检索结果-内蒙古大学图书馆

仙台病毒递送新型冠状病毒RBD蛋白鼻内免疫接种增强呼吸道黏膜和系统性免疫应答的初步研究

空军军医大学学报 2023年第7期44卷 609-614页

作者：袁明城张剑陈洋薛潘武福星袁若栋董阳超徐志凯张芳琳雷迎峰空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

目的研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并... 详细信息

目的研究仙台病毒(SeV)作为递送载体在增强新型冠状病毒(SARS-CoV-2)RBD蛋白诱导呼吸道黏膜和系统性免疫应答的特征。方法利用同源重组技术构建SARS-CoV-2 RBD与抗体Fc融合蛋白编码基因的真核表达质粒,将其转染293-T细胞中进行表达并用Western blotting验证;将RBD-Fc融合蛋白表达质粒转染293-T细胞大量表达并使用亲和层析进行蛋白纯化;通过SeV递送RBD-Fc蛋白进行鼻内免疫接种,同时设置RBD-Fc组、SeV组、PBS组作为对照,各组分别在2周后加强免疫1次,3周后检测血清样本和肺泡灌洗液(BALF)中特异性抗体水平。结果 RBD、Fc蛋白编码基因片段通过重叠PCR方法得到融合蛋白基因片段(RBD-Fc),成功构建pCAGGS-RBD-Fc真核表达质粒;Western blotting结果显示RBD-Fc融合蛋白的表达条带符合预期大小,大量表达后经亲和层析获得一条单一的接近Mr 60 000的条带,与预期大小一致,纯度高;与RBD-Fc组、SeV组、PBS组相比,SeV递送RBD-Fc蛋白通过鼻腔加强免疫小鼠后的血清样本和BALF中均可检测到RBD特异性IgG(血清样本:P<0.01;BALF样本:P<0.05),且BALF中RBD特异性IgA相比RBD-Fc组有一定升高。结论 SeV在递送SARS-CoV-2 RBD蛋白进行鼻内免疫接种方面能够诱导一定水平的黏膜免疫和系统性免疫,为呼吸道传染病的黏膜疫苗研究奠定了初步的实验基础。

关键词：新型冠状病毒 RBD-Fc蛋白黏膜免疫仙台病毒

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16S核糖体RNA基因测序评估高原红细胞增多症患者血液菌群特征

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陆军军医大学学报 2024年第10期46卷 1075-1082页

作者：黄沛黄河谢慎威吴玉钟志凤董华平周思敏李鹏谢佳新陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原作业医学教研室重庆400038 联勤保障部队第九四〇医院神经内科兰州730000 陆军第九五三医院健康管理科西藏日喀则857000

目的探讨高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)患者血液菌群变化特征及其与HAPC发病风险的相关性。方法采用横断面研究设计方案,以2021年在西藏日喀则陆军第九五三医院健康管理科参加体检的41名HAPC患者(HAPC组)和41名高... 详细信息

目的探讨高原红细胞增多症(high altitude polycythemia,HAPC)患者血液菌群变化特征及其与HAPC发病风险的相关性。方法采用横断面研究设计方案,以2021年在西藏日喀则陆军第九五三医院健康管理科参加体检的41名HAPC患者(HAPC组)和41名高原健康人员(对照组)为研究对象。通过高通量测序技术对血液细菌16 S核糖体RNA(16S rRNA)基因的V3-V4可变区进行检测,比较分析HAPC组和对照组血液菌群组成情况和差异。结果2组人员均为汉族男性,年龄、体质量指数及高原移居时间等基线数据比较差异无统计学意义(P>0.05)。菌群多样性分析显示,HAPC组中反映血液菌群α-多样性的Simpson指数[(0.931±0.005)vs(0.907±0.008),P<0.05]、Goods Coverage指数[(0.998±0.001)vs(0.997±0.001),P<0.001]和Pielou指数[(0.597±0.011)vs(0.567±0.009),P<0.05]显著高于对照组。2组间β多样性差异有统计学意义(P<0.01)。菌群相对丰度分析显示,HAPC组血液嗜糖假单胞菌属(Pelomonas)[(0.046±0.004)vs(0.033±0.003),P<0.05]、固氮螺菌属(Azospirillum)[(0.046±0.006)vs(0.021±0.003),P<0.01]、食酸菌属(Acidovorax)[(0.032±0.003)vs(0.019±0.002),P<0.05]的相对丰度均显著高于对照组。特征性细菌LEfSe分析显示,HAPC组标志菌群是α-变形菌纲,对照组标志菌群是毛螺菌科。结论HAPC患者较高原健康人群的血液菌群在多样性、相对丰度及特征性菌类方面发生显著变化,这类变化可能与HAPC的发生发展密切关联。

关键词：高原红细胞增多症血液菌群移居者

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线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达及兔多克隆抗体制备

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细胞与分子免疫学杂志 2023年第3期39卷 268-274页

作者：刘磊聂雅婷丁兰谷雨袁媛叶菁空军军医大学基础医学院病理学教研室陕西西安710032

目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG... 详细信息

目的构建人线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28)的原核表达质粒,进行蛋白表达和纯化,制备兔抗多克隆抗体并进行初步鉴定。方法构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达质粒,转化至BL21(DE3)大肠杆菌,采用异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导蛋白表达。提取蛋白包涵体,并用8 mol/L尿素溶解,His-NTA柱纯化。获得纯化SLC25A28蛋白免疫新西兰大白兔制备SLC25A28多克隆抗体,Western blot法鉴定SLC25A28抗体特异性。结果成功构建pET28a(+)-SLC25A28-His原核表达载体质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达SLC25A28蛋白,蛋白纯度约为90%,Western blot法证明制备的抗体能特异性识别小鼠睾丸组织中的SLC25A28蛋白。结论成功对人SLC25A28进行了原核表达,并制备了具有特异性的兔抗人SLC25A28多克隆抗体。

关键词：线粒体铁转运蛋白2(mitoferrin 2/SLC25A28) 原核表达蛋白纯化多克隆抗体免疫特异性

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基于PD-1/PD-L1阻断的联合疗法在非小细胞肺癌治疗中的研究进展

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第5期38卷 472-478页

作者：张宁宁王旭沈金澳孙世昱沈燕王军空军军医大学基础医学院学员二大队陕西西安710032 微生物与病原生物学教研室陕西西安710032

非小细胞肺癌(NSCLC)严重威胁患者的生存质量,传统治疗手段存在副作用大、易复发、易耐药、缺乏特异性等缺点。基于免疫检查点阻断的免疫疗法是近年来肿瘤治疗领域的突破性进展,它将肿瘤治疗从“点”向“面”转换,是一种以T细胞功能调... 详细信息

非小细胞肺癌(NSCLC)严重威胁患者的生存质量,传统治疗手段存在副作用大、易复发、易耐药、缺乏特异性等缺点。基于免疫检查点阻断的免疫疗法是近年来肿瘤治疗领域的突破性进展,它将肿瘤治疗从“点”向“面”转换,是一种以T细胞功能调控为重点,进而控制肿瘤进展的新策略。程序性死亡蛋白1(PD-1)是研究最充分的免疫检查点分子。近年来,靶向PD-1及其配体PD-L1信号通路的免疫疗法凭借其特异性较强、副作用小等优势,已经在NSCLC治疗中获得了令人振奋的疗效,但是仍有相当一部分患者对靶向PD-1/PD-L1通路的单一抗体治疗效果不显著,研究表明,基于PD-1/PD-L1通路的靶向免疫疗法联合其他肿瘤治疗手段能够显著提高患者的生存率和生存质量。例如放化疗、双免疫检查点、免疫调节物质,甚至肠道菌群调节均可联合抗PD-1/PD-L1单抗应用于NSCLC的临床治疗,这些联合疗法各有其优缺点,其协同作用机制也有待更进一步研究。对于NSCLC而言,更多基于PD-1/PD-L1阻断的新型联合疗法也在探索中,从而为提高患者生存率和生存质量奠定基础。

关键词：非小细胞肺癌(NSCLC) 程序性死亡受体1(PD-1) 程序性死亡受体1配体1(PD-L1) 联合治疗综述

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模拟失重后骨髓来源巨噬细胞转录组高通量测序及分析

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免疫学杂志 2023年第3期39卷 208-215页

作者：杨柳陈旭涛侯永利李娟唐康陈丽华西北大学生命科学学院西安710069 空军军医大学基础医学院免疫学教研室西安710032

目的探索模拟失重对小鼠骨髓来源巨噬细胞基因表达的影响。方法采用尾悬吊法构建模拟失重小鼠模型,对照组不做尾吊处理。模拟失重28 d后提取小鼠骨髓来源巨噬细胞并将其分别诱导为M0型和M1型巨噬细胞。随后,提取细胞总RNA进行转录组测... 详细信息

目的探索模拟失重对小鼠骨髓来源巨噬细胞基因表达的影响。方法采用尾悬吊法构建模拟失重小鼠模型,对照组不做尾吊处理。模拟失重28 d后提取小鼠骨髓来源巨噬细胞并将其分别诱导为M0型和M1型巨噬细胞。随后,提取细胞总RNA进行转录组测序及分析,并通过实时定量RT-PCR验证重要基因的差异表达。结果转录组测序结果显示,模拟失重组与对照组之间的M0型巨噬细胞共有807个基因差异表达;模拟失重组与对照组之间的M1型巨噬细胞共有898个基因差异表达。GO分析表明,M0型巨噬细胞差异表达基因主要集中于免疫应答、趋化等生物学过程中;M1型巨噬细胞差异基因主要富集于炎症反应、细胞迁移的正调控和单核细胞趋化等生物学过程中。KEGG通路分析发现M0型巨噬细胞的差异基因主要涉及趋化因子、细胞因子-细胞因子受体相互作用等信号通路;M1型巨噬细胞的差异基因主要涉及造血细胞谱系、流体剪切应力等信号通路。进一步分析发现,尾吊组与对照组在M0或M1型巨噬细胞中的差异基因均在细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路中富集,其中尾吊组的M0与M1型巨噬细胞中调节单核细胞/巨噬细胞迁移和浸润的关键趋化因子Ccl2均显著高表达,并进一步通过RT-PCR实验得到验证。结论模拟失重可显著影响小鼠巨噬细胞中以Ccl2为代表的与炎症发生和加重密切相关的基因表达水平,这些改变的基因富集于多个生物学过程,可能对巨噬细胞的黏附、迁移等功能产生影响。

关键词：模拟失重骨髓来源巨噬细胞转录组测序免疫功能

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细胞与分子免疫学杂志 2024年第7期40卷 585-590页

作者：宋洪涛卜欣阳李维妙卢通杨安钢秦卫军郑国旭空军军医大学西京医院泌尿外科陕西西安710032 空军军医大学基础医学院学员四大队陕西西安710032 西安交通大学第二附属医院乳腺诊疗中心陕西西安710004 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的研究细胞周期相关肿瘤高表达蛋白(CREPT)在前列腺癌中的表达情况和对前列腺癌发生发展的影响。方法采用基因表达谱交互分析数据库2(GEPIA2)和癌基因组图谱(TCGA)数据库进行生物信息学分析,22Rv1前列腺癌细胞转染CREPT小干扰片段下调... 详细信息

目的研究细胞周期相关肿瘤高表达蛋白(CREPT)在前列腺癌中的表达情况和对前列腺癌发生发展的影响。方法采用基因表达谱交互分析数据库2(GEPIA2)和癌基因组图谱(TCGA)数据库进行生物信息学分析,22Rv1前列腺癌细胞转染CREPT小干扰片段下调CREPT表达,采用CCK-8法、Transwell^(TM)实验和划痕愈合实验检测细胞的增殖、侵袭和迁移。体内裸鼠荷瘤实验检测CREPT对前列腺癌发生发展的影响。结果CREPT在前列腺癌中异常高表达,并与无进展生存期、肿瘤T分期、N分期、前列腺特异性抗原(PSA)水平和Gleason评分相关。CREPT能够促进前列腺癌22Rv1细胞增殖、侵袭和迁移。体内裸鼠荷瘤实验表明CREPT能够促进前列腺癌的进展。免疫浸润分析结果表明CREPT高表达与CD8+T细胞的浸润呈负相关。结论CREPT是潜在前列腺癌预后标志物,有望成为前列腺癌新的治疗靶点。

关键词：前列腺癌细胞周期相关肿瘤高表达蛋白(CREPT) 22Rv1细胞

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靶向抑制黑质网状部GABA能神经元的DRP1改善肝性脑病小鼠运动功能

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神经解剖学杂志 2024年第1期40卷 25-34页

作者：李晓东铁静静陈京浩孙毓泽吴菲菲杨雁灵王亚云空军军医大学第一附属医院肝胆胰脾外科西安710032 延安大学医学院人体解剖与组织胚胎学教研室延安716000 空军军医大学基础医学院神经系统疾病线粒体可塑性实验室国家级基础医学实验教学示范中心西安710032

目的:探讨黑质网状部(SNr)的GABA能神经元中线粒体分裂对急性肝性脑病(AHE)小鼠运动障碍的影响。方法:利用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备AHE小鼠模型,通过苏木精-伊红(HE)染色观察AHE小鼠肝小叶的变化,利用生化检测试剂盒检测AHE小鼠血... 详细信息

目的:探讨黑质网状部(SNr)的GABA能神经元中线粒体分裂对急性肝性脑病(AHE)小鼠运动障碍的影响。方法:利用硫代乙酰胺(TAA)腹腔注射制备AHE小鼠模型,通过苏木精-伊红(HE)染色观察AHE小鼠肝小叶的变化,利用生化检测试剂盒检测AHE小鼠血清天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)和血氨的变化。接下来通过转棒疲劳实验、高架十字迷宫实验、旷场实验观察AHE小鼠运动功能。进一步利用透射电镜观察分析AHE小鼠SNr的线粒体面积、周长、圆率等形态学指标的变化,Western Blot观察AHE小鼠SNr的线粒体分裂融合相关分子的表达变化。接下来,利用重组腺相关病毒(AAV)靶向调控AHE小鼠SNr的线粒体动力相关蛋白1(DRP1)的表达,在荧光酶标仪上检测SNr的线粒体膜电位(MMP)、细胞的ATP和活性氧(ROS),并观察小鼠运动功能的变化。结果:较对照组,AHE小鼠运动功能明显降低,SNr的线粒体分裂明显增强,线粒体分裂相关蛋白表达显著升高;AHE小鼠SNr的MMP显著下降,细胞的ATP下降,ROS升高。靶向抑制AHE小鼠SNr的DRP1表达后,运动改善;进一步观察发现,AHE小鼠SNr的线粒体分裂被抑制后,MMP显著升高,细胞的ATP升高,ROS下降,证明线粒体功能明显改善。结论:靶向抑制AHE小鼠黑质网状部GABA能神经元的线粒体分裂,可以改善线粒体形态和功能,从而缓解其运动障碍。

关键词：急性肝性脑病黑质网状部线粒体线粒体动力相关蛋白1 小鼠

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氯化胆碱和蔗糖切片液制作的小鼠脑片下丘脑视前区神经元电生理特性的比较

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空军军医大学学报 2023年第2期44卷 111-116页

作者：马乖乖毛宏晖奚楷文刘明月肖昊翔袁滋铎武胜昔王文挺殷松娜延安大学基础医学院神经生物学教研室陕西延安716000 空军军医大学基础医学院神经生物学教研室陕西西安710032

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区... 详细信息

目的比较不同切片液对小鼠下丘脑视前区(mPOA)脑片神经元电生理特性的影响。方法选取6~8周龄C57雌性小鼠,异氟烷麻醉后心脏灌注(通混合气950 mL/L O_(2),50 mL/L CO_(2))4℃氯化胆碱切片液或蔗糖切片液后取脑,振动切片机制备含mPOA脑区的冠状脑片,全细胞膜片钳记录mPOA电生理特性。结果采用蔗糖切片液制作的脑片mPOA神经元的内在兴奋性要优于氯化胆碱切片液,具体表现为细胞静息膜电位更超极化,动作电位幅度、不同电流刺激平均放电幅度、放电个数均高,半宽、基强度较小。而氯化胆碱切片液制作的脑片突触活性要更好,表现为兴奋性微小突触后电流频率高于蔗糖切片液制作脑片的细胞。结论蔗糖切片液和氯化胆碱切片液在保证细胞活性的情况下,蔗糖切片液更适合记录mPOA神经元的内在兴奋性,而氯化胆碱切片液更适合突触特性的记录。

关键词：氯化胆碱蔗糖下丘脑内侧视前区脑片

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两种人胚胎干细胞系向神经元方向诱导分化的比较研究

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神经解剖学杂志 2022年第1期38卷 21-27页

作者：陈安迪李子杰赵又谊武胜昔刘加强王亚周空军军医大学基础医学院神经生物学教研室西安710032 空军军医大学口腔医院口腔麻醉学教研室西安710032 联合参谋部警卫局卫生保健处北京100017

目的:比较研究两种人胚胎干细胞系H8和H9在维持培养、向神经前体细胞和神经元方向分化的特性。方法:采用mTeSR1做为基本培养基,Matrigel做为基质胶,进行无滋养层的维持培养。采用白细胞抑制因子1(Smad-1)双抑制剂的神经前体细胞诱导,和... 详细信息

目的:比较研究两种人胚胎干细胞系H8和H9在维持培养、向神经前体细胞和神经元方向分化的特性。方法:采用mTeSR1做为基本培养基,Matrigel做为基质胶,进行无滋养层的维持培养。采用白细胞抑制因子1(Smad-1)双抑制剂的神经前体细胞诱导,和含B27的Neurobasal联合脑源性神经营养因子(BDNF)、胶质细胞源性神经营养因子(GDNF)的神经元诱导方案。采用免疫荧光化学染色检测胚胎干细胞标记蛋白(Nanog和OCT4)、神经前体细胞标记蛋白(Nestin、Sox2和Pax6)、神经元标记蛋白Tuj-1的表达。结果:在维持培养和神经诱导的早期:H8和H9细胞在胚胎干细胞标记蛋白表达及类胚体形成方面无显著差异。神经前体细胞阶段:诱导分化相同时间(诱导14 d),两种细胞系的玫瑰花环样结构形成,及巢蛋白(Nestin)、SRY转录因子2(Sox2)的表达均无显著差异;相对而言,更高比例的H9细胞表达神经前体细胞标记蛋白成对同源基因盒6(Pax6)。神经元阶段:诱导相同时间(诱导30 d),约89%的H9细胞表达神经元标记蛋白Tuj-1,而仅约34%的H8细胞表达Tuj-1。结论:H8、H9细胞的胚胎干细胞特性相似。与H8相比,H9细胞的神经元方向分化效率更高,更适合进行神经系统疾病机制及转化研究。

关键词：胚胎干细胞神经干细胞诱导分化神经前体细胞神经元

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胞葬作用对肿瘤发生发展影响的研究进展

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中国肿瘤生物治疗杂志 2023年第10期30卷 914-918页

作者：俞数(综述) 陶翊桀钱程(审阅) 海军军医大学基础医学院免疫学教研室暨免疫与炎症全国重点实验室上海200433

胞葬作用是吞噬细胞清除凋亡细胞的过程,具有抗炎和促瘤作用。胞葬作用作为在肿瘤微环境(TME)中发生频率最高的事件之一,能对肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭,以及抗肿瘤免疫等生物学特征产生重要影响。胞葬作用过程中的复杂代谢状态... 详细信息

胞葬作用是吞噬细胞清除凋亡细胞的过程,具有抗炎和促瘤作用。胞葬作用作为在肿瘤微环境(TME)中发生频率最高的事件之一,能对肿瘤细胞的增殖、凋亡、转移和侵袭,以及抗肿瘤免疫等生物学特征产生重要影响。胞葬作用过程中的复杂代谢状态可以通过“找我(find me)”、“吃我(eat me)”信号和释放降解产物影响肿瘤的发生与发展。此外,胞葬作用可促进肿瘤相关巨噬细胞(TAM)极化为M2表型、调节抗炎因子和促炎细胞因子分泌以及调节T细胞、NK细胞等免疫细胞的激活和成熟,产生一系列的抗炎和免疫抑制信号,影响TME,从而促进肿瘤细胞逃避免疫监视机制,导致肿瘤进展。从胞葬作用角度出发探讨肿瘤治疗的潜在靶点,为抗肿瘤药物的研发提供新的思路。

关键词：胞葬作用代谢肿瘤微环境免疫调节肿瘤治疗

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