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第二军医大学学报 2013年第10期34卷 1070-1077页

作者：郭静勾向博张文丽李琪佳王志强河北联合大学医学实验研究中心唐山063000 河北联合大学基础医学院药理学教研室唐山063000 河北联合大学附属医院骨科唐山063000

目的通过对比分析富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)与血小板裂解液(platelet lysate,PL)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)生长增殖、细胞周期的作用,探讨二者对大鼠BMSCs生长增殖的... 详细信息

目的通过对比分析富血小板血浆(platelet rich plasma,PRP)与血小板裂解液(platelet lysate,PL)对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)生长增殖、细胞周期的作用,探讨二者对大鼠BMSCs生长增殖的影响。方法取20只4周龄SD大鼠,采用全骨髓分离培养法扩增传代BMSCs,并采用流式细胞仪鉴定;另取30只12周龄SD大鼠心内采血,梯度离心法获得PRP,采用3次离心结合反复冻融法制备PL。取生长状态良好的第3代BMSCs进行实验,根据培养基成分不同将实验分为7组,普通完全培养基组(A组)、1%PRP条件培养基组(B组)、1%PL条件培养基组(C组)、5%PRP条件培养基组(D组)、5%PL条件培养基组(E组)、10%PRP条件培养基组(F组)及10%PL条件培养基组(G组)。MTT检测BMSCs增殖情况;免疫荧光检测BMSCs中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况;流式细胞仪检测BMSCs细胞周期的变化;蛋白质印迹检测CyclinD1和p27Kip1蛋白表达。结果培养24、48、72h时,1%、5%、10%PRP与1%、5%、10%PL条件培养基组均可以促进BMSCs的增殖,并具有时间、剂量依赖性(P<0.05);相同浓度的PRP与PL对BMSCs增殖作用的差异均无统计学意义(P>0.05)。免疫荧光检测显示,PRP与PL均可以促进PCNA蛋白表达(P<0.05),且呈剂量依赖性(P<0.01)。流式细胞仪检测显示,不同浓度PRP及PL条件培养基组与普通完全培养基组比较,G0/G1期细胞比例逐渐减少,S、G2/M期细胞比例逐渐增多,增殖指数(PI)升高,差异具有统计学意义(P<0.05),并呈剂量依赖性(P<0.05);然而,相同浓度的PRP及PL对BMSCs细胞周期的影响相似,差异均无统计学意义(P>0.05)。蛋白质印迹检测结果显示,5%PRP与5%PL能促进CyclinD1表达上调和p27Kip1表达下调。结论不同浓度PRP与PL能够通过上调CyclinD1以及抑制p27Kip1蛋白的表达,加快体外培养的大鼠BMSCs的细胞周期进程,促进BMSCs增殖,并呈现显著的时间、剂量依赖性;BMSCs增殖过程中,相同浓度PL与PRP的促增殖效果相同,PL可能代替PRP促进骨缺损修复。

关键词：骨髓间充质干细胞富血小板血浆血小板裂解液组织工程细胞周期细胞增殖

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慢病毒介导HLA-G转基因小鼠的建立

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第三军医大学学报 2012年第14期34卷 1392-1396页

作者：王露露刘勤周晓杨刘昌峨王勇魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293F... 详细信息

目的以慢病毒作为载体建立HLA-G转基因小鼠,为研究HLA-G与移植免疫提供模型动物。方法利用FUW载体,构建含有HLA-G编码序列的慢病毒表达载体FUW-HLA-G。用磷酸钙沉淀法将包装质粒psPAX2、PMD2.G与重组慢病毒载体质粒FUW-HLA-G共转染293FT细胞,包装成慢病毒。通过同步转染含有绿色荧光标记基因的慢病毒质粒FUGW为参照,测定FUW-HLA-G病毒液的滴度。用显微注射法将浓缩后的病毒液注射至FVB/N小鼠1-细胞期胚胎透明带下,建立HLA-G转基因小鼠。PCR鉴定转基因小鼠的基因整合,用RT-PCR检测转基因在转录水平的表达,用Western blot检测HLA-G蛋白的表达。结果载体BamHⅠ、EcoRⅠ双酶切结果和测序结果显示重组的慢病毒质粒与所设计的序列一致。浓缩和纯化后的病毒液滴度达到109TU/ml以上,符合用慢病毒制备转基因小鼠的要求。PCR筛选出阳性鼠6只,RT-PCR与Western blot检测结果表明HLA-G基因在F0和F1代转基因小鼠中均有表达。结论通过慢病毒介导的基因转移,成功建立了表达人HLA-G蛋白的转基因小鼠,为研究HLA-G的功能及其在器官或组织移植中的效应提供了动物模型。

关键词： HLA-G 慢病毒转基因小鼠

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GSK3β促进TGF-β1诱导的肾小管上皮HK-2细胞纤维化

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第三军医大学学报 2012年第19期34卷 1921-1924页

作者：赵凯陈姗龚如军黎松何凤田第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部病原生物学教研室重庆400038 Division of Kidney Disease and Hypertension Brown University School of MedicineProvidenceRhode Island 02903USA School of Pharmacy University of PittsburghPittsburghPA15261USA

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能... 详细信息

目的阐明GSK3β对于肾脏小管间质纤维化的作用。方法以TGF-β1诱导的体外肾小管间质纤维化模型为研究对象,以GSK3β特异抑制剂LiCl处理细胞和不同GSK3β表达质粒(野生型GSK3β表达质粒GSK3β-WT;第9位点上丝氨酸突变为丙氨酸,由此不能再被磷酸化失活而具有固有活性的GSK3β突变质粒GSK3β-S9A;第85、86位点上赖氨酸突变为丙氨酸、失去激酶活性的GSK3β突变质粒GSK3β-KD)转染细胞,观察肾脏纤维化的标志性分子纤维连接素蛋白(fibronectin,FN)表达水平的改变,以及对TGF-β/Smad信号通路的作用。结果 LiCl增加HK-2细胞GSK3β的磷酸化,抑制GSK3β的活性,同时降低了细胞基础水平和TGF-β1诱导的FN表达。过表达的GSK3β-WT增强TGF-β1诱导的FN表达,而这种效应在GSK3β-S9A转染细胞更为显著。过表达GSK3β-KD抑制TGF-β1诱导的FN表达。分析对TGF-β/Smad信号通路的作用,LiCl可以抑制TGF-β1诱导的Smad3磷酸化,而对Smad2磷酸化水平无影响。同时,LiCl也不改变Smad3的总蛋白表达。结论 GSK3β通过TGF-β1/Smad3信号通路促HK-2细胞纤维化,抑制GSK3β可以抗纤维化。

关键词：肾脏纤维化糖原合成酶激酶3 转化生长因子β1 Smad3蛋白质

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登革1型病毒GZ2002株全基因组测序与分析

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中国现代医学杂志 2012年第14期22卷 25-33页

作者：方昕胡珍张俊磊朱军民陈炜尚伟龙袁文常程航黎庶胡晓梅饶贤才第三军医大学微生物学教研室(重庆市微生物工程实验室) 重庆400038

目的对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据。方法利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取R NA。根据5株登革病毒1型标准株A... 详细信息

目的对2002年分离自广州登革热患者的1型登革病毒GZ2002株进行全基因组序列测定及分析,为探讨其来源和基因组特征提供依据。方法利用C6/36细胞增殖GZ2002株,出现典型细胞病变后收集感染细胞及病毒液提取R NA。根据5株登革病毒1型标准株AY145123、FJ176780、FJ176779、DVU88536、EF025110全序列设计6对相互覆盖的引物。采用R T-PCR法扩增覆盖GZ2002株基因组全长的6个cDNA片段,并将其分别克隆到pMD-18T载体上,通过序列测定和重叠序列拼接获得全基因组序列。结果 GZ2002株基因组全长10 735 nt,单一阅读框长10 176 nt,推测编码3 392个氨基酸,5'及3'-UTR分别为94 nt和462 nt,无显著的密码子偏嗜性。GenBank登录号:JN205310。系统进化分析显示GZ2002株属于DENV-1型基因IV型。比较不同致病性的DENV-1型毒株发现,随DENV毒株致病力的增强,编码区氨基酸突变位点明显增多。GZ2002株、泰国16007株、柬埔寨株及印度尼西亚98901530株的5'-UTR二级结构高度保守,3'-UTR分析显示强毒力泰国16007株与柬埔寨株均存在高突变区。结论 GZ2002株属于DENV-1型基因IV型,可能与1998年印度尼西亚DENV-1流行株相关,编码区株特有氨基酸变异位点及3'-UTR高突变区的生物学意义值得进一步探讨。

关键词：登革病毒1型全基因组测序序列分析

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HO-1在食管鳞癌转移中的作用

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现代肿瘤医学 2013年第11期21卷 2451-2454页

作者：杨蕾绕强智赵国宏薛琳康建琴陈景荷张德新第四军医大学西京消化病医院肿瘤生物学国家重点实验室陕西西安710032 宝鸡市第二人民医院陕西宝鸡721000 沅陵县中医院湖南沅陵419600

目的:研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在食管鳞癌侵袭转移中的意义。方法:采用免疫组化方法检测HO-1在114例食管鳞癌组织中的表达水平;细胞划痕实验验证高低转移食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的差异;Western blot及荧光定量P... 详细信息

目的:研究血红素氧合酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)在食管鳞癌侵袭转移中的意义。方法:采用免疫组化方法检测HO-1在114例食管鳞癌组织中的表达水平;细胞划痕实验验证高低转移食管鳞癌细胞体外侵袭转移能力的差异;Western blot及荧光定量PCR(qRT-PCR)检测HO-1在两株食管鳞癌高低转移细胞系中的表达差异。结果:免疫组化结果提示HO-1在食管癌组织细胞质和细胞膜呈高表达,其阳性表达率与肿瘤分化程度(P=0.039)、浸润程度T分期(P=0.020)、淋巴结转移(P=0.017)、淋巴管浸润(P=0.037)、远处转移(P=0.038)有显著相关性;细胞划痕实验验证了食管鳞癌高低转移细胞侵袭转移能力的差异,qRT-PCR及Western blot结果提示HO-1 mRNA及蛋白在两株高转移食管鳞癌细胞株表达水平均显著高于对应的低转移细胞株。结论:HO-1在食管癌组织及高转移性细胞系中呈高表达,提示HO-1和食管鳞癌的侵袭转移相关。

关键词：食管鳞癌 HO-1 淋巴结转移

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鸽疱疹病毒于我国的首次分离与鉴定

鸽疱疹病毒于我国的首次分离与鉴定

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中国畜牧兽医学会2014年学术年会

作者：章丽娇李占鸿李爽张清水孙海港白如念杨秀环胡薛英苏敬良中国农业大学动物医学院农业部动物流行病学与人畜共患病重点实验室北京市畜牧兽医总站华中农业大学动物医学院

引言鸽1型疱疹病毒于1967年从感染鸽子体内首次分离到,随后在世界各地广泛流行。感染鸽主要表现为打喷嚏、结膜炎或咽喉有溃疡和伪膜等,往往因并发鸽毛滴虫或其他细菌感染使临床症状加剧并出现死亡,耐过鸽群则成为病毒携带者并定期排毒... 详细信息

引言鸽1型疱疹病毒于1967年从感染鸽子体内首次分离到,随后在世界各地广泛流行。感染鸽主要表现为打喷嚏、结膜炎或咽喉有溃疡和伪膜等,往往因并发鸽毛滴虫或其他细菌感染使临床症状加剧并出现死亡,耐过鸽群则成为病毒携带者并定期排毒。作为养禽业的重要组成部分之一,鸽在我国饲养数量庞大,地区分布广泛,但是对于其疾病流行状况关注较少。2012年7月,我们首次从北京地区某肉鸽

关键词：鸡胚成纤维细胞疱疹病毒马立克病毒分离与鉴定

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γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体在结核性胸膜炎患者中的表达

γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体在结核性胸膜炎患者中的表达

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第七届粤桂琼检验医学新进展学术大会

作者：陈松林林英辉汤贤英罗军敏姚新生广西中医药大学第一附属医院遵义医学院免疫学教研室/贵州省免疫学研究生教育创新基地

目的:观察γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体在结核性胸膜炎患者外周血和胸水中的表达,探讨γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体与结核性胸膜炎的关系.方法:采集30例健康正常者的外周血以及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,采用流式细胞术检...

目的:观察γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体在结核性胸膜炎患者外周血和胸水中的表达,探讨γ-干扰素诱导蛋白-10及其受体与结核性胸膜炎的关系.方法:采集30例健康正常者的外周血以及30例结核性胸膜炎患者的外周血和胸水,采用流式细胞术检测结核性胸膜炎患者外周血单个核细胞及胸水细胞中的CXCR3的表达:运用ELISA法检测结核性胸膜炎患者血清及胸水中IP-10的浓度.

关键词：

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间充质干细胞在防治同种异体组织器官移植免疫耐受方面的作用研究

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国际检验医学杂志 2013年第7期34卷 850-852页

作者：杨铮岳波杨阳李臻第四军医大学口腔医学系陕西西安710032 西京医院耳鼻咽喉头颈外科陕西西安710032 西京医院全军整形外科研究所陕西西安710032 中国人民解放军第二五二医院烧伤整形科北京100051 第四军医大学基础部组织胚胎学教研室陕西西安710032

间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,可被诱导成脂肪、骨、软骨、肌肉、神经和内皮细胞等多种组织细胞,已成为再生医学、组织工程和人工器官研究的重要种子细胞。近年研究发现,MSCs具有低免疫原性和免... 详细信息

间充质干细胞（MSCs）是一种具有自我更新和多向分化潜能的成体干细胞,可被诱导成脂肪、骨、软骨、肌肉、神经和内皮细胞等多种组织细胞,已成为再生医学、组织工程和人工器官研究的重要种子细胞。近年研究发现,MSCs具有低免疫原性和免疫调节的特性，能在体外大量扩增，在组织器官移植可抑制树突状细胞（Dc）成熟，避免和减轻宿主免疫应答，诱导特异性免疫耐受的形成，而且还能通过分泌多种细胞因子，改善造血微环境，促进移植后造血功能的重建具有一定的作用。

关键词：间充质干细胞移植,同种器官移植免疫耐受

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左旋棉酚通过细胞自噬下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子的表达

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第三军医大学学报 2012年第16期34卷 1613-1616页

作者：丁雯倪振洪程攀科王滨黄刚何凤田连继勤徐兴然西南大学药学院重庆400716 第三军医大学基础医学部生物化学与分子生物学教研室重庆400038

目的探讨左旋棉酚[(-)-gossypol]下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)的可能机制。方法采用CCK8、台盼蓝活细胞染色检测左旋棉酚在体外对Namalwa细胞的生长抑制作用,吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察... 详细信息

目的探讨左旋棉酚[(-)-gossypol]下调Namalwa细胞中B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)的可能机制。方法采用CCK8、台盼蓝活细胞染色检测左旋棉酚在体外对Namalwa细胞的生长抑制作用,吖啶橙(acridine orange,AO)染色观察经左旋棉酚处理后细胞自噬的形态特征,Western blot检测细胞中BLyS和自噬蛋白微管蛋白轻链3(LC3)的表达情况。结果左旋棉酚对Namalwa细胞有明显的增殖抑制作用,并且具有时间和剂量依赖性;AO染色后细胞内可观察到明显的细胞自噬小体;Western blot结果显示,左旋棉酚可下调Namalwa细胞中BLyS的表达,并上调LC3Ⅱ蛋白的表达;自噬特异性抑制剂3-methyladenine(3-MA)可显著抑制左旋棉酚对BLyS的下调与LC3Ⅱ的上调作用。结论左旋棉酚可能通过诱导细胞自噬来下调B淋巴细胞中BLyS的表达,从而抑制细胞生长。

关键词： B淋巴细胞左旋棉酚自噬 B淋巴细胞刺激因子

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乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭的疾病特异性标志物的鉴定及其对死...

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中华医学会第十三次全国感染病学术会议

作者：李君辛娇娇丁文超周倩蒋龙燕石东燕徐小薇曹红翠陈新李兰娟浙江大学医学院附属第一医院传染病诊治协同创新中心传染病诊治国家重点实验室

建立预测乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)的严重程度和死亡率的疾病特异性生物标忐物是确定早期肝移植患者的关键。本研究通过已知的人类274个细胞因子抗体芯片初步筛查HBVACLF血清学标记物,并经304例HBV-ACLF患者血清ELISA验证... 详细信息

建立预测乙型肝炎相关的慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)的严重程度和死亡率的疾病特异性生物标忐物是确定早期肝移植患者的关键。本研究通过已知的人类274个细胞因子抗体芯片初步筛查HBVACLF血清学标记物,并经304例HBV-ACLF患者血清ELISA验证,发现HBV-ACLF与慢性乙型肝炎(CHB)的血清有15个细胞因子存在显著性差异表达。生物信息学分析表明,这些因子与HBV-ACLF时肝细

关键词：慢加急性肝衰竭乙型肝炎异性标志物死亡率预测价值

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