检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2022年第5期38卷 387-393页

作者：谢燕玲宁唤唤梁璇康健任瑞张慧张娜娜路延之柏银兰延安大学生命科学学院延安716000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室西安710032 西安培华学院医学院西安710065

目的制备结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,Mtb)分泌蛋白MPT64的单克隆抗体(Monoclonal antibody,mAb),并分析mAb的特异性。方法PCR扩增mpt64基因并克隆入pET28a(+)构建原核表达载体;将获得的重组菌株在IPTG作用下诱导表达MPT64蛋白,Western blot验证蛋白表达;亲和层析法纯化目的蛋白。重组MPT64蛋白免疫小鼠,取脾细胞与杂交瘤细胞SP2/0融合,筛选得到阳性杂交瘤细胞系。以该杂交瘤细胞制备小鼠腹水,中压液相色谱仪纯化腹水获得mAb。ELISA法检测获得的mAb的相对亲和力和亚类,Western blot检测mAb的特异性。结果本研究成功构建原核表达载体pET28a(+)-mpt64并诱导表达了MPT64蛋白。亲和层析法获得纯化的重组MPT64蛋白。该重组蛋白免疫小鼠的脾细胞和SP2/0细胞融合后,经筛选获得能够稳定分泌抗MPT64 mAb的杂交瘤细胞系MPT64-A5B2。中压液相色谱仪纯化小鼠腹水中的MPT64-A5B2 mAb。该mAb的亲和力为2.813×10^(-7) g/mL,属于IgG 1亚类。MPT64-A5B2 mAb能特异性识别Mtb中的MPT64蛋白。结论本研究制备了MPT64重组蛋白,并获得了抗MPT64 mAb,为MPT64用于结核病诊断和治疗制剂的研制奠定了基础。

关键词：结核分枝杆菌 MPT64 分泌蛋白单克隆抗体

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新型冠状病毒结构蛋白单克隆抗体的制备与鉴定

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空军军医大学学报 2023年第7期44卷 595-601页

作者：王玉玲金伯泉李娜田莹董芸李琦马樱庄然空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的制备针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)S1亚基、核衣壳蛋白(N蛋白)的小鼠源性单克隆抗体(mAbs),进行功能和应用的初步鉴定。制备具备中和活性的高亲和力人鼠嵌合抗体。方法用重组表达的SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基和N蛋白... 详细信息

目的制备针对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)刺突蛋白(S蛋白)S1亚基、核衣壳蛋白(N蛋白)的小鼠源性单克隆抗体(mAbs),进行功能和应用的初步鉴定。制备具备中和活性的高亲和力人鼠嵌合抗体。方法用重组表达的SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基和N蛋白分别免疫BALB/c小鼠,利用常规B细胞杂交瘤技术制备抗S蛋白S1亚基mAbs和抗N蛋白mAbs,并鉴定其在Western blotting、免疫组织化学染色中的应用价值;建立检测可溶性S蛋白和N蛋白的夹心ELISA方法;基于假病毒-荧光素酶检测系统,检测特异性抗体的中和活性。将分泌具备中和活性抗S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株测序,制备人鼠嵌合抗体。结果获得53株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA326.1~XA326.53;获得42株分泌小鼠抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs的杂交瘤细胞株,克隆号分别命名XA327.1~XA327.42。初步鉴定出9株可用于Western blotting检测可溶性SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基的mAbs、8株可用于Western blotting检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的mAbs;9株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基mAbs、4株可用于免疫组织化学染色的抗SARS-CoV-2 N蛋白mAbs。构建以mAb XA326.7为包被抗体、生物素标记的mAb XA326.19为检测抗体的检测可溶性SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基的夹心ELISA试剂盒;采用mAb XA327.37作为包被抗体、生物素标记的mAb XA327.25为检测抗体,可以建立检测可溶性SARS-CoV-2 N蛋白的夹心ELISA试剂盒。XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49 mAbs具有中和活性,可以在假病毒感染实验中阻断病毒对人ACE2阳性细胞的感染。结论成功制备出一套小鼠抗SARS-CoV-2 S蛋白S1亚基、N蛋白的mAbs,可用于多种免疫学检测技术,XA326.4、XA326.7、XA326.8、XA326.49中和活性抗体具有潜在的临床应用价值。

关键词：新型冠状病毒刺突蛋白核衣壳蛋白单克隆抗体中和抗体免疫学检测方法

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利用CRISPR/Cas13d抑制肠道病毒71型感染

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生命科学研究 2025年第1期29卷 56-61页

作者：张晓晓古天乐吴朔徐溪王高文遆新宇张艳西京医院呼吸与危重症医学科中国陕西西安710000 空军军医大学基础医学院微生物与病原生物学教研室中国陕西西安710032

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/C... 详细信息

肠道病毒71型(enterovirus 71,EV71)感染会导致手足口病和危及生命的神经系统疾病,目前尚无针对EV71的抗病毒药物可用。为了利用成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白(clustered regularly interspaced short palindromic repeat/CRISPR-associated protein,CRISPR/Cas)系统抑制EV71感染,本研究选择CRISPR/Cas13d系统,构建U6启动子驱动的向导RNA(guide RNA,g RNA)、EF-1α启动子驱动的Cas13d和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)的表达载体;将不同g RNA质粒分别转染人胚肾细胞293T(HEK293T)后感染EV71,通过实时荧光定量PCR检测EV71 VP1 m RNA的含量,采用Western-blot检测EV71 VP1蛋白的表达量,利用流式细胞术检测GFP蛋白的含量,运用CCK-8法检测细胞活力。结果显示,在5个靶向EV71基因组不同位置的g RNA质粒中,有4个可以显著抑制EV71 VP1 m RNA和蛋白质表达,其中1个质粒具有较强的旁切活性,但是所有的质粒均没有表现出显著的细胞毒性。实验结果初步表明,可以利用CRISPR/Cas13d系统抑制EV71感染,但是需要选择合适的g RNA,以保障抗病毒作用和避免细胞毒性。

关键词：肠道病毒71型(EV71) 成簇规则间隔的短回文重复序列及其相关蛋白13d(CRISPR/Cas13d) 抗病毒活性细胞毒性

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mRNA疫苗制备方法的优化及验证

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免疫学杂志 2023年第1期39卷 78-85页

作者：全纹萱周伃欣关山肖琴曾杰何久香赵镜林治华丁晓艳李晋涛重庆理工大学药学与生物工程学院 400054 陆军军医大学基础医学院军事生物安全教研室重庆400038 陆军军医大学国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的筛选获得高效的mRNA疫苗制备方法,为mRNA疫苗研发提供参考。方法本研究使用了A、B、C三种不同的mRNA疫苗体外合成方法,比较筛选出最优方法并在小鼠体内进行了效果验证。结果3种方式合成的mRNA凝胶电泳条带清晰、完整,紫外分光光度... 详细信息

目的筛选获得高效的mRNA疫苗制备方法,为mRNA疫苗研发提供参考。方法本研究使用了A、B、C三种不同的mRNA疫苗体外合成方法,比较筛选出最优方法并在小鼠体内进行了效果验证。结果3种方式合成的mRNA凝胶电泳条带清晰、完整,紫外分光光度法测定mRNA OD_(260nm)/OD_(280nm)均在1.9~2.0的范围之内,纯度较好。其中,C方法转录后mRNA的浓度最高且体外转录的eGFP mRNA转染细胞后,其表达量更高,持续时间更长。动物体内活体成像也表明,C方法转录的萤火虫荧光素酶(firefly luciferase,Fluc)mRNA经脂质纳米颗粒递送可在动物体内高效表达,并且经该方法合成的登革病毒mRNA疫苗接种小鼠21 d后可产生体液免疫。结论通过对比筛选出的C方法为mRNA疫苗制备的最佳方法,可用于后续各类mRNA疫苗研发。

关键词： mRNA疫苗体外转录 mRNA质量细胞转染活体成像

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突变型p53通过下调谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)表达和增加脂质活性氧产生促进人结肠癌和肺癌细胞的铁死亡

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细胞与分子免疫学杂志 2022年第6期38卷 522-527页

作者：雎转张瑞杨安钢尹会龙新乡医学院医学检验学院河南新乡453003 空军军医大学基础医学院免疫学教研室陕西西安710032

目的探究突变型p53对肿瘤细胞铁死亡的影响。方法利用点突变构建突变型p53-R175H、p53-R273H的质粒,通过慢病毒包装、感染和药物筛选,建立稳定过表达突变型p53的肿瘤细胞系,并采用Western blot法对稳定过表达效果进行验证;通过碘化丙啶(... 详细信息

目的探究突变型p53对肿瘤细胞铁死亡的影响。方法利用点突变构建突变型p53-R175H、p53-R273H的质粒,通过慢病毒包装、感染和药物筛选,建立稳定过表达突变型p53的肿瘤细胞系,并采用Western blot法对稳定过表达效果进行验证;通过碘化丙啶(PI)染色、脂质活性氧(ROS)的检测观察突变型p53对铁死亡的影响;通过Western blot法检测稳定过表达突变型p53细胞系中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的蛋白水平。结果成功建立稳定过表达p53-R175H、p53-R273H的HCT116和A549细胞系;与对照组相比,稳定过表达p53-R175H、p53-R273H细胞的铁死亡明显增加,ROS积聚明显增加,细胞GPX4表达水平明显下调。结论突变型p53通过下调GPX4表达、产生过量脂质ROS促进肿瘤细胞的铁死亡。

关键词：突变型p53 铁死亡脂质过氧化谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)

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外泌体用于疾病诊疗和药物递送的研究进展

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药学实践与服务 2023年第5期41卷 265-272,320页

作者：王宏播卞康晴郭灵怡代宇俞媛海军军医大学药学系药剂学教研室上海200433

外泌体是细胞外囊泡的一种,作为特殊的细胞间通讯介质,携带蛋白质、核酸及脂质等,在生物体内各种生理、病理过程中发挥着重要作用。作为内源性纳米囊泡,外泌体具有体循环稳定性、良好的生物相容性、对组织和细胞的特异性靶向等优点,是... 详细信息

外泌体是细胞外囊泡的一种,作为特殊的细胞间通讯介质,携带蛋白质、核酸及脂质等,在生物体内各种生理、病理过程中发挥着重要作用。作为内源性纳米囊泡,外泌体具有体循环稳定性、良好的生物相容性、对组织和细胞的特异性靶向等优点,是理想的药物递送载体。外泌体为多种疾病的诊断和预后评估提供支持,同时作为一种非常有潜力的、安全、特异性强的内源性纳米药物载体具有广阔的应用前景。本文阐述外泌体的产生机制,对其提取分离方法特点进行总结,并围绕外泌体在免疫和炎症相关疾病、心血管系统疾病、神经系统疾病、肿瘤等疾病的应用机制进行讨论,以及作为药物载体的工程化修饰和主动靶向药物递送进行综述。

关键词：外泌体靶向性修饰靶向治疗药物递送

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肿瘤相关巨噬细胞与肿瘤干细胞相互调控作用的研究进展

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中国免疫学杂志 2021年第22期37卷 2745-2753页

作者：解营利李鹏辉杨嘉蒙陈衍秦鸿雁胡昳旸(指导) 解放军总医院海南医院三亚572013 空军军医大学基础医学院医学遗传与发育生物学教研室西安710032

肿瘤干细胞(CSCs)在肿瘤中数量极少,但在肿瘤发生、发展、扩散乃至复发的过程中发挥关键作用。CSCs具有无限的自我更新、多向分化以及在体内诱发肿瘤形成的能力。与此同时,CSCs塑造了适宜自身生存的肿瘤免疫微环境,以支持肿瘤生长。其中... 详细信息

肿瘤干细胞(CSCs)在肿瘤中数量极少,但在肿瘤发生、发展、扩散乃至复发的过程中发挥关键作用。CSCs具有无限的自我更新、多向分化以及在体内诱发肿瘤形成的能力。与此同时,CSCs塑造了适宜自身生存的肿瘤免疫微环境,以支持肿瘤生长。其中,肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)作为肿瘤组织中最丰富的免疫细胞,受CSCs募集在肿瘤中累积,并通过直接或间接的方式为CSCs提供信号,增强CSCs的“干性”。本文以肝癌、乳腺癌、胶质瘤和胰腺癌为模型,详细讨论TAMs与CSCs间的相互作用,以期为TAMs介导干预CSCs进行肿瘤免疫治疗提供新思路。

关键词：肿瘤干细胞肿瘤相关巨噬细胞肝细胞癌乳腺癌胶质瘤胰腺导管腺癌

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丹皮酚对人神经母细胞瘤细胞帕金森病模型的保护作用及其初步机制

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解放军医学杂志 2025年第1期50卷 69-75页

作者：孙胜男和璐璐秦劭晨徐磊王利然于保锋马存根樊慧杰柴智山西中医药大学多发性硬化益气活血重点研究室/神经生物学研究中心山西晋中 030619 山西医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室山西太原 030001 山西中医药大学第一临床学院山西太原 030024 山西中医药大学第二临床学院山西太原 030012

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-M... 详细信息

目的探究丹皮酚(PAE)对过表达α-突触核蛋白(α-Syn)诱导的人神经母细胞瘤细胞(SH-SY5Y)损伤中自噬的影响及其相关作用机制.方法以SH-SY5Y细胞为对照组,含A53T-α-Syn突变的SH-SY5Y细胞为模型组、PAE(150 μg/ml)组、3-甲基腺嘌呤(3-MA,1 mmol/L)组和PAE(150 μg/ml)+3-MA(1 mmol/L)组.采用CCK-8法检测各组细胞存活率,光学显微镜下观察细胞形态,Western blotting检测α-Syn和自噬通路相关蛋白Beclin-1、p62、微管相关蛋白轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、Bcl-2表达水平.结果与对照组比较,模型组细胞存活率明显降低(P＜0.01),α-Syn蛋白表达水平明显增高(P＜0.001),自噬相关蛋白LC3-Ⅱ、Beclin-1蛋白表达水平明显降低(P＜0.01或P＜0.05),自噬底物蛋白p62蛋白表达水平升高(P＜0.05),调节自噬通路相关蛋白p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平降低(P＜0.05或P＜0.01).与模型组比较,PAE组细胞存活率增高(P＜0.01),α-Syn、p62蛋白表达水平降低(P＜0.01或P＜0.05),LC3-Ⅱ、Beclin-1、p-JNK、Bcl-2蛋白表达水平增高(P＜0.05).与PAE组比较,PAE+3-MA组细胞α-Syn蛋白表达水平增高(P＜0.05).结论 PAE可缓解A53T-α-Syn突变诱导的SH-SY5Y细胞损伤,并通过激活自噬途径清除过表达的α-Syn,其机制可能与上调JNK/Bcl-2介导的自噬途径有关.

关键词：丹皮酚帕金森病 α-突触核蛋白自噬

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不同耐力素质军人进驻高原前后生化指标的变化

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陆军军医大学学报 2023年第7期45卷 715-719页

作者：李松杨丽君倪振洪旷梁杨京张统一伍锦辉黄博邬晓薇杜江李晓波吕雪罗灵孟涛陈增辉胡绪李海明田中原李晓琦胡彦陈林陆军特色医学中心战伤组织修复与康复医学研究室重庆400042 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院重庆400038 陆军特色医学中心康复医学科重庆400042 陆军军医大学(第三军医大学)教务处重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)军事共同与部队管理教研室重庆400038 陆军特色医学中心教务科重庆400042 陆军特色医学中心妇产科重庆400042 陆军特色医学中心政治部重庆400042 陆军第958医院经济与医保管理科重庆400020

目的分析军人耐力素质及生化指标的变化,掌握不同耐力素质军人对高原环境适应情况。方法采取整群抽样法,纳入2018年7-8月前往云南马龙(海拔2100 m)驻训4周的男性青年军人253名,进行耐力素质、生化指标两个方面的调查。耐力素质指标为三... 详细信息

目的分析军人耐力素质及生化指标的变化,掌握不同耐力素质军人对高原环境适应情况。方法采取整群抽样法,纳入2018年7-8月前往云南马龙(海拔2100 m)驻训4周的男性青年军人253名,进行耐力素质、生化指标两个方面的调查。耐力素质指标为三公里武装越野成绩;生化指标为肌酸激酶、红细胞数目、血红蛋白浓度、平均血红蛋白浓度、心肌肌钙蛋白、淋巴细胞数目、嗜碱性细胞数目等7个项目。结果三公里武装越野成绩分布为4组,其中优秀占比12%、良好占比21%、及格占比40%,不及格占比27%。生化指标除嗜碱性粒细胞在4组中没有显著变化外,肌酸激酶、血红蛋白、平均血红蛋白浓度、红细胞数目、心肌肌钙蛋白、淋巴细胞数目等指标在4个组组内进驻高原前后均发生了显著性变化(P<0.01)。其中,心肌肌钙蛋白、淋巴细胞数目仅在进驻高原后发生了4组组间的差异性变化(P<0.01),且与耐力素质高低存在关联性,具有统计学差异(心肌肌钙蛋白rs=-0.409,P<0.01;淋巴细胞数目rs=0.205,P<0.01)。结论不同耐力素质军人在高原环境下的血液生化指标确实存在一定程度差异,提示耐力素质越高的军人进驻高原后发生心肌损伤的风险相对较低,且其免疫能力较强。

关键词：高原耐力素质免疫功能心肌损伤

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模拟高原低压低氧暴露小鼠记忆损伤与脑海马体磷酸化蛋白质组学分析

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陆军军医大学学报 2022年第4期44卷 291-301页

作者：董华平钟志凤李鹏黄沛田怀军谢佳新周思敏陆军军医大学(第三军医大学)高原军事医学系高原作业医学教研室极端环境医学教育部重点实验室全军高原医学重点实验室重庆400038

目的观察低压低氧致小鼠记忆损伤及脑海马体蛋白磷酸化修饰水平的变化,探寻低压低氧引起记忆损伤的关键磷酸化修饰蛋白和通路。方法40只7~8周龄雄性C57BL/6小鼠,体质量(20±2)g,按体质量顺序编号后采用随机数字表法分为常氧组和低... 详细信息

目的观察低压低氧致小鼠记忆损伤及脑海马体蛋白磷酸化修饰水平的变化,探寻低压低氧引起记忆损伤的关键磷酸化修饰蛋白和通路。方法40只7~8周龄雄性C57BL/6小鼠,体质量(20±2)g,按体质量顺序编号后采用随机数字表法分为常氧组和低压低氧组(n=20)。常氧组小鼠在常氧条件下喂养,低压低氧组小鼠在模拟海拔6000 m的低压舱中喂养7 d。低压低氧暴露结束后进行Morris水迷宫实验和脑海马体组织磷酸化蛋白质组学检测。结果Morris水迷宫实验结果显示,与常氧组相比,低压低氧组小鼠逃避潜伏期显著延长[(89.66±3.27)vs(38.61±4.83)s,P<0.01]、游泳距离显著增加[(959.21±99.61)vs(550.39±59.43)cm,P<0.01]。磷酸化蛋白质组学分析共检测到显著差异表达磷酸化肽段136个,其中上调92个,来自79个蛋白;下调44个,来自42个蛋白。GO富集分析结果显示:这些差异磷酸化修饰蛋白主要分布在突触后密集区、非对称性突触和基底细胞膜,主要参与细胞连接组装、突触构成、突触中囊泡介导的运输、树突发育、认知等生物学过程。KEGG通路富集分析显示:差异磷酸化修饰蛋白质主要富集在胰岛素分泌、胰液分泌、谷氨酸能突触、内吞和长时程抑制等信号通路。在蛋白质相互作用层面,构成以AGAP2、SYNGAP1、DRP2、DRP3和PSD93等蛋白为核心的蛋白互作网络。结论低压低氧可致小鼠记忆损伤脑海马体磷酸化修饰蛋白及通路发生改变,AGAP2、SYNGAP1、DRP2、DRP3和PSD93可能是关键蛋白。

关键词：低氧海马记忆磷酸化蛋白质组学

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