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中国免疫学会第十届全国免疫学学术大会

作者：魏超重庆市第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心 400038

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型... 详细信息

佐剂的发展已经有了近80年的时间，但是在目前上市的疫苗佐剂中，其中以铝盐佐剂为代表的载药系统最为常见，但是该类佐剂并不能有效的针对胞内寄生的细菌病毒产生强有力的细胞免疫应答。目前佐剂发展一种重要方向是实现载药系统的新型化，能够有效的被DC细胞吞噬并且增强抗原呈递过程，有文献报道，金黄色葡萄球菌既可以胞外寄生，并且能够胞内寄生，阻碍巨噬细胞的自噬作用，本论文以金黄色葡萄球菌的全身感染模型为实验模型，在自行研制新型佐剂基础上，结合MPLA免疫增强剂，通过包裹等多种形式来探索最有效增强免疫应答的结合方式，同时通过血清学以及细胞学等实验，我们得到如下结果：在结合免疫增强剂MPLA的基础上，采用包裹抗原成分能够更有效的引起机体产生功能性抗体，同时能够诱导CD4+T细胞向Th1/Th17方向分化，并且有效的提高细菌清除率与动物生存率，达到有效清除金黄色葡萄球菌感染的目的。

关键词：金黄色葡萄球菌免疫刺激剂乳剂DC细胞

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长非编码RNA在基因调控和肿瘤形成中的作用

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现代生物医学进展 2015年第27期15卷 5392-5396页

作者：李笋左钱飞李俊林曹力尹肖斌解放军第234医院药械科辽宁122000 第三军医大学药学院微生物与生化药学教研室国家免疫制品工程技术研究中心重庆400038 第三军医大学药学系十八营重庆400038

哺乳动物中,只有小部分基因转录成为编码蛋白质的RNA,大量的基因则转录为不能编码蛋白质的RNA,即nc RNA。长非编码RNA(lnc RNAs)是分子长度在200-100000 nt之间的一类nc RNA。lnc RNAs的数量超过蛋白质编码基因的数量。目前,对长非编码R... 详细信息

哺乳动物中,只有小部分基因转录成为编码蛋白质的RNA,大量的基因则转录为不能编码蛋白质的RNA,即nc RNA。长非编码RNA(lnc RNAs)是分子长度在200-100000 nt之间的一类nc RNA。lnc RNAs的数量超过蛋白质编码基因的数量。目前,对长非编码RNA(lnc RNAs)的生物学特性,转录调控以及其在肿瘤发生发展中的作用机制的研究任然是RNA研究的热点。lnc RNAs通过控制染色质重塑,转录调控和录转录后调控而在基因的转录调节中发挥了重要作用。lnc RNAs与多种肿瘤相关,并且在抑制因素和促进因素中都具有重要的作用。众多文献报道的结果表明lnc RNAs参与调控基因表达,在正常细胞与肿瘤细胞的转换中起到至关重要的作用。

关键词：长非编码RNA 基因调控肿瘤

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肿瘤相关中性粒细胞在胃癌中的分布、表型及其免疫抑制功能研究

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第三军医大学学报 2014年第6期36卷 587-591页

作者：王婷婷庄园陈娜彭六生程平李文华赵永亮余佩武邹全明第三军医大学:药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038 西南医院普通外科重庆400038

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织... 详细信息

目的分析胃癌患者外周血中及不同类型胃组织中的中性粒细胞的分布情况,并研究其表型,探讨胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞对CD3+T细胞功能的影响。方法采用流式细胞术检测并分析42例胃癌患者的胃癌组织、癌旁组织、正常胃组织及外周血中CD66b+中性粒细胞的比例及表型,同时采用免疫组织化学染色技术针对中性粒细胞表面标志CD15原位分析不同类型胃组织石蜡切片中中性粒细胞的浸润情况,最后用胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞与CD3+T细胞共培养,检测其对T细胞增殖能力的影响。结果胃癌患者外周血中性粒细胞比例明显高于健康成人(P<0.01),胃癌组织中的中性粒细胞的频率也高于癌旁组织(P<0.05)和正常胃组织(P<0.05);在胃癌患者外周血及不同类型胃组织浸润的中性粒细胞可能主要为成熟的分叶核粒细胞;相较于正常胃组织,胃癌组织培养上清诱导的条件性中性粒细胞能显著抑制CD3+T细胞增殖(P<0.01)。结论中性粒细胞在胃癌微环境中浸润增高,其可能通过抑制CD3+T细胞增殖而促进胃癌进展。

关键词：胃癌中性粒细胞 CD3+T细胞

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幽门螺杆菌外膜泡对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用

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第三军医大学学报 2014年第9期36卷 906-909页

作者：周发英蔡晋陈彩宇王娜谭小容罗浩邹全明曾春雨周林第三军医大学大坪医院野战外科研究所心血管内科重庆市心血管病研究所重庆400042 第三军医大学药学系微生物学与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori, Hp）外膜泡（outer membrane vesicles，OMVs）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的作用及其机制。方法 Skirrow氏液体培养基培养幽门螺杆菌，... 详细信息

目的探讨幽门螺杆菌（Helicobacter Pylori, Hp）外膜泡（outer membrane vesicles，OMVs）对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells，HUVECs）的作用及其机制。方法 Skirrow氏液体培养基培养幽门螺杆菌，经超速离心法提取HP-OMVs后用负染透射电镜和Western blot进行鉴定，将HP-OMVs与HUVECs共培养后观察其对HUVECs凋亡及增殖的影响。结果负染透射电镜显示HP-OMVs呈圆形小泡状结构，大小20-300 nm，HP-OMVs中有CagA和VacA 表达。HP-OMVs抑制HUVECs的增殖，并呈时间和浓度依赖性。流式细胞仪和TUNEL染色检测显示：HP-OMVs处理组细胞凋亡比例分别高达（27.86±2.89）%和（25.4±4.65）%，较对照组显著升高（P〈0.05）。HP-OMVs处理组Cleaved-caspase-3蛋白表达显著升高（P〈0.05）。HP-OMVs处理组Bcl-2家族的促凋亡蛋白Bax表达亦显著升高（P〈0.05），而抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低（P〈0.05）。结论幽门螺杆菌OMVs能够抑制HUVECs的增殖并促进其凋亡，其凋亡的发生可能与caspase-3的激活及Bcl-2家族的Bcl-2/Bax表达比例失衡有关。

关键词：幽门螺杆菌外膜泡动脉粥样硬化人脐静脉内皮细胞细胞凋亡

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miRNA对T细胞分化与功能的调节作用

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生命的化学 2014年第5期34卷 701-707页

作者：余婷肖斌第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室暨国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆400038

miRNA是一类长度为19~24 nt的内源性非编码小分子RNA,主要通过抑制mRNA的翻译或使其降解对靶基因实现转录后水平的调控。miRNA与T细胞的分化及功能密切相关,参与自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种病理过程的免疫调控。本文综述了... 详细信息

miRNA是一类长度为19~24 nt的内源性非编码小分子RNA,主要通过抑制mRNA的翻译或使其降解对靶基因实现转录后水平的调控。miRNA与T细胞的分化及功能密切相关,参与自身免疫性疾病、感染性疾病、肿瘤等多种病理过程的免疫调控。本文综述了近年来发现的miRNA在T细胞分化与功能调节中的作用,特别是其在抗感染与抗肿瘤免疫中的作用。

关键词：微RNA T细胞抗感染免疫抗肿瘤免疫

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金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫苗研究

金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫...

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中国免疫学会第九届全国免疫学学术大会

作者：赵卓孙合强李滨陈立章金勇曾浩邹全明吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的:系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B (SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制.方法:采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生... 详细信息

目的:系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B (SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制.方法:采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生物信息学分析、中和毒素活性试验及临床血清学实验分析B细胞表位的免疫学特性.同时,通过基因工程技术构建和制备SEB多表位疫苗,动物实验评价该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的免疫保护作用与机制.

关键词：金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌肠毒素B B细胞表位免疫优势表位疫苗

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金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫苗研究

金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫...

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2014年西南药学大会

作者：赵卓吴超邹全明第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的：系统筛选并鉴定SEB的B细胞免疫优势表位，并分析相应优势表位的生物学功能;构建并表达涵盖SEB的免疫优势及亚优势B细胞表位的多表位融合蛋白疫苗，并评价其在抗MRSA感染中的保护作用。方法: 本文从以下两部分展开论述... 详细信息

目的：系统筛选并鉴定SEB的B细胞免疫优势表位，并分析相应优势表位的生物学功能;构建并表达涵盖SEB的免疫优势及亚优势B细胞表位的多表位融合蛋白疫苗，并评价其在抗MRSA感染中的保护作用。方法: 本文从以下两部分展开论述：第一部分:SEB的B细胞免疫优势表位筛选及其功能鉴定 1.因SEB毒性与其超抗原活性密切相关，为评价重组SEB突变了(rSEB)的毒性，用不同浓度的rSEB或天然SEB毒素分别刺激BALB/c小鼠脾淋巴细胞，分析rSEB刺激T细胞异常增殖及刺激脾淋巴细胞分泌IL-2、IFN-y及TNF-a的能力。 2.用A1P04佐剂辅助SEB突变了(rSEB)免疫BALB/c小鼠，在三次免疫之后进行MRSA252菌株的尾静脉攻毒实验，分析rSEB蛋白疫苗在预防MRSA252感染中的效果，并采集rSEB免疫后小鼠的血清，分析血清中SEB抗体效价，评价SEB抗体应答在MRSA感染中的作用。 3.合成覆盖SEB全长的42条重叠18-肽，以上步获得的SEB抗血清为一抗，用肽ELISA法分析各个重叠18-肽与SEB的结合能力，系统筛选与SEB具有优势结合能力的线性B细胞表位肽。以SEB全蛋白作为阳性对照，以无关肽OVAI192-201和无关蛋白BSA作为阴性对照。用统计学软件SPSS13.0作非配对T检验来分析各个吸光度值。 4.在弗氏佐剂辅助下，用免疫优势18-肽-KLH的偶联物免疫BALB/c小鼠，经三次免疫后获得表位肽抗血清。以SEB天然毒素为包被抗原，用问接ELISA法检测不同稀释度的表位特异性抗血清与SEB天然毒素的结合能力。 5.针对每个已筛选出的SEB免疫优势表位，从N-端及C-端分别依次截断2个氨基酸，合成多个截断肽，分别以截断肽为包被抗原，以相应优势表位肽抗血清为一抗，用问接ELISA法分析各个截断肽与相应18-肽抗血清的结合强度，明确所筛选表位的核心序列。进一步，表位肽抗血清以不同浓度稀释，再次用ELISA法筛选与相应抗血清结合最强的截断肽，即优势表位核心序列。 6.在动物模型中获得表位核心序列的抗血清，在体外进行SEB毒素中和实验，明确所筛选的SEB免疫优势表位的功能。在弗氏佐剂辅助下，用免疫优势表位核心序列一KLH偶联物免疫BALB/c小鼠，经末次免疫后7天获得表位核心序列的抗血清，在体外分析该表位核心序列的抗血清阻断SEB毒素的刺激T细胞增殖及脾淋巴细胞分泌IL-2, IFN-y及TNF-a的能力。 7.在Uniprot蛋白数据库中检索不同金黄色葡萄球菌菌株来源的SEB氨基酸序列，NCBI网站上进行同源性比对，明确所筛选的SEB优势表位在不同金黄色葡萄球菌菌株中的序列保守性。在Pubmed protein data base数据库中下载SEB晶体结构图，用PyMOL 1.1软件分析SEB免疫优势表位在SEB晶体结构中的位置，分析SEB免疫优势表位在SEB晶体结构中的位置。 8.采用肽ELISA法分析SEB优势表位与临床MRSA(+)血清的交义反应性，以此评价SEB优势表位在人体中的应用前景。以SEB的优势表位为包被抗原以SEB抗血清为阳性对照，以临床SEB抗体C)血清为阴性对照。第二部分:SEB的多表位疫苗制备及其保护功能评价1.利用基因工程技术构建含SEB优势表位及亚优势表位的疫苗蛋白的原核表达质粒，并在大肠杆菌BL21(DE3)中表达重组SEB多表位融合蛋白;用SDS-PAGE鉴定蛋白该表达形式;用Western Blot分析该蛋白的免疫原性及免疫反应性;经离了交换层析纯化该蛋白;对蛋白进行进行N端氨基酸测序;用BCA法检测蛋白浓度。2.分别在弗氏佐剂及A1P04佐剂辅助下，用SEB多表位蛋白或rSEB免疫BALB/c小鼠，三次免疫后经尾静脉对小鼠进行MRSA252菌株攻毒，分析不同免疫组小鼠在MRSA252感染后14天的生存状态，评价该疫苗对小鼠抗金黄色葡萄球菌感染的保护效果。 3.用ELISA法检测小鼠的抗血清滴度，分析各组疫苗免疫后特异性抗体的效价。ELISA法检测SEB多表位疫苗的血清中抗SEBIgG抗体的水平，评价SEB多表位疫苗抗体应答在中和SEB毒素中的作用。分别以疫苗中的各个表位为包被抗原，ELISA法检测疫苗的抗血清与疫苗中每个表位的结合强度，评价疫苗中每个表位特异性抗体的应答水平。 4.无菌收集不同免疫组存活小鼠的心、肝、肺及肾脏，研磨获得各脏器组织的悬液，选用生理盐水作不同稀释度稀释，进行细菌涂板，通过菌落计数、革兰染色及PCR法计算各脏器中MRSA252的数量，评价在免疫攻毒后小鼠各脏器中细菌的定植量。结论:本实

关键词：金黄色葡萄球菌肠毒素B B细胞免疫优势表位疫苗动物模型

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金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫苗研究

金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)的B细胞免疫优势表位鉴定及其表位疫...

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：赵卓孙合强李滨陈立章金勇曾浩邹全明吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制。方法采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生物... 详细信息

目的系统筛选金黄色葡萄球菌肠毒素B(SEB)中B细胞免疫优势表位,并基于此构建SEB多表位疫苗,评价与分析该疫苗抗金黄色葡萄球菌感染的保护作用与免疫机制。方法采用合成重叠肽的ELISA法筛选和鉴定SEB中免疫优势应答B细胞表位,并通过生物信息学分析、中和毒素活性试验及临床血清学实验分析B细胞表位的免疫学特性。同时,通过基因工程技

关键词： SEB 免疫优势疫苗研究金黄色葡萄球菌肠毒素细胞免疫

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表位特异性CD4+ T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答机制

表位特异性CD4+ T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答...

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中华医学会2014全国微生物学与免疫学学术年会

作者：李滨陈立孙合强赵卓吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分析... 详细信息

目的精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分析免疫小鼠体内CD4+T淋巴细胞数量和增殖特性,Real-time PCR检测脾脏CD4+T

关键词：免疫保护作用应答机制 CD4 特异性幽门螺杆菌感染

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表位特异性CD4+ T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答机制

表位特异性CD4+ T细胞介导抗幽门螺杆菌感染的免疫保护作用与应答...

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第九届全国免疫学学术大会

作者：李滨陈立孙合强赵卓吴超第三军医大学药学系微生物与生化药学教研室&国家免疫生物制品工程技术研究中心

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分... 详细信息

目的:精细解析幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)尿素酶B亚单位(UreB)免疫小鼠后表位特异性CD4+T淋巴细胞的保护作用与应答机制。方法:重组UreB抗原联合弗氏佐剂皮下免疫Blab/c小鼠,再以Hp菌株感染攻击建立免疫保护模型,流式细胞术分析免疫小鼠体内CD4+T淋巴细胞数量和增殖特性,Real-time PCR检测脾脏CD4+T淋巴细胞的IFN-r、IL-4和IL-17等细胞因子的mRNA水平。采用步移合成重叠肽法鉴定UreB抗原中免疫优势的CD4+T细胞表位及其MHC限制性,进而通过表位免疫和细胞过继免疫试验评价其免疫优势表位的免疫保护作用,同时,深入分析表位特异性CD4+T细胞应答特性与表型特征,揭示其细胞免疫保护机制。结果:UreB免疫小鼠后可诱导CD4+T淋巴细胞明显增殖并产生特异性Th1和Th17应答。基于体外扩增的抗原特异性T淋巴细胞系,采用步移合成重叠肽法从UreB抗原中鉴定出两个免疫优势的CD4+T细胞表位UreB317-329和UreB409-401,两个表位均能刺激机体产生Th1和Th17细胞应答,且具有H-2 I-Ad限制性。与特异性Thl7细胞相比,两种表位特异性Th1细胞皆可高表达α4β7和L-selectin归巢受体。两个免疫优势表位单独免疫小鼠均产生显著的免疫保护作用,并有效激发产生针对同一表位的IFN-r和IL-17应答。表位特异性Thl和Thl7细胞的过继免疫保护试验表明:特异性Th1细胞介导了抗Hp感染的免疫保护作用,而特异性Th17细胞非免疫保护却促进炎症损伤。同时,IL-17敲除小鼠试验进一步验证了表位特异性Th1细胞的免疫保护作用。结论:全抗原免疫的保护作用主要来自其中的优势CD4+T细胞表位,同一表位可同时激发产生Th1和Th17细胞应答,但表位特异性Th1而非Th17细胞应答发挥了重要的免疫保护作用,进一步揭示了抗Hp感染的免疫保护机制,为Hp表位疫苗的研究奠定了实验基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 CD4+T细胞表位免疫优势

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