降；视网膜感光神经元的凋亡被抑制，神经元的数量显著高于伪手术组和对照组，且感光细胞的形态优于伪手术组和对照组；闪光视网膜电图（F-ERG）评测RCS-P+大鼠视功能改善情况，发现OECs移植后视网膜的电生理功能显著改善。结果提示：OECs可以抑制变性视网膜Müller细胞的异常活化，减少视网膜神经元的凋亡，保护视网膜感光细胞，改善视网膜功能，从而延缓了视网膜色素变

关键词：视网膜色素变性嗅成纤维细胞 ERG 光感受器神经营养因子吞噬迁移胶质增生神经保护视网膜退行性变

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C-di-AMP对变异链球菌耐氧能力、细胞膜稳定性及产酸能力的调控研究

C-di-AMP对变异链球菌耐氧能力、细胞膜稳定性及产酸能力的调控研...

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2014年第九次全国牙体牙髓病学学术会议

作者：程兴群周学东徐欣彭显贾文祥李雨庆四川大学华西口腔医学院口腔疾病研究国家重点实验室(四川大学)

目的:环二腺苷酸(c-di-AMP)是一个新发现的第二信使分子,调控多种细菌生理活动,如调节细菌的生长及毒性、细胞膜稳定性和耐受应激的能力等。目前该分子在口腔主要致龋菌变异链球菌中的研究还是空白。故本研究试图探索c-di-AMP信号系统... 详细信息

目的:环二腺苷酸(c-di-AMP)是一个新发现的第二信使分子,调控多种细菌生理活动,如调节细菌的生长及毒性、细胞膜稳定性和耐受应激的能力等。目前该分子在口腔主要致龋菌变异链球菌中的研究还是空白。故本研究试图探索c-di-AMP信号系统在变链中的潜在作用。方法:通过生物信息学分析,SmDacA(SMU.1428c)可能是一个潜在的腺苷酸环化酶。该蛋白在大肠杆菌中得到外源性的表达和纯化,通过高效液相色谱和质谱在体外检测该蛋白的酶活性。运用实时定量PCR来检测dacA基因在不同环境压力下转录组表达水平的变化。利用双交换同源重组的方法成功构建了dacA基因框内缺失菌株SmAdacA。利用扫描电镜、透射电镜、细胞外多糖染色及死活染等技术检测突变株的表型变化。运用动物实验Keys计数法检测突变株的致龋型。运用全基因组芯片技术检测突变株转录组水平的变化,探索c-diAMP信号系统调控变链生理活动的具体机制。结果:研究结果显示SmDacA蛋白具有腺苷酸环化酶活性,dacA基因在氧压力环境下表达水平明显上升。突变株SmAdacA对氧敏感,无论在浮游状态或生物膜状态下均容易聚集成团。革兰染色发现突变株某些细胞不能被着色,扫描电镜、透射电镜、死活染均显示突变株细胞容易裂解死亡。与野生型相比,突变株生长较慢,且其致龋性下降。激光共聚焦显微镜结果显示突变株产胞外多糖能力增加。芯片结果显示突变株gtfBC基因显著上调,且发现三个功能未知的操纵子与c-diAMP信号系统密切相关。结论:综上,c-di-AMP信号系统在调控变链的耐氧能力、细胞膜稳定性及产酸能力方面具有重要调控作用。

关键词： c-di-AMP 氧应激能力细胞外多糖细胞膜稳定性

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TLR4对人骨骼肌细胞炎症因子表达及胰岛素抵抗的影响

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现代生物医学进展 2012年第2期12卷 201-203,214页

作者：栗莉张磊候祥红曹瑞季爱玲王枫第四军医大学营养与食品卫生学教研室陕西西安710032

目的:研究TLR4对脂多糖(LPS)及Polymymin B(PMB)作用下的人骨骼肌细胞的炎症因子表达的影响及其在细胞胰岛素抵抗中的作用。方法:通过脂多糖(LPS)及Polymymin B(PMB)干预骨骼肌细胞24h,再用胰岛素刺激1h后,Real-time PCR检测检测骨骼肌... 详细信息

目的:研究TLR4对脂多糖(LPS)及Polymymin B(PMB)作用下的人骨骼肌细胞的炎症因子表达的影响及其在细胞胰岛素抵抗中的作用。方法:通过脂多糖(LPS)及Polymymin B(PMB)干预骨骼肌细胞24h,再用胰岛素刺激1h后,Real-time PCR检测检测骨骼肌细胞TLR4、MyD88、TNF-αmRNA的表达;Western blot检测TLR4,Myd88和CRP的表达;葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)检测细胞培养液中葡萄糖浓度。结果:TLR4高表达可以使炎症因子的表达增高,细胞培养液中的葡萄糖浓度增高;TLR4低表达可使炎症因子的表达降低,细胞培养液中的葡萄糖浓度没有明显变化。结论:TLR4调控了炎症因子的表达,继而可以引起胰岛素敏感性的改变,影响了胰岛素抵抗的发生。

关键词： TLR4 人骨骼肌细胞(HSKMC 3500) 炎症因子胰岛素抵抗

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ω-3多不饱和脂肪酸对肿瘤细胞Rho GTP酶翻译后修饰的影响

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现代生物医学进展 2012年第1期12卷 9-11页

作者：张乾勇易龙冉莉第三军医大学营养与食品卫生学教研室重庆400038

目的:观察ω-3多不饱和脂肪酸(ω-3 Polyunsaturated fatty acid,ω-3 PUFA)对人前列腺癌PC-3细胞和乳腺癌MDA-MB-231细胞Rho蛋白翻译后修饰的影响。方法:60μmol/L的二十碳五烯酸(eicosapentaenoic acid,EPA)和二十二碳六烯酸(docosahex-aenoic acid,DHA)处理PC-3和MDA-MB-231细胞24h后,检测EPA和DHA对法尼基蛋白转移酶活性的影响,对Rho蛋白的法尼基化修饰的影响,对Rho蛋白与GTP结合能力的影响。结果:EPA及DHA均能显著下调PC-3和MDA-MB-231细胞法尼基蛋白转移酶活性(P<0.01),抑制Rho蛋白(RhoA、Rac1、Rac2和Cdc42)的法尼基化修饰(P<0.01),并降低PC-3细胞Rho蛋白(RhoA、Rac1和Cdc42)与GTP的结合能力(P<0.05)。结论:ω-3 PUFA可能通过抑制肿瘤细胞Rho蛋白翻译后修饰,而影响肿瘤细胞的生物学特性。

关键词：前列腺癌乳腺癌 Rho蛋白 ω-3 PUFA 翻译后修饰

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皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪种群建立及其异种移植研究

皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪种群建立及其异种移植研究

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作者：江雯第三军医大学

学位级别：博士

一、背景 CTLA-4Ig(human cytotoxic T-lymphocyte-associated antigen4-immunoglobulin)是CTLA-4分子的细胞外功能区与人免疫球蛋白IgG1恒定区相结合的融合蛋白。它是功能明确、经典的免疫抑制分子，可与B7结合，阻断CD28/B7正性共刺激信号通路，诱导T细胞免疫无反应。许多研究都证实了其可以延长移植物存活时间。本实验室前期与西南医院烧伤研究所吴军教授课题组合作，利用hCTLA-4Ig基因重组腺病毒体外感染非转基因猪皮肤，成功研制了离体基因修饰活性皮肤[1]，也有效延长了活性猪皮肤在人体创面的存活时间。然而，全身性表达CTLA-4Ig的转基因动物难以成活。研究报道敲除CTLA-4基因的小鼠及全身高表达pCTLA-4Ig的转基因猪都在出生后不久死亡，提示CTLA-4Ig对转基因动物自身免疫功能有一定的影响，若调控性、限制性的表达CTLA-4Ig可能会降低该蛋白对转基因动物全身免疫功能的影响，提高制备转基因动物的成功率。大面积烧伤病人由于自体及异体皮肤不足以满足移植需要，猪皮肤作为临时替代和覆盖物已在临床上应用。皮肤是非血管化器官，其移植后的排斥反应主要以细胞排斥为主。根据本实验室前期的实验，以hCTLA-4Ig腺病毒体外修饰的基因转染猪皮能够显著延长其猪皮在烧伤病人创面存活时间，但体外病毒转染方法为单次转染单次应用，涉及病毒制备及转染工艺，成本高、工艺复杂、效率低、稳定性差、质量控制难度高。因此，构建皮肤靶向表达hCTLA-4Ig并可稳定遗传的转基因猪群体或品系作为皮肤供体，可望形成稳定、高效、经济的异种移植皮肤来源。巴马香猪是我国小型猪群体中唯一具有白色被毛的品系，且体表白毛面积大、繁殖力强、抗病力强、性格温驯，生物学特性明确，是适合的医学实验动物。利用标准化的巴马香猪构建转基因猪种群，可望提高转基因猪品系或群体的标准化、提高供体猪皮肤一致性，从而提高模型研究科学性、产品稳定性。研制皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪是本实验研究最终目的。但由于构建转基因猪周期长、成本高、风险大，而小鼠繁殖力强、世代间隔短、研究时间短、经济成本低，因此在构建转基因猪以前构建转基因小鼠有利于提高研究的可控性。同时，构建小鼠、猪的皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因动物模型，形成从小动物到大动物的模型体系，更有助于深入、系统研究hCTLA-4Ig及其在异种移植中的作用及机理。二、目的（一）建立小鼠、猪的皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因动物模型，为系统研究hCTLA-4Ig分子对异种皮肤移植排斥反应的调控功能，提供从小动物（小鼠）到大动物（猪）的模型体系。（二）建立皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪群体，为研制高效、稳定、经济的异种移植皮肤产品形成基础。三、方法（一）皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因小鼠制备、种群建立及其功能验证通过慢病毒载体的方法构建皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因小鼠，并建立封闭繁育群体；用PCR方法进行阳性小鼠的筛选和鉴定；用RT-PCR、real time PCR、ELISA、WB和免疫组化的方法研究转基因蛋白在小鼠体内的表达和分布；用单向MLC的方法，研究该转基因蛋白在体外的生物活性；用小鼠→大鼠异种皮肤移植实验模型，观察移植皮肤的存活状况、时间，研究该转基因蛋白在体内的生物学活性。（二）皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪的构建以体细胞核移植方法构建皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪；以PCR方法进行转基因阳性猪筛选和鉴定；以WB方法初步分析转基因猪体内该蛋白的表达和分布。（三）皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪种群建立及其异种移植研究通过体细胞核移植的方法构建皮肤靶向表达hCTLA-4Ig转基因巴马香猪，并形成封闭繁育群体；用PCR方法进行阳性转基因猪的筛选和鉴定；以ELISA和WB的方法研究转基因蛋白在猪体内的表达和分布；以单向MLC的方法，研究该转基因蛋白在体外的生物活性；以猪→大鼠异种皮肤移植实验模型，观察移植皮肤的存活状况、时间，研究该转基因蛋白在体内的生物学活性；以病理切片HE染色来观察皮肤移植后的组织学变化。四、结果（一）建立了皮肤靶向表达hCTLA-4Ig的转基因小鼠种群，并证实了该转基因蛋白在小鼠皮肤组织的特异性表达及其生物学活性。根据PCR结果证实本实验获得8只hCTLA-4Ig转基因首建小鼠，转基因首建鼠的得率（转基因首建小鼠数/注射转染的胚胎数）是6.3%；并且通过这8只转基因首建小鼠的横交繁殖、

关键词： hCTLA-4Ig 转基因角蛋白皮肤异种移植

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NAMPT/Visfatin对内皮祖细胞的调节作用

NAMPT/Visfatin对内皮祖细胞的调节作用

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作者：杜慧第二军医大学

学位级别：硕士

烟酰胺磷酸核糖转移酶(nicotinamide phosphoribosyltransferase, NAMPT)，又名内脏脂肪素(visfatin)，是一种由脂肪细胞分泌的细胞因子。NAMPT能够催化生成烟酰胺单核苷酸（Nicotinamide mononucleotide，NMN），NMN继而被烟酰胺单核苷酸腺嘌呤转移酶（Nicotinamide momonucleotide adenylyltransferase，Nmnat）转化为NAD+。NAMPT是NAD+合成第一步的限速酶。内皮祖细胞是内皮细胞的前体细胞，在胚胎或者成年机体缺血、创伤等病理状态下参与血管的生成，与缺血部位新生血管形成、重塑密切相关。国内外众多实验结果和临床证据表明，内皮祖细胞在缺血后血管新生的过程中发挥了极其重要的作用，循环系统中的内皮祖细胞数量可以预测心脑血管事件和糖尿病的发生[1-3]。注入外源内皮祖细胞可增加缺血心肌的血管新生，改善心肌梗死后的心室功能[4-5]。内皮祖细胞移植的开展为促进缺血性疾病局部血管新生、改善缺氧提供了新的手段，一经出现就受到了医学界的广泛关注，成为治疗严重缺血性疾病的手段之一，但移植后的内皮祖细胞靶向性较差导致内皮祖细胞利用率的低下，限制了内皮祖细胞的广泛应用。因此，发现内皮祖细胞在体内趋化的途径，增加内皮祖细胞在体内的归巢已成为目前研究的热点。然而，大量的研究证据也揭示了，在内皮祖细胞介导的血管新生和伤口愈合的过程中，还有其他内源性调节因子的参与[6-7]。众所周知， NAD+是生命体内200多种氧化还原反应的辅酶，是电子传递链和能量代谢过程中非常重要的一个辅因子，参与能量传递过程中的众多信号转导通路[8]。在细胞的很多生理过程中如Ca2+动员、基因稳定、凋亡、代谢、应激、老化等起着至关重要的作用。NAMPT是哺乳动物NAD+合成途径的限速酶，调节着细胞内总的NAD+水平和线粒体中的NAD+水平。大量研究表明，细胞内外均存在的NAMPT，在调节细胞存活、免疫应答、昼夜节律和代谢异常的过程中起到了关键作用[9-13]。此外，我们实验室在之前的工作中已经证实NAMPT在脑卒中中具有神经元保护作用。因此，我们推测NAMPT可能与缺血后内皮祖细胞的功能发挥有关。为此，我们设计了本论文中的一系列实验来验证这一设想。在整体动物水平，我们分别利用NAMPT的化学抑制剂FK866，以及过表达NAMPT的转基因动物，研究干预NAMPT对内皮祖细胞功能的影响。首先，我们通过对普通C57BL/6J小鼠实施右下肢股动脉结扎手术，造成下肢缺血模型，再腹腔注射FK866（NAMPT酶特异性抑制剂）数天，与手术组和假手术组相比，以骨髓中和外周血中内皮祖细胞的数量作为检测指标，验证NAMPT对内皮祖细胞的生成和其向外周血中的动员有无影响，并对结果进行统计分析。转基因动物我们采用了NAMPT过表达小鼠和NAMPT酶突变体过表达小鼠，通过对转基因小鼠实施右下肢股动脉结扎手术，造成下肢缺血模型，与野生型小鼠手术组相比，以骨髓中和外周血中内皮祖细胞的数量，缺血下肢血流量作为检测指标，验证NAMPT对内皮祖细胞的生成和其向外周血中的动员有无影响，并对结果进行统计分析。在细胞水平，我们利用免疫磁珠分选细胞的方法，从小鼠骨髓细胞中分离得到了内皮祖细胞，并加以体外培养，用FK866（NAMPT酶特异性抑制剂）孵育培养的内皮祖细胞，观察其增殖、分化、迁移能力及成管型性。此外，我们也采用同样的内皮祖细胞提取方法提取了NAMPT过表达小鼠和NAMPT酶突变体过表达小鼠骨髓中的内皮祖细胞，加以体外培养，观察并比较这两种内皮祖细胞增殖、分化、迁移能力和成管型性，研究NAMPT对内皮祖细胞增殖、分化、迁移和成管性等生物学功能的影响。动物实验结果显示，用FK866抑制NAMPT活性后，由于缺血引发的内皮祖细胞在骨髓中的生成和向外周血中的动员被抑制了。此外，转基因小鼠部分的实验结果显示，与野生型小鼠相比，NAMPT过表达小鼠血液和骨髓中的内皮祖细胞数量显著增加，而NAMPT酶突变体小鼠与野生型小鼠血液和骨髓中的内皮祖细胞数量基本接近，这些现象说明过表达NAMPT能够促进内皮祖细胞在骨髓中的生成和向外周血的动员。在细胞实验中我们也发现，用FK866抑制NAD+后，降低了内皮祖细胞的增殖、动员，破坏了内皮祖细胞的成管。而NAMPT过表达内皮祖细胞的增殖和迁移能力增强，小管形成增多。在NAMPT酶突变体过表达内皮祖细胞中，则没有观察到这些现象。本课题首次就NAMPT对内皮祖细胞功能的调节作用进行了研究，通过整体动物部分实验和细胞水平实验，互为佐证，探索NAMPT在内皮祖细胞功能发挥中所起的作用。所有这些结果表明NAD+，

关键词： NAMPT 内皮祖细胞血管新生缺血性疾病

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