检索结果-内蒙古大学图书馆

肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建与表达

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肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA与IntiminC300融合蛋白的构建与表达

第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：刘艳青毛旭虎王庆旭易勇曾明邹全明重庆第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心 400038 北京崇文区天坛西里2号中国药品生物制品检定所 100050

目的：构建表达肠血性大肠杆菌(EHEC)O157:H7Ⅲ型分泌蛋白EspA与紧密粘附素c-端免疫保护性片断(IntiminC300)的融合蛋白(***300)。方法：采用PCR技术从EHECO157:H7基因组中扩增EspA的编码基因espA及IntiminC300的编码基因eaeC300,T-A克隆后依次构建至表达载体pET-28a(+),转化宿主细胞*** BL21(DE3),测序鉴定,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测其表达量及表达形式,亲和层析法纯化目的蛋白,免疫印迹分析免疫反应性。结果：PCR法自EHECO157:H7基因组中分别扩增出了约580bp(espA)和900bp(eaeC300)的目的片段,将二者融合构建了重组质粒pET-28a(+)-espA-eaeC300,测序结果与理论预测值一致性为99.9％(1501/1502)。融合蛋在工程菌中表达量约40％,PAGE初步测定目的蛋白的相对分子量(Mr)约54×103Da,破菌后电泳证实目的蛋白主要以包涵体形式表达,包涵体洗涤后纯化,获得目的蛋白纯度约85％。免疫印迹显示融合蛋白能分别与兔抗EspA和IntiminC300血清发生免疫反应。结论：高效表达了融合蛋白(EspA-IntiminC300),此融合蛋白具有良好的免疫反应性和免疫原性,为研制EHEC O157:H7多亚单疫苗奠定了基础。

关键词：肠血性大肠杆菌 Ⅲ型分泌蛋白紧密粘附素 C-端免疫保护性片断融合蛋白

表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒鼠沙门氏菌株的构建及免疫学性质研究

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表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒鼠沙门氏菌株的构建...

第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：宁元元毛旭虎曾明邹全明重庆第三军医大学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心 400038 北京崇文区天坛西里2号中国药品生物制品检定所 100050

目的:利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法:构建表达espA的重组质粒,,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检... 详细信息

目的:利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法:构建表达espA的重组质粒,,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌X4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况。并观察重组菌体外培养的稳定性。结果:利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经***-PAGE电泳出现了一条约21KDa的蛋白条带,***检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论:表达O157:H7 EspA的重组减毒鼠沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础。

关键词：肠出血性大肠杆菌O157:H7 减毒鼠伤寒沙门氏菌平衡致死系统 EHEC O157:H7 EspA抗原免疫学性质

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猪链球菌感染的免疫研究概况

猪链球菌感染的免疫研究概况

第三次全国免疫诊断暨疫苗学术研讨会

作者：毛旭虎朱凤才第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 江苏省疾病预防控制中心急传科南京210009

人感染猪链球菌起病急骤,毒血症状严重,病情凶险,进展快,预后差,死亡率高。猪链球菌的致病机理还不甚清楚。了解该菌感染的免疫,对阐明其致病机理、建立诊断方法和研制开发有效的预防及治疗性疫苗具有重要的指导意义。本文就猪链球菌感... 详细信息

人感染猪链球菌起病急骤,毒血症状严重,病情凶险,进展快,预后差,死亡率高。猪链球菌的致病机理还不甚清楚。了解该菌感染的免疫,对阐明其致病机理、建立诊断方法和研制开发有效的预防及治疗性疫苗具有重要的指导意义。本文就猪链球菌感染的免疫研究从非特异性免疫、特异性免疫和免疫预防三方面进行了综述。

关键词：猪链球菌感染致病机理特异性免疫免疫预防

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中国防痨杂志 2010年第11期32卷 756-759页

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科天津300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆400036

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论 iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：分枝杆菌,结核细菌蛋白质类多态性,限制性诊断长度

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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科天津 300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 解放军第二五四医院检验科天津 300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆 400036

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性，确认其保守性，分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠杆菌做为阴性对照，提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的... 详细信息

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性，确认其保守性，分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠杆菌做为阴性对照，提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA，利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因，通过ApaI／EcoRV、Kpn I／Sma I双酶切，琼脂糖凝胶电泳检测其带型，对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果：实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同，测序结果亦证实iniB基因无突变。结论：iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0341蛋白编码基因iniB 限制性片段长度多态性分析结核病

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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2010年中国防痨协会临床专业委员会和基础细菌免疫专业委员会专题研讨会

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市结核基因诊断中心实验室重庆市公共卫生医疗救治中心

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）在利福平（R）培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法:用大肠杆菌做为阴性对照,提取依R菌（14株）、耐R菌（23株）、R敏感... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）在利福平（R）培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法:用大肠杆菌做为阴性对照,提取依R菌（14株）、耐R菌（23株）、R敏感的结核分枝杆菌（12株）、结核分枝杆菌标准株HRv及BCG（共51株）的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过Apa I/EcoRV、Kpn I/Sma I双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果:实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论:iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0341 iniB 限制性片段长度多态性分析

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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2012科学研究与结核病防治高峰论坛

作者： Wu Yuan 吴园 Hu Pinpin 胡频频 Wang Yiwei 王易伟 Li Xiuquan 李秀全 Mao Xuhu 毛旭虎 Zhong Min 钟敏 254 PLA Hospital Tianjin300142China Department of Clinical Microbiology and immunolgy college of l 解放军第二五四医院检验科天津300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 Central Laboratory of Genetic Diagnosis of Tuberculosis of Chongqing Chongqing 400020China 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 254 PLA Hospital Tianjin300142China 解放军第二五四医院检验科天津300142 Department of Clinical Microbiology and immunolgy college of laboratory medicineThird Military Medi 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 Central Laboratory of Genetic Diagnosis of Tuberculosis of Chongqing Chongqing 400020China Chongqin 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆 400036

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结... 详细信息

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果：实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论：iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌结构蛋白基因测序多态性分析