项目所属科学技术领域:生物学及基础医学。主要研究内容:采用链脲佐菌素(Streptozocin,STZ)药物诱导糖尿病动物模型。采用Ⅳ型胶原快速粘附法分离富集表皮干细胞;K19和?1整合素免疫细胞化学染色进行鉴定。观察不同糖浓度对正常大鼠表皮干细胞β-catenin及相关信号分子的影响。取正常大鼠表皮干细胞分别置于不同葡萄糖浓度的K-SFM培养基中培养,采用免疫细胞化学方法检测表皮干细胞中Wnt1、β-catenin 、CyclinD1的表达。上调β-catenin对表皮干细胞增殖及分化的影响研究。体外分离培养糖尿病SD大鼠表皮干细胞(ESCs),采用脂质体介导法将pcDNA3.1myc-β-catenin质粒转入ESCs。同时设立脂质体对照组(转脂质体) 和空白对照组(无特殊处理),48h后,检测转染组与对照组表皮干细胞中β-catenin、Wnt1、CyclinD1的表达情况。建立糖尿病大鼠创面模型,研究上调β-catenin对表皮干细胞在糖尿病鼠创面修复中的影响。建立糖尿病SD大鼠创面模型,随机分为4组:A组(创面移植羊膜负载转染的表皮干细胞组),B组(创面移植羊膜负载未转染表皮干细胞组),C组(羊膜组)和D组(对照组,不加任何干预)。观察创面愈合情况并计算创面愈合率,HE及免疫组织化学SP法检测创面愈合组织中增殖细胞核抗原(PCNA)的表达。比较各组β-catenin 、CyclinD1、K19和?1整合素的表达差异,评价β-catenin及相关信号分子对创面修复的影响。科学价值:延迟的再上皮化和持续性上皮化缺失是糖尿病难愈性创面的典型特点。该项目综合采用表皮干细胞体外培养模型和糖尿病创面模型、基因转染技术,系统观察糖尿病大鼠和正常大鼠皮肤创面表皮干细胞β-catenin及各相关信号分子表达差异及其相互关系,研究β-catenin影响糖尿病皮肤表皮干细胞增殖分化作用及其分子机制,为治疗糖尿病皮肤难愈创面提供新思路和理论依据。被同行引用评价情况:据不完全统计,该项目研究被国内外同行在正式刊物包括期刊、硕博士学位论文共引用14次。发表在Mol Med Rep的《Expression of β-catenin and cyclin D1 in epidermal stem cells of diabetic rats》被BioMed research international(影响因子:2.88)期刊引用。其他论文分别被南华大学、第三军医大学、兰州大学、广州中医药大学、河南科技大学等五所高校优秀硕博学位论文引用,同时也被《第三军医大学学报》等七种期刊引用。
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