检索结果-内蒙古大学图书馆

深切缅怀世界烧创伤学术界泰斗Basil ***教授

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中华烧伤杂志 2019年第4期35卷 241-242页

作者：彭毅志陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

惊悉我们尊敬的Basil ***教授于2019年3月17日下午在美国逝世,享年88岁,我们深感悲痛!我谨代表中国医师协会烧伤科医师分会和《中华烧伤杂志》编辑委员会对Pruitt教授的逝世表示沉痛哀悼!

关键词：烧伤创伤和损伤缅怀

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木犀草素通过抑制Drp1活性改善自噬流过程减少脑缺血再灌注后氧化应激损伤

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第三军医大学学报 2020年第18期42卷 1777-1786页

作者：曾雪王龙赖玉洁陈波蒋航段晨阳张云东重庆医科大学附属第三医院神经疾病中心重庆401120 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院神经外科重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)野战外科研究所战伤休克与输血研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042

目的探究木犀草素(luteolin)对脑缺血再灌注氧化应激损伤的保护机制。方法通过靶向药物评分方法筛选出对脑缺血再灌注损伤具有潜在治疗效果的抗氧化剂并在大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)小鼠模型中验证木犀草... 详细信息

目的探究木犀草素(luteolin)对脑缺血再灌注氧化应激损伤的保护机制。方法通过靶向药物评分方法筛选出对脑缺血再灌注损伤具有潜在治疗效果的抗氧化剂并在大脑中动脉栓塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)小鼠模型中验证木犀草素的保护效果;在缺氧缺糖/复氧复糖(oxygen/glucose deprivation and re-oxygen/glucose,OGD/R)诱导的神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞中使用不同浓度(10和50μmol/L)木犀草素药物处理,检测MTT细胞活力及氧自由基ROS含量变化;通过免疫荧光、蛋白印迹等方法检测木犀草素处理后OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞自噬流情况及线粒体形态变化,观察木犀草素对OGD/R后ROS生成和清除过程的影响。结果木犀草素对脑缺血再灌注靶向药物评分为96.86分。TTC染色结果显示木犀草素明显减少MCAO小鼠脑梗死面积(P<0.05)。OGD/R后SH-SY5Y细胞MTT值约为正常对照组的50%,使用50μmol/L的木犀草素处理后MTT值增加至83%(P<0.05),并且木犀草素显著减弱OGD/R诱导的ROS的产生,且呈剂量依赖性(P<0.05)。激光共聚焦结果显示50μmol/L木犀草素处理OGD/R诱导的SH-SY5Y细胞后自噬小体荧光强度增高64.6%(P<0.05),自噬小体与溶酶体共定位情况提高1.56倍(P<0.05)。Western blot结果显示木犀草素明显抑制OGD/R后Drp1 Ser616磷酸化水平及Drp1线粒体转位(P<0.05),改善OGD/R后SH-SY5Y细胞线粒体形态(P<0.05)。结论木犀草素对于脑缺血再灌注后氧化应激损伤具有明显保护作用,一方面它可以通过改善自噬流过程促进线粒体自噬小体的降解,加速ROS的清除效率;另一方面它还可以通过抑制Drp1活性保护线粒体形态,减少ROS的产生。

关键词：木犀草素脑缺血再灌注线粒体氧自由基 Drp1 自噬流

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扬帆再启航迎接新甲子

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中华烧伤杂志 2019年第1期35卷 1-2页

作者：彭毅志陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

2018年《中华烧伤杂志》所做的亮点工作:"烧伤医学60年"专栏的成功策划与展示,推出7篇行业指南与共识,网站开设"优先出版"、"视频中心"板块。其中,"烧伤医学60年"庆祝专栏特别邀请院士、烧伤... 详细信息

2018年《中华烧伤杂志》所做的亮点工作:"烧伤医学60年"专栏的成功策划与展示,推出7篇行业指南与共识,网站开设"优先出版"、"视频中心"板块。其中,"烧伤医学60年"庆祝专栏特别邀请院士、烧伤学术界老前辈及近3年复旦版中国医院专科声誉排行榜上榜科室作为代表撰写的30余篇论文讴歌了学科60年发展历程并畅谈学科未来建设、发展构想,值得同道们认真品味思考,借此开启学科探索新征途,杂志定将陪伴您左右携手与共推动学科迈向新高峰。

关键词：烧伤学科回顾展望

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烧伤后脏器并发症的发生与防治

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中华烧伤杂志 2019年第8期35卷 565-567页

作者：罗高兴陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

脏器并发症是引起烧伤及其他重症患者死亡的最主要直接原因,烧伤后2个最重要的始动致病因素是应激与皮肤屏障功能破坏,它们直接决定着烧伤患者脏器并发症的发生发展与预后。全身炎症反应综合征与脓毒症是烧伤后引起脏器并发症的主要病因... 详细信息

脏器并发症是引起烧伤及其他重症患者死亡的最主要直接原因,烧伤后2个最重要的始动致病因素是应激与皮肤屏障功能破坏,它们直接决定着烧伤患者脏器并发症的发生发展与预后。全身炎症反应综合征与脓毒症是烧伤后引起脏器并发症的主要病因,如何有效预防与治疗严重烧伤后脏器并发症还有很多挑战。

关键词：烧伤系统性炎症反应综合征脓毒症脏器并发症

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氧化铜纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面修复的作用及其机制

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中华烧伤杂志 2020年第12期36卷 1139-1148页

作者：彭源卢毅飞邓君张艳上海交通大学医学院附属第九人民医院整复外科 200011 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市疾病蛋白质组学重点实验室400038

目的探讨氧化铜纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面修复的作用及其机制。方法(1)采用氯化铜与L-抗坏血酸反应的方法合成氧化铜纳米酶。采用透射电子显微镜观察氧化铜纳米酶大小和形貌,动态光散射粒度分析仪和纳米粒度电位仪分别分析其... 详细信息

目的探讨氧化铜纳米酶对糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面修复的作用及其机制。方法(1)采用氯化铜与L-抗坏血酸反应的方法合成氧化铜纳米酶。采用透射电子显微镜观察氧化铜纳米酶大小和形貌,动态光散射粒度分析仪和纳米粒度电位仪分别分析其水合粒径和表面电位。(2)采用过氧化氢检测试剂盒、超氧阴离子检测试剂盒、3,3′,5,5′-四甲基联苯胺显色剂分别测定150 ng/mL氧化铜纳米酶的过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除能力,计算过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例(样本数均为3)。(3)将小鼠成纤维细胞系3T3细胞采用随机数字表法(分组方法下同)分为空白对照组、单纯过氧化氢组和过氧化氢+氧化铜组,每组3孔。将终质量浓度25 ng/mL的氧化铜纳米酶加入过氧化氢+氧化铜组细胞中预处理30 min。然后,在单纯过氧化氢组和过氧化氢+氧化铜组细胞中各加入终物质的量浓度250μmol/L过氧化氢,空白对照组常规培养。培养24 h后,采用2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯荧光探针检测细胞内活性氧水平(以绿色荧光强度表示),细胞计数试剂盒8法检测并计算细胞存活率。(4)取10只6~8周龄雄性BALB/c小鼠(性别、鼠龄下同),分为磷酸盐缓冲液(PBS)组与氧化铜组,每组5只。氧化铜组小鼠经尾静脉注射200 ng/mL的氧化铜纳米酶800 ng/kg,PBS组小鼠注射等体积的PBS。2组小鼠均每天注射1次,连续注射7 d。于第8天,取每组5只小鼠,采血行血细胞与血清生化分析,处死后收集心、肝、脾、肺和肾行苏木精-伊红(HE)染色后组织病理学观察。(5)取20只小鼠分为PBS组与氧化铜组,每组10只。采用链脲佐菌素及高糖高脂饮食法诱导糖尿病,并在其背部制作直径6 mm的全层皮肤缺损创面。伤后即刻,PBS组小鼠创面滴加20μL PBS,氧化铜组小鼠创面滴加20μL 200 ng/mL的氧化铜纳米酶,连续处理12 d。每组选定3只小鼠分别于伤后0(即刻)、3、6、9、12 d观察创面愈合情况,并计算创面未愈合面积。伤后6 d,每组取未行创面观察的3只小鼠,处死后酶联免疫吸附测定法测定创面组织中白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、IL-6含量。伤后12 d,处死2组各剩余7只小鼠,行HE染色并观察创面新生上皮长度,行二氢乙锭荧光探针染色观察活性氧水平(以红色荧光强度表示)。对数据行单因素方差分析、重复测量方差分析、独立样本t检验、Bonferroni检验。结果(1)制备的氧化铜纳米酶大小均匀,在干燥状态下平均直径为3.5~4.0 nm,水合粒径约为4.5 nm,表面电位为(-9.8±0.3)mV。综合判定,成功制备了氧化铜纳米酶。(2)氧化铜纳米酶分别处理2 h、10 min、5 min后,过氧化氢、超氧阴离子、羟自由基清除比例分别为(77±5)%、(45±5)%、(84±4)%。(3)培养24 h后,单纯过氧化氢组细胞内活性氧水平急剧增高,细胞形态异常且数量减少;过氧化氢+氧化铜组细胞内活性氧水平明显降低,细胞形态与空白对照组相比无明显变化。单纯过氧化氢组细胞存活率明显低于空白对照组和过氧化氢+氧化铜组(P<0.01),而过氧化氢+氧化铜组细胞存活率与空白对照组相近。(4)注射7 d后,PBS组和氧化铜组小鼠肝功能指标、肾功能指标、血细胞相关指标均相近;氧化铜组小鼠的心、肝、脾、肺和肾中,均未观察到组织坏死、充血或出血,与PBS组无明显差别。(5)氧化铜组小鼠创面相比PBS组表现出更快的愈合趋势,创面红肿情况较轻。氧化铜组小鼠伤后6、9、12 d创面未愈合面积分别为(28.8±1.9)、(17.6±3.8)、(10.4±1.8)mm^2,明显小于PBS组的(38.0±4.3)、(30.2±3.0)、(24.2±3.0)mm2(t=3.706、5.075、5.558,P<0.01)。伤后6 d,氧化铜组小鼠创面IL-1β、TNF-α、IL-6含量均明显低于PBS组(t=6.115、11.762、11.725,P<0.01)。伤后12 d,氧化铜组小鼠创面新生上皮长度长于PBS组,创面组织活性氧水平明显低于PBS组。结论氧化铜纳米酶不仅具有良好的生物相容性,同时具有高效的活性氧清除活性,能够消除糖尿病小鼠全层皮肤缺损创面过量表达的活性氧,降低氧化应激、减轻炎症,促进创面修复。

关键词：糖尿病伤口愈合氧化性应激氧化铜纳米酶

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小鼠痕迹性眨眼条件反射建立过程中小脑皮层神经元活动的变化特征

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第三军医大学学报 2020年第12期42卷 1188-1194页

作者：章利彬陈浩张洁周安伍亚民闫洁陆军军医大学(第三军医大学)野战外科研究所第三研究室创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400042 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院生理学教研室脑与智能研究院重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院学员2大队7营重庆400038

目的研究痕迹性眨眼条件反射建立过程中,小鼠小脑皮层神经元放电活动的动态变化规律。方法将150 ms蓝光作为条件刺激,100 ms角膜吹气作为非条件刺激,进行配对刺激。连续5 d,训练小鼠(n=6)建立痕迹性眨眼条件反射。在条件反射训练过程中... 详细信息

目的研究痕迹性眨眼条件反射建立过程中,小鼠小脑皮层神经元放电活动的动态变化规律。方法将150 ms蓝光作为条件刺激,100 ms角膜吹气作为非条件刺激,进行配对刺激。连续5 d,训练小鼠(n=6)建立痕迹性眨眼条件反射。在条件反射训练过程中,使用tetrode电极记录小鼠小脑皮层内神经元的放电活动。结果通过连续5 d配对刺激训练,小鼠的条件性眨眼反应显著增加(P<0.01),其发生率从第1天的(35.3±10.5)%上升至第5天的(70.9±3.2)%。在小脑皮层记录到两类与痕迹性眨眼条件反射行为相关的神经元放电活动:①刺激间期活动减弱神经元(训练早期:n=11,训练后期:n=23);②刺激间期活动增强神经元(训练早期:n=18,训练后期:n=7)。相对于痕迹性眨眼条件反射的训练早期,训练后期小脑皮层内刺激间期活动减弱的神经元比例增加(早期:16.7%,后期:36.5%),而刺激间期活动增强的神经元比例减少(早期:27.3%,后期:11.2%),放电减弱和增强模式神经元的组成比例发生显著变化(P<0.01)。此外,随着条件反射训练的进行,小脑皮层神经元刺激间期活动变化的起始潜伏期显著后移(P<0.05),但活动强度没有发生显著变化(P>0.05)。结论在痕迹性眨眼条件反射建立过程中,小脑皮层神经元通过群体放电活动从增强向减弱的模式转换来促进痕迹性条件性眨眼反射的建立。

关键词：条件反射眨眼小脑皮层神经元

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改良新型冠状病毒核酸检测鼻咽拭子采样方法的临床应用效果

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中华烧伤杂志 2020年第8期36卷 679-685页

作者：马思远罗伊美胡田雨尤再春孙建国于世勇袁志强彭毅志罗高兴徐智陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院感染控制科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院全科医学科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院肿瘤科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院心血管内科重庆400037 陆军军医大学(第三军医大学)第二附属医院全军呼吸疾病研究所全军呼吸病研究重点实验室重庆400037

目的探讨改良新型冠状病毒核酸检测鼻咽拭子采样方法的临床应用效果。方法本研究涉及时间范围为2020年1月14日-3月1日,2月24日开始采用卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子,在此之前均采用坐位法采集鼻咽拭子。患者均为疑似/确诊新型冠状病毒... 详细信息

目的探讨改良新型冠状病毒核酸检测鼻咽拭子采样方法的临床应用效果。方法本研究涉及时间范围为2020年1月14日-3月1日,2月24日开始采用卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子,在此之前均采用坐位法采集鼻咽拭子。患者均为疑似/确诊新型冠状病毒感染患者,2月19日开始入院,之前在院外采集鼻咽拭子。(1)34名鼻咽拭子采集操作者符合本研究入选标准,对其进行回顾性队列研究。按鼻咽拭子采集方法分组,武汉泰康同济医院16名操作者(男15名、女1名,年龄34~49岁)采用卧位法配合防护面屏,纳入卧位法+防护面屏组,采集标本时,患者平卧,佩戴鼻咽拭子采样专用防护面屏,颈部稍过伸,面部转向操作者对侧10°左右;18名操作者采用传统的坐位法,纳入坐位法组,其中陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院12名、武汉江夏方舱医院1名、武汉大学人民医院东院区5名,男2名、女16名,年龄25~49岁。自制问卷调查2组操作者自评患者配合度及恶心、呛咳、喷嚏、挣扎发生率,单次采样操作时间,对操作的恐惧感、自感暴露风险程度。(2)选择于武汉泰康同济医院先后接受坐位法、卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子且有完整核酸检测结果的65例患者(男22例、女43例,年龄25~91岁),统计其分别采用2种方法采集鼻咽拭子的核酸检测阳性率。(3)选择(2)中的能准确表达自己感觉的41例患者(男12例、女29例,年龄27~83岁),调查其在接受2种方法进行样本采集过程中的舒适度。(4)选择(2)中经坐位法采集鼻咽拭子核酸检测结果持续阴性(连续≥2次)患者34例(男10例、女24例,年龄25~83岁),统计其经卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子的核酸检测阳性率,即阴性转阳性率。对数据行Wilcoxon符号秩检验、t检验、χ^2检验。结果(1)卧位法+防护面屏组操作者自评患者配合度评分显著高于坐位法组(Z=-4.928,P<0.01),操作者自评患者恶心、呛咳、喷嚏和挣扎发生率以及对操作的恐惧感和自感暴露风险程度评分显著低于坐位法组(Z=-5.071、-5.046、-4.095、-4.397、-4.174、-5.049,P<0.01),单次采样操作时间显著长于坐位法组(t=223.17,P<0.01)。(2)65例患者经卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子的核酸检测阳性率为60.00%(39/65),明显高于坐位法的41.54%(27/65),χ^2=4.432,P<0.05。(3)41例患者经卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子的舒适度评分显著高于坐位法(Z=-5.319,P<0.01)。(4)坐位法采集鼻咽拭子核酸检测持续阴性的34例患者,采用卧位法+防护面屏采集鼻咽拭子后核酸检测阴性转阳性率为26.47%(9/34)。结论相较于传统坐位法,采用卧位法联合防护面屏采集鼻咽拭子行新型冠状病毒核酸检测可显著改善患者舒适度,降低操作者的暴露风险,在一定程度上减少检测结果假阴性,可能有助于减少出院患者假性"复阳"现象,值得推广。

关键词：新型冠状病毒鼻咽拭子卧位法防护面屏坐位法舒适度安全性阳性检出率

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2019年《中华烧伤杂志》主编工作会纪要

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中华烧伤杂志 2019年第5期35卷 398-399页

作者：莫愚彭毅志中华烧伤杂志重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

2019年4月10—12日,《中华烧伤杂志》编辑委员会在贵州省贵阳市召开了主编工作会,终身顾问、名誉总编、总编、副总编及常务编委围绕杂志的建设发展、杂志20周年庆策划、下一步工作设想等内容给出有效务实的指导性意见。

关键词：烧伤杂志主编工作会

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线粒体转录因子A和细胞色素c氧化酶途径对肿瘤坏死因子受体相关蛋白1调节大鼠缺氧心肌细胞能量生成的作用及机制

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中华烧伤杂志 2020年第8期36卷 651-657页

作者：向飞薛冬冬罗佳胡建红原莉莉贾杰只黄跃生陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 深圳市人民医院南方科技大学第一附属医院暨南大学第二临床医学院创面修复科创面修复研究所518020

目的探讨线粒体转录因子A(TFAM)和细胞色素c氧化酶(COX)途径在肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)调节大鼠缺氧心肌细胞能量生成中的作用及机制。方法取135只1~3 d龄SD大鼠乳鼠,分离培养心肌细胞。(1)取细胞,按随机数字表法(分组方法下同... 详细信息

目的探讨线粒体转录因子A(TFAM)和细胞色素c氧化酶(COX)途径在肿瘤坏死因子受体相关蛋白1(TRAP1)调节大鼠缺氧心肌细胞能量生成中的作用及机制。方法取135只1~3 d龄SD大鼠乳鼠,分离培养心肌细胞。(1)取细胞,按随机数字表法(分组方法下同)分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧+TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组,每组1瓶。常氧空白对照组细胞常规培养;缺氧空白对照组细胞常规培养后缺氧6 h;缺氧+TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组细胞常规培养后,分别加入TRAP1过表达空病毒载体、TRAP1过表达腺病毒载体病毒悬液转染48 h后缺氧6 h。蛋白质印迹法检测各组细胞TFAM蛋白表达。(2)取细胞,分为常氧空白对照组、缺氧空白对照组、缺氧+TRAP1过表达对照组、缺氧+TRAP1过表达组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组,每组1孔,前4组细胞处理同实验(1)对应组别。缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组、缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组细胞分别加入TFAM干扰空病毒载体、TFAM干扰腺病毒载体病毒悬液转染48 h,其他处理同缺氧+TRAP1过表达组。采用ATP检测试剂盒及酶标仪检测细胞内ATP含量,采用COX活性检测试剂盒及酶标仪检测细胞内COX活性。(3)取细胞,分为常氧空白对照组、常氧+叠氮化钠组、缺氧空白对照组、缺氧+叠氮化钠组,每组1孔,常氧空白对照组和缺氧空白对照组细胞处理同实验(1)对应组别。常氧+叠氮化钠组细胞实验前30 min加入32 nmol叠氮化钠,缺氧+叠氮化钠组细胞缺氧前30 min加入32 nmol叠氮化钠后缺氧6 h,同前检测ATP含量。以上实验均重复3次。对数据行单因素方差分析、LSD检验。结果(1)与常氧空白对照组比较,缺氧空白对照组细胞TFAM蛋白表达量明显下降(P<0.01)。与缺氧空白对照组和缺氧+TRAP1过表达对照组比较,缺氧+TRAP1过表达组细胞TFAM蛋白表达量明显升高(P<0.01)。(2)与常氧空白对照组(0.552±0.041、1.99±0.15)比较,缺氧空白对照组细胞COX活性(0.270±0.044)和ATP含量(1.09±0.11)均明显降低(P<0.01)。与缺氧空白对照组和缺氧+TRAP1过表达对照组(0.269±0.042、1.17±0.12)比较,缺氧+TRAP1过表达组和缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组细胞COX活性(0.412±0.032、0.404±0.016)和ATP含量(1.75±0.06、1.69±0.07)均明显升高(P<0.01)。与缺氧+TRAP1过表达组和缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰对照组比较,缺氧+TRAP1过表达+TFAM干扰组细胞COX活性(0.261±0.036)和ATP含量(1.23±0.07)均明显降低(P<0.01)。(3)与常氧空白对照组比较,常氧+叠氮化钠组和缺氧空白对照组细胞ATP含量明显降低(P<0.01)。与缺氧空白对照组比较,缺氧+叠氮化钠组细胞ATP含量明显降低(P<0.01)。结论TRAP1能够通过上调TFAM表达来提高COX活性,最终减轻缺氧导致的大鼠心肌细胞能量生成受损。

关键词：肌细胞,心脏缺氧腺苷三磷酸肿瘤坏死因子受体相关蛋白1 线粒体转录因子A 细胞色素c氧化酶

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皮肤γδT淋巴细胞调节小鼠表皮细胞增殖分化对创面愈合的影响

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中华烧伤杂志 2019年第4期35卷 298-307页

作者：朱海杰李雅舒王杨平胡晓红张小容邱林贺伟峰罗高兴陆军军医大学(第三军医大学)第一附属医院全军烧伤研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室、重庆市疾病蛋白质组学重点实验室重庆400038

目的探讨树突状表皮T淋巴细胞(DETC)和Vγ4T淋巴细胞对小鼠表皮细胞增殖分化的影响及其在创面愈合中的作用。方法(1)取6只8周龄C57BL/6雄性小鼠,采用随机数字表法(分组方法下同)分为对照组和创面组,每组3只。于创面组小鼠背部剪1条长4c... 详细信息

目的探讨树突状表皮T淋巴细胞(DETC)和Vγ4T淋巴细胞对小鼠表皮细胞增殖分化的影响及其在创面愈合中的作用。方法(1)取6只8周龄C57BL/6雄性小鼠,采用随机数字表法(分组方法下同)分为对照组和创面组,每组3只。于创面组小鼠背部剪1条长4cm深达皮肤全层的直线切口,对照组小鼠不行任何处理。伤后3d,断颈处死2组小鼠,取创面组小鼠背部距创缘5mm内的皮肤,取对照组小鼠相应部位正常皮肤制成单细胞悬液,流式细胞仪检测表达白细胞介素17A(IL-17A)的Vγ4T淋巴细胞的百分比及表达胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的DETC百分比。(2)取10只8周龄C57BL/6雄性小鼠,分为对照组和Vγ4T淋巴细胞清除组,每组5只。Vγ4T淋巴细胞清除组小鼠腹腔注射200g亚美尼亚仓鼠抗小鼠Vγ4T淋巴细胞单克隆中和抗体,对照组小鼠腹腔注射等量亚美尼亚仓鼠Ig,分别于背部脊柱两侧各打1个深达皮肤全层的孔,观察伤后1~8d创面愈合情况,并计算剩余创面面积百分比。(3)取6只8周龄C57BL/6雄性小鼠,同实验(2)进行分组及处理,每组3只。伤后3d,蛋白质印迹法检测创缘表皮组织IL-17A和IGF-Ⅰ的蛋白表达。(4)取30只3d龄C57BL/6雄性小鼠,断颈处死后提取表皮细胞,流式细胞仪(下同)检测角蛋白14阳性细胞率。(5)另取小鼠表皮细胞,分为对照组、IGF-Ⅰ组与IL-17A组,每组3孔(下同)。IGF-Ⅰ组与IL-17A组细胞分别加入1mL终质量浓度为100ng/mL的重组小鼠IGF-Ⅰ和重组小鼠IL-17A,对照组细胞加入等量无菌磷酸盐缓冲液(PBS)。培养5d后,检测角蛋白14阴性细胞率。另取小鼠表皮细胞,同前进行分组及处理,培养10d后,检测角蛋白10阳性细胞率。(6)另取小鼠表皮细胞,加入4mmol/L羧基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯(CFSE)染液,分为对照0d组、对照7d组、IGF-Ⅰ组、IL-17A组。IGF-Ⅰ组、IL-17A组细胞同实验(5)对应组进行处理,对照0d组、对照7d组细胞同实验(5)对照组进行处理。对照0d组细胞培养0d,余3组细胞培养7d,检测CFSE荧光波峰位置。(7)另取小鼠表皮细胞,分为对照组、IGF-Ⅰ组。IGF-Ⅰ组细胞加入1mL终质量浓度为100ng/mL重组小鼠IGF-Ⅰ,对照组细胞加入等量无菌PBS,培养5d后,同前进行角蛋白14和CFSE染色,检测CFSE阳性细胞角蛋白14阴性细胞率。另取小鼠表皮细胞,分为对照组与IL-17A组,IL-17A组细胞加入1mL终质量浓度为100ng/mL重组小鼠IL-17A,对照组细胞加入等量无菌PBS,培养5d后,检测CFSE阳性细胞角蛋白14阴性细胞率。对数据行单因素方差分析和t检验。结果(1)伤后3d,对照组小鼠正常表皮组织中表达IGF-Ⅰ的DETC百分比为(9.9±0.8)%,明显低于创面组小鼠创缘表皮组织中的(19.0±0.6)%,t=8.70,P<0.01;对照组小鼠正常表皮组织中表达IL-17A的Vγ4T淋巴细胞百分比为(0.123±0.024)%,明显低于创面组小鼠创缘表皮组织中的(8.967±0.406)%,t=21.77,P<0.01。(2)对照组小鼠伤后1~4d创面周围有明显的炎症反应;伤后5~8d,创面面积仍较大。Vγ4T淋巴细胞清除组小鼠伤后1~4d创面周围炎症反应较轻;伤后5~8d,创面面积明显缩小。伤后3~7d,Vγ4T淋巴细胞清除组小鼠剩余创面面积百分比明显低于对照组(t=5.92、5.74、7.17、5.38、5.57,P<0.01);培养1、2、8d,2组小鼠剩余创面面积百分比相近(t=1.46、3.17、3.10,P>0.05)。(3)伤后3d,与对照组比较,Vγ4T淋巴细胞清除组小鼠创缘表皮组织的IL-17A蛋白表达明显下降,IGF-Ⅰ蛋白表达明显升高(t=8.47、19.24,P<0.01)。(4)小鼠表皮细胞角蛋白14阳性细胞率为94.7%。(5)培养5d后,对照组小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组,明显低于IL-17A组(t=7.25、5.64,P<0.01)。培养10d后,对照组小鼠表皮细胞角蛋白10阳性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组,明显低于IL-17A组(t=3.99、10.82,P<0.05或P<0.01)。(6)相较于对照0d组,对照7d组、IGF-Ⅰ组和IL-17A组小鼠表皮细胞培养7d后CFSE荧光波峰左移。相较于对照7d组,IGF-Ⅰ组和IL-17A组小鼠表皮细胞培养7d后CFSE荧光波峰均左移。(7)培养5d后,对照组CFSE阳性小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显高于IGF-Ⅰ组(t=9.91,P<0.01),对照组CFSE阳性小鼠表皮细胞角蛋白14阴性细胞率明显低于IL-

关键词：创伤和损伤伤口愈合细胞增殖细胞分化 T淋巴细胞胰岛素样生长因子Ⅰ 白细胞介素17

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