检索结果-内蒙古大学图书馆

中国人兽共患病学报 2016年第9期32卷 784-788页

作者：王慧李军郭宝平温浩张文宝新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地乌鲁木齐830054

目的通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO2条件下... 详细信息

目的通过体外培养原头蚴发育成微囊,经腹腔注射建立稳定的细粒棘球蚴和多房棘球蚴继发感染小鼠动物模型。方法无菌条件下采集羊源细粒棘球绦虫原头蚴和鼠源多房棘球绦虫原头蚴,经胃蛋白酶消化后检测虫体活力并计数,于37℃、5%CO2条件下进行体外培养至发育成微囊,以每鼠50个微囊的剂量经腹腔注射的途径分别接种BALB/c小鼠。接种6个月后,通过腹部解剖大体观察和病理检测分析各组小鼠的感染情况及包虫囊的生长情况。结果原头蚴在体外培养60d时发育成微囊,显微镜下观察Eg具有明显的透明角质层结构,而Em微囊角质层较薄。小鼠细粒棘球蚴和多房棘球蚴的感染率均为100%,Eg包虫囊为游离单囊,成囊率达70%,囊内无原头蚴;Em包虫囊为类似肿瘤的团块状组织,病灶内有生发囊及原头蚴。结论采用微囊法可建立稳定的棘球蚴继发感染小鼠动物模型,为疫苗研制、药物筛选和疗效判定提供研究动物模型。

关键词：细粒棘球蚴多房棘球蚴原头蚴微囊小鼠感染动物模型

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新疆维吾尔自治区部分包虫病流行地区患者药物治疗现状调查

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中华流行病学杂志 2015年第9期36卷 1002-1004页

作者：李海涛宋涛邵英梅张文宝温浩新疆医科大学第一附属医院消化血管外科中心肝胆包虫外科乌鲁木齐830011 新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室超声科

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以... 详细信息

目的调查新疆维吾尔自治区（新疆）部分包虫病流行地区患者药物治疗情况。方法2013年4—6月通过问卷形式对新疆4个包虫病医疗点（新疆医科大学第一附属医院、布克塞尔蒙古自治县、额敏县和裕民县）进行包虫病规范化药物治疗现况调查，以WHO包虫病药物治疗建议作为规范化治疗标准。结果共调查329例包虫病患者，其中行抗包虫药物治疗250例，规范化药物治疗占49．2％（162／329）；未规范化药物治疗病例50．8％（167／329）。结论新疆部分包虫病地区患者临床药物治疗亟待规范，其综合陛防治应包括规范化诊断、手术、药物治疗以及随访的个体治疗。

关键词：包虫病药物治疗现况调查

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细粒棘球蚴囊液对HepG2肝癌细胞系细胞周期的影响

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中国病原生物学杂志 2012年第2期7卷 124-128页

作者：李朝旺赵晋明张传山吕国栋王俊华李静范金亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的... 详细信息

目的探讨细粒棘球蚴(Eg)囊液(HCF)在感染急性期对宿主肝细胞MAPK信号通路及细胞周期的影响。方法常规方法培养HepG2细胞,以HCF为刺激物,于不同时间点用Western blot检测p-ERK、增殖细胞核抗原PC-NA、细胞周期蛋白cyclin-D1、A、B1和E的表达水平,并与无FCS组比较。结果 Western blot检测显示,15%、30%HCF组p-ERK分别在换液培养3h和30min高表达(P<0.05),PCNA分别在3h和12h高表达(P<0.05),cyclin-D1在3h高表达(P<0.05),cyclin-A分别在3h和12h高表达(P<0.05),15%HCF组cyclin-E在3h高表达(P<0.05),15%、30%HCF组cyclin-B1在各时间点表达量微弱(P<0.05)。结论 HCF对体外培养的HepG2细胞无毒害,且对其增殖有一定的促进作用。

关键词：细粒棘球蚴囊液肝细胞细胞周期细胞增殖

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细粒棘球蚴MAPKK样激酶及其下游成员ERK和P38酵母双杂交载体的构建与自激活鉴定

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中国病原生物学杂志 2014年第3期9卷 207-210,215页

作者：张传山杨乐王丽敏李亮王俊华吕国栋林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol... 详细信息

目的构建细粒棘球蚴(Echinococcus granulosus,Eg)丝裂原活化蛋白激酶激酶(EgMKK1)及其下游成员ERK、P38酵母双杂交载体,并检测融合蛋白对酵母菌生长的毒性作用及自激活活性. 方法采集绵羊肝脏感染的Eg原头蚴,生理盐水冲洗5次,TRIzol法提取原头蚴总RNA,取1μg RNA反转录cDNA.以cDNA为模板,PCR分别扩增EgMKK1、EgERK和EgP38基因片段,分别经限制性内切酶EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和BamH Ⅰ、EcoR Ⅰ和SalⅠ双酶切,酶切片段连接至酵母双杂交载体pGADT7或pGBKT7,经酶切及测序鉴定正确后,应用PEG/LiAc法将重组载体转化入感受态酵母菌株Y2HGold,利用固体培养基筛选,检测融合蛋白对酵母菌株生长的毒性作用及自激活活性.结果经PCR扩增,分别获得目的基因EgMKK1、EgERK和EgP38.构建的重组酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK及pGBKT7-EgP38经双酶切,分别得到1 017 bp、1 086 bp和1 107 bp目的基因片段,大小与预测值相符.重组酵母双杂交载体转化Y2HGold酵母菌在SD/-Trp平板上形成直径为1.5～2.0 mm的菌落,与原始载体pGADT7或pGBKT7转化酵母菌菌落大小一致;重组酵母双杂交载体转化酵母菌在SD/-Trp和SD/-Leu平板均有直径约2 mm白色菌落生长,而SDO/X/A和DDO/X/A固体培养基平板上无蓝色菌落生长. 结论成功构建了酵母双杂交载体pGADT7-EgMKK1、pGBKT7-EgERK和pGBKT7-EgP38,其表达蛋白对酵母菌Y2 HGold无毒性和自激活作用,为进一步研究EgMKK1与其下游成员EgERK、EgP38之间的相互作用奠定了基础.

关键词：细粒棘球绦虫 MAPK 酵母双杂交毒性自激活

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细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123的克隆、表达及鉴定

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中国病原生物学杂志 2017年第1期12卷 38-41页

作者：王慧齐文静何黎郭宝平张文宝李军新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转... 详细信息

目的构建细粒棘球绦虫成虫相关基因EgM123基因原核表达载体,诱导表达并鉴定EgM123蛋白。方法提取pET41b-EgM123重组质粒,以此为模板PCR扩增EgM123基因片段,克隆至原核表达载体pET28a中,经限制性内切酶双酶切和测序鉴定。将重组菌质粒转化大肠埃希菌BL21,经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导目的基因表达,采用SDS-PAGE对表达蛋白进行分析,Western blot鉴定其免疫反应性。结果 PCR扩增EgM123基因片段长度为594bp,经酶切分析和测序鉴定证明pET28a-EgM123原核表达载体构建正确。重组质粒转化BL21在37℃条件下,经IPTG(终浓度为0.4mmol/L)诱导3h,获得分子质量单位约为29ku的EgM123蛋白,与理论值相符。该蛋白能被EgM123-GST免疫兔抗血清识别。结论成功构建了pET28a-EgM123原核表达载体,表达蛋白具有免疫反应性,为研制包虫病疫苗奠定了基础。

关键词：包虫病细粒棘球绦虫 EgM123 蛋白表达疫苗

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Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原基因在泡球蚴感染中期小鼠肝脏中的表达及意义

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中国病原生物学杂志 2012年第9期7卷 653-656页

作者：王俊华魏绪法张传山吕国栋姜涛卢晓梅温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬... 详细信息

目的观察泡球蚴感染中期BALB/c小鼠所致肝纤维化时Ⅰ型胶原(Col1a1)、Ⅲ型胶原(Col3a1)、Ⅳ型胶原(Col4a1)基因的表达及意义。方法将雌性BALB/c小鼠随机分为实验组(8只)和对照组(5只)。实验组小鼠开腹,肉眼直视下左肝叶内注射泡球蚴混悬液,建立疾病动物模型;对照组以同样方法注射等量生理盐水。于感染中期第12周,颈椎脱臼处死小鼠,实验组取病变组织和病变邻近肝组织,对照组取注射部位所在肝组织以及临近肝组织,用4%甲醛固定,常规石蜡包埋,HE、Masson染色后观察形态学改变和肝纤维化程度。取病变临近肝组织,提取总RNA,反转录合成cDNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Col1a1、Col3a1、Col4a1基因的表达,计量结果用相对单位(AU)表示。结果泡球蚴感染组和对照组Collal基因表达量分别为(2.155±0.809)AU和(1.000±0.221)AU,差异有统计学意义(t=3.427,P<0.05);Col3a1基因表达量分别为(18.641±10.244)AU和(1.000±0.412)AU,差异有统计学意义(t=10.324,P<0.01);Col4a1基因表达量分别为(0.894±0.495)AU和(1.000±0.381)AU,差异无统计学意义(t=1.932,P>0.05)。Masson染色检查泡球蚴感染组肝纤维化评分为2.72±1.04,对照组为1.0,差异有统计学意义(t=4.105,P<0.05)。结论在泡球蚴感染小鼠中期,引起肝纤维化的胶原主要为Ⅲ型和Ⅰ型。

关键词：胶原泡球蚴肝纤维化实时荧光定量PCR

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细粒棘球绦虫DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2基因的克隆及序列分析

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中国病原生物学杂志 2012年第7期7卷 510-512,526页

作者：吕国栋叶建蔚张传山王俊华李亮温浩林仁勇新疆医科大学第一附属医院新疆重大疾病医学重点实验室-省部共建国家重点实验室培育基地及新疆包虫病基础医学重点实验室新疆乌鲁木齐830054

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息... 详细信息

目的从新疆株细粒棘球绦虫原头蚴中克隆DNA聚合酶δ小亚基EgPolD2,进行序列测定和生物信息学分析。方法设计EgPolD2特异性引物,用RT-PCR方法从细粒棘球绦虫原头蚴cDNA中克隆EgPolD2基因,然后将其克隆至pMD18-T载体,测序并进行生物信息学分析,半定量反转录PCR分析其在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中的表达情况。结果 EgPolD2基因开放阅读框为1 218bp,编码405个氨基酸,等电点为4.74。NCBI保守功能区分析软件预测EgPolD2蛋白第113～378个氨基酸为MPP_PolD2_C结构域。登陆GenBank进行Blast比对,EgPolD2与曼氏血吸虫SmPolD2基因同源性为32.1%,与线虫和人等其他物种PolD2基因同源性在18.3%～22.8%之间。进化树分析表明EgPolD2与SmPolD2相聚集,与其他物种同源性较低。半定量RT-PCR显示,EgPolD2在细粒棘球绦虫原头蚴和囊泡中均有表达,且表达水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论本实验成功克隆出细粒棘球绦虫EgPolD2新基因,为进一步研究抗细粒棘球绦虫药物靶标奠定了基础。

关键词：细粒棘球绦虫 EgPolD2 序列分析

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细粒棘球蚴egG1Y162疫苗对小鼠免疫应答的研究

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中国人兽共患病学报 2013年第3期29卷 226-231页

作者：刘晓霞马海梅朱明张丽娜曹春宝周晓涛丁剑冰新疆医科大学基础医学院乌鲁木齐830011 新疆医科大学第一附属医院省部共建国家重点实验室培育基地新疆重大疾病医学重点实验室乌鲁木齐830011

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用... 详细信息

目的观察细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫小鼠后机体的免疫应答状况。方法实验组、GST对照组、佐剂组和正常组小鼠分别注射egG1Y162疫苗、谷胱甘肽巯基转移酶(GSTs)、佐剂(FCA)和生理盐水(NS),在免疫第0、2、4、6、8和10周,收集各组血清用酶联免疫吸附法(ELISA法)检测抗体滴度,并检测各组血清抗体IgG的动态变化。第10周用四甲基偶氮唑蓝实验(MTT法)检测免疫小鼠脾淋巴细胞体外刺激后的增殖反应,用AnnexinV-FITC和碘化丙啶(PI)双染色法检测脾细胞凋亡率。结果 egG1Y162疫苗免疫组小鼠在第2周免疫后检测到抗体,在免疫第10周,抗体滴度可达到1∶25 600。血清抗体IgG在免疫第2～10周不断升高,并在免疫第10周达到最高水平。MTT法显示egG1Y162疫苗免疫组小鼠脾淋巴细胞在体外能被egG1Y162疫苗特异性刺激增生。疫苗刺激后疫苗组增殖水平显著高于对照组、佐剂组和正常组(P<0.05)。AnnexinV-FITC和PI双染色法结果显示实验组小鼠脾细胞原液和ConA刺激细胞凋亡发生率均显著低于对照组(P<0.01),每组ConA刺激脾细胞凋亡发生率显著高于相应的原液培养(P<0.01)。结论细粒棘球绦虫egG1Y162疫苗可诱导小鼠产生高效价抗体并可刺激脾淋巴细胞增殖活化、抑制脾细胞凋亡,特异性抗体反应和脾淋巴细胞增殖活化促进机体产生体液免疫反应和细胞免疫反应,共同协调诱导机体产生免疫应答反应。

关键词：细粒棘球蚴egG1Y162疫苗免疫应答抗体滴度 IgG 细胞增殖细胞凋亡

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细粒棘球蚴EgG1Y162基因进化分析、表达及鉴定

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中国生物工程杂志 2016年第4期36卷 78-87页

作者：祖力皮也·吐尔逊曹春宝温浩丁剑冰德力夏提·依米提新蠼重大疾病医学实验室一省部共建国家重点实验室培育基地新疆医科大学第一附属医院乌鲁木齐830054 新疆医科大学科研处乌鲁木齐830011

目的：克隆和鉴定细粒棘球蚴的Eg G1Y162基因,分析其蛋白表达和适应性进化并鉴定抗原性。方法：根据em Y162基因序列设计引物,分别从细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个发育阶段,提取基因组DNA和总RNA,mRNA反转录为c DNA,... 详细信息

目的：克隆和鉴定细粒棘球蚴的Eg G1Y162基因,分析其蛋白表达和适应性进化并鉴定抗原性。方法：根据em Y162基因序列设计引物,分别从细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个发育阶段,提取基因组DNA和总RNA,mRNA反转录为c DNA,利用PCR的方法以基因组DNA和c DNA为模板扩增Eg G1Y162基因;构建PUCm-T/Eg G1Y162重组质粒,经PCR、酶切及测序鉴定后,测序确定其正确性。利用DNAman软件与MEGA4软件对Eg G1Y162基因特点进行分析并构建Eg G1Y162核酸序列的进化树进一步探讨其同源性。荧光定量PCR检测Eg G1Y162基因在细粒棘球绦虫原头蚴、囊壁生发层、成虫和虫卵四个不同发育阶段的表达情况。利用定向克隆技术将Eg G1Y162抗原基因片段克隆至原核表达质粒PET-41a上,通过酶切分析和PCR鉴定筛选出阳性克隆,测序确定序列。IPTG初步诱导和表达Eg G1Y162-GST重组蛋白,通过SDS-PAGE电泳和Western blot试验分析鉴定。结果：从细粒棘球绦虫的两个不同发育阶段均克隆出Eg G1Y162基因,从总DNA克隆得到片段长度1 680bp,从c DNA克隆得到片段长度459bp。相似性比较表明,Eg G1Y162基因序列与em Y162相似性为91%,而Eg G1Y162基因c DNA与em Y162相似性为95%。进一步分析显示,Eg G1Y162基因序列由3个外显子和2个内含子组成,外显子区域分别为1～70,1 064～1 380和1 577～1 648。位于疏水端1～16位氨基酸构成Eg G1Y162信号肽序列,35～115位氨基酸形成一个大的纤黏连蛋白剪接体FN3,133～152位氨基酸构成羧基端跨膜区域。测序结果显示Eg G1Y162抗原基因长度为360bp,编码120个氨基酸。通过荧光定量PCR检测,发现Eg G1Y162在成虫、生发层阶段、原头蚴和虫卵阶段均有不同程度的表达。但是Eg G1Y162在成虫中的表达量最多,相对值为19.526,差异有统计学意义（P〈0.01）,其次生发层阶段,为5.122,再次在原头蚴阶段,相对值为5.083,而在虫卵阶段最少,为1.6588。构建的PET-41a/Eg G1Y162原核表达质粒,经IPTG诱导后,SDS-PAGE检测表明Eg G1Y162-GST重组蛋白得到成功表达,在相对分子量为44k Da处有表达条带。Western blot分析显示阳性印迹条带,分子量为44k Da,Eg G1Y162重组蛋白能与细粒棘球蚴感染40天后犬的血清发生反应;与包虫病患者血清也有阳性反应。结论：成功克隆Eg G1Y162抗原基因,序列对比分析显示Eg G1Y162的c DNA与em Y162的c DNA具有很高的相似性,基因的差异性主要存在于内含子区域,Eg G1Y162抗原基因是一种新的基因。Eg G1Y162在成虫中的表达量最多。成功诱导表达出Eg G1Y162重组蛋白,并且Eg G1Y162重组蛋白具有很好的抗原性。

关键词： EgG1Y162 抗原进化树荧光定量PCR 原核表达

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调节性B细胞在感染免疫中的作用研究进展

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中国病原生物学杂志 2014年第4期9卷 381-383页

作者：刘学磊刘玉梅丁剑冰马秀敏新疆医科大学第一附属医院、新疆重大疾病医学重点实验室一省部共建国家重点实验室培育基地新疆乌鲁木齐830011 新疆医科大学基础医学院

B细胞主要通过呈递抗原和产生抗体发挥免疫调节作用。近年来研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。Bregs可通过产生白细胞介素10(IL-10)和(或)转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性... 详细信息

B细胞主要通过呈递抗原和产生抗体发挥免疫调节作用。近年来研究发现部分B细胞具有调节功能,这部分B细胞被命名为调节性B细胞(regulatory B cells,Bregs)。Bregs可通过产生白细胞介素10(IL-10)和(或)转化生长因子β1(TGF-β1)等抑制性细胞因子介导免疫耐受,抑制过度炎症反应,加快炎症的恢复。相关研究表明Bregs在寄生虫、细菌、病毒感染中发挥重要作用。本文综述了Bregs的生物学特征、功能、微信号调节及其在感染性疾病中所发挥的作用机制及相关研究进展。

关键词：调节性B细胞感染免疫 IL-10 TGF-β 综述

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