检索结果-内蒙古大学图书馆

第二军医大学学报 2014年第4期35卷 447-451页

作者：王明科孙慧勤程晋姜帆粟永萍邹仲敏海军医学研究所舰艇卫生研究室上海200433 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 解放军441医院防疫科福鼎355200 第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所重庆400038

目的构建表达小鼠新基因mgt-16的反转录病毒载体,并观察其在小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10T1/2(简称10T1/2细胞)中的表达。方法以含小鼠新基因mgt-16的DNA序列为模板PCR扩增得到mgt-16编码序列,T-A克隆后测序获得pMD18T-16质粒,与真核表... 详细信息

目的构建表达小鼠新基因mgt-16的反转录病毒载体,并观察其在小鼠胚胎间充质干细胞C3H/10T1/2(简称10T1/2细胞)中的表达。方法以含小鼠新基因mgt-16的DNA序列为模板PCR扩增得到mgt-16编码序列,T-A克隆后测序获得pMD18T-16质粒,与真核表达载体pEGFP-N1酶切、连接、转化,通过PCR、酶切鉴定和测序获得正确的pEGFP-N1-16载体。将pEGFP-N1-16载体中含mgt-16的片段克隆至反转录病毒载体pLEGFP-N1,通过酶切鉴定和测序获得正确的pLEGFP-N1-16反转录病毒载体。将pLEGFP-N1-16转染反转录病毒包装细胞Phoenix,制备携带mgt-16与增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)的反转录病毒,感染小鼠间充质干细胞10T1/2后,400μg/mL G418筛选获得稳定表达mgt-16与EGFP融合蛋白的10T1/2细胞克隆。荧光显微镜观察MGT-16蛋白的表达及亚细胞定位。结果 PCR扩增得到大小约300bp的mgt-16条带,T-A克隆后测序显示获得的mgt-16序列与Genbank数据库序列相同。构建的pEGFP-N1-16载体经PCR、酶切鉴定和测序验证构建成功,构建的反转录病毒载体pLEGFP-N1-16经酶切鉴定和测序验证构建成功。荧光显微镜观察MGT-16主要在Phoenix细胞和小鼠间充质干细胞的细胞质表达,核周表达水平较高。结论成功构建了小鼠新基因mgt-16的反转录病毒载体,并在间充质干细胞中表达,为进一步研究新基因mgt-16在间充质干细胞中的功能奠定了基础。

关键词： mgt-16 过表达反转录病毒间质干细胞

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Ghrelin对放烧复合伤大鼠的救治作用

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第三军医大学学报 2014年第3期36卷 213-216页

作者：刘聪李宏李蓉粟永萍第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的探索Ghrelin对放烧复合伤大鼠是否具有救治作用,并对其产生救治作用的可能机制做初步研究。方法 120只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:正常组(Con)、单纯Ghrelin处理组(GHR,即对正常大鼠腹腔注射Ghrelin)、放烧复合伤组(CRB... 详细信息

目的探索Ghrelin对放烧复合伤大鼠是否具有救治作用,并对其产生救治作用的可能机制做初步研究。方法 120只清洁级雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:正常组(Con)、单纯Ghrelin处理组(GHR,即对正常大鼠腹腔注射Ghrelin)、放烧复合伤组(CRBI,5 Gy全身均匀照射+15%全身体表面积皮肤Ⅲ度烧伤)、Ghrelin治疗组(CRBI+GHR),GHR每天1次,连续5 d腹腔注射,剂量3.37×10-2mg/kg,每组30只。观察项目包括:①大鼠30 d存活率;②造血功能:7、14、21 d外周血象和第10天脾结节形成实验、脾脏指数、骨髓有核细胞计数;③最后1次给药后2、4、6 h血清中炎性介质TNF-α、IL-6,神经递质乙酰胆碱(ACH),肾上腺素(E)及皮质醇(Cor)的含量。结果 Ghrelin可显著提高CRBI动物存活率(约25%);与CRBI组相比可显著提高第7天外周血中WBC计数(P<0.05),第10天骨髓有核细胞计数亦明显高于CRBI组,但在脾结节及脾脏指数方面尚未观察到显著差异(P>0.05);与CRBI组相比,还可使伤后第4天血清中TNF-α及IL-6含量降低(P<0.05),乙酰胆碱总体含量降低(P<0.05),肾上腺素及皮质醇水平下降(P<0.05)。结论 Ghrelin对放烧复合伤大鼠具有一定的救治作用,其作用的发挥可能与其减轻造血功能抑制,下调促炎介质水平并调节植物神经系统的兴奋性有关。

关键词：放烧复合伤 Ghrelin 救治作用

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SELEX技术筛选钙通道特异性核酸适配体及其抗肥大细胞活化的作用

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第三军医大学学报 2014年第4期36卷 307-312页

作者：杨永强陈晓红李怡然陈波冉新泽杨涛孙仁山第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆400042 第三军医大学药学系药理学教研室重庆400038 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用聚苯乙烯... 详细信息

目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用聚苯乙烯酶联板为介质的指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术筛选核酸适配体。利用酶联免疫吸附实验检测各轮筛选序列与靶蛋白的亲和力,验证适配体与靶蛋白的特异性结合;激光共聚焦显微镜观察适配体对细胞内钙离子浓度变化的影响;利用IgE介导的肥大细胞脱颗粒模型,观察适配体对β-氨基己糖苷酶释放的抑制效应。结果经过12轮SELEX筛选,获得了7条核酸适配体,其中AptamerY1解离常数(Kd值)为1.72×10-8mol/L。以终浓度2μg/mL的AptamerY1可抑制由IgE介导的人肥大细胞系LAD2钙离子内流,并对LAD2细胞的β-氨基己糖苷酶释放抑制率达95%。结论通过SELEX筛选,获得了7条针对Orai1分子第1膜外区的核酸适配体,所获得适配体可对肥大细胞LAD2钙内流有效抑制,进而抑制肥大细胞活化和β-氨基己糖苷酶的释放。

关键词：肥大细胞 SELEX适体技术钙离子释放激活通道 β-氨基己糖苷酶

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基因捕获技术的现状及应用

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中国生物工程杂志 2014年第12期34卷 107-111页

作者：王明科孙慧勤粟永萍邹仲敏中国人民解放军海军医学研究所上海200433 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 解放军441医院福鼎355200 第三军医大学军事预防医学院毒理学研究所重庆400038

随着越来越多生物基因组测序的完成,生物医学研究已进入后基因组时代。基因捕获技术由于其在克隆、发现新基因及揭示基因功能方面具有独特的优点,已成为功能基因组时代研究的有力工具,在生物医学研究各个领域的应用日趋广泛。主要对基... 详细信息

随着越来越多生物基因组测序的完成,生物医学研究已进入后基因组时代。基因捕获技术由于其在克隆、发现新基因及揭示基因功能方面具有独特的优点,已成为功能基因组时代研究的有力工具,在生物医学研究各个领域的应用日趋广泛。主要对基因捕获技术的原理、分类、一般操作流程、优缺点及基因捕获在发育生物学、新基因鉴定、干细胞分化、肿瘤和生殖医学研究方面的应用作一综述,为相关研究者提供借鉴。

关键词：基因捕获发育生物学新基因鉴定干细胞分化肿瘤生殖医学

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Ghrelin与炎症性疾病的研究进展

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重庆医学 2014年第4期43卷 489-492页

作者：刘聪李蓉第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所/创伤烧伤与复合伤国家重点实验室/重庆市纳米医药工程技术研究中心 400030

自Ghrelin在1999年最终被日本科学家Kojima等用免疫组织化学的方法从大鼠胃组织中提取出来以来，各国科学家对Ghrelin已进行了深入而广泛的研究，其结构和生理功能得到了更多阐释并在临床某些疾病的治疗中发挥了一定作用。如肥胖症、厌... 详细信息

自Ghrelin在1999年最终被日本科学家Kojima等用免疫组织化学的方法从大鼠胃组织中提取出来以来，各国科学家对Ghrelin已进行了深入而广泛的研究，其结构和生理功能得到了更多阐释并在临床某些疾病的治疗中发挥了一定作用。如肥胖症、厌食症、糖尿病、消化系统及心血管系统疾病等，其中与炎症性疾病的关系最为密切，故本文拟从该角度作一综述。

关键词：炎症性疾病研究进展

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脂肪源性干细胞无酶分离培养方法的研究

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重庆医学 2014年第10期43卷 1153-1156,1160页

作者：刘苹史春梦胡玲莉张波王正国第三军医大学军事预防医学院复合伤研究所/创伤烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学大坪医院野战外科研究所四室湖北省孝感市95829部队后勤部门诊部

目的探索适合临床治疗应用的脂肪源性干细胞(ADSCs)分离培养方法。方法分别采用无酶分离法和胶原酶消化法从脂肪抽吸术抽吸的人脂肪组织中分离培养细胞,对比分析分离的间充质干细胞特性。结果无酶分离法所需时间仅为胶原酶消化法的1/3,... 详细信息

目的探索适合临床治疗应用的脂肪源性干细胞(ADSCs)分离培养方法。方法分别采用无酶分离法和胶原酶消化法从脂肪抽吸术抽吸的人脂肪组织中分离培养细胞,对比分析分离的间充质干细胞特性。结果无酶分离法所需时间仅为胶原酶消化法的1/3,分离的细胞在细胞形态学、增殖能力、免疫表型、分化潜能等特性与胶原酶消化法分离培养的细胞一致。结论无酶分离法能够从脂肪抽吸术抽吸的人脂肪组织中分离培养出ADSCs,是一种安全可靠、适合临床应用的ADSCs分离培养方法。

关键词：脂肪源性干细胞分离方法无酶胶原酶消化法细胞培养的脂肪组织

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情系祖国需求、献身军事医学——记我国复合伤研究的开拓者程天民院士

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中华损伤与修复杂志（电子版） 2014年第4期9卷 1-5页

作者：邓晓蕾冉新泽赵虹霖张远军肖燕王云贵第三军医大学重庆400038 军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室军事预防医学院政治部宣传处

本刊设立专家风采栏目，旨在宣传老一代损伤与修复专家献身于祖国医学事业、造福人民的奉献精神，高尚的医德，诲人不倦的工作作风，勇攀医学高峰、走创新之路的崇高意识。学习他们做人、做事的高尚情操和尊师育人的伟大胸怀，在构建社... 详细信息

本刊设立专家风采栏目，旨在宣传老一代损伤与修复专家献身于祖国医学事业、造福人民的奉献精神，高尚的医德，诲人不倦的工作作风，勇攀医学高峰、走创新之路的崇高意识。学习他们做人、做事的高尚情操和尊师育人的伟大胸怀，在构建社会主义和谐社会的新长征道路上以他们为榜样，为祖国：为人民做出新的贡献。

关键词：程天民复合伤军事医学第三军医大学防原医学专家简介病理学家名誉所长创伤学医学教育

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慢病毒介导shRNA沉默鼠肝星状细胞TGFβ1对Col1a1表达的影响

慢病毒介导shRNA沉默鼠肝星状细胞TGFβ1对Col1a1表达的影响

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第二十六届全国中西医结合消化系统疾病学术会议

作者：张荣华闫国和汪国建粟永萍第三军医大学西南医院中西医结合科第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的:构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原(Col1a1)表达与分泌的影响. 方法:针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RAN(siRNA),将各对siRNA... 详细信息

目的:构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,并观测其对大鼠肝星状细胞HSC-T6的TGFβ1基因沉默效应与对Ⅰ型胶原(Col1a1)表达与分泌的影响. 方法:针对大鼠TGFβ1基因CDs序列,筛选3个干扰靶点,合成其3对小干扰RAN(siRNA),将各对siRNA分别转入HSC-T6细胞,采用RT-PCR法从3对siRNA中筛选出最佳siRNA,设计并合成针对最佳siRNA靶序列的shRNA,退火形成双链,与载体pGreenPuro连接,构建pGreenPuro/TGFβ1shRNA慢病毒载体,予以酶切与测序鉴定.pGreenPuro/TGFβ 1shRNA慢病毒载体经293细胞包装,将包装产生的高感染力的慢病毒颗粒感染HSC-T6细胞,倒置显微镜观测经感染的HSC-T6细胞的GFP表达情况,在mRNA与蛋白水平检测重组慢病毒pGreenPuro/TGFβ1shRNA对HSC-T6细胞的TGFβ1基因的沉默效应及对Col1a1表达与分泌的影响. 结果:筛选到TGFβ1基因的最佳干扰靶序列.酶切与测序证实,成功构建pGreenPuro/TGFβ1shRNA慢病毒载体.该慢病毒载体能在mRNA与蛋白水平有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1,并抑制Col1a1的表达与分泌. 结论:成功构建大鼠TGFβ1基因RNA干扰慢病毒载体,该载体能有效沉默HSC-T6细胞的TGFβ1基因,并抑制Col1a1的表达与分泌.

关键词：肝纤维化慢病毒载体技术肝星状细胞转化生长因子β1基因 Ⅰ型胶原基因表达

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类固醇受体辅激活因子3的促瘤作用研究

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医学综述 2014年第5期20卷 819-822页

作者：金婕(综述) 粟永萍(审校) 第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

类固醇受体辅激活因子3(SRC-3)是一类与转录激活有关的蛋白辅助因子,通过与激素激活的核受体和其他一些特定的转录因子结合,参与调控机体的生长发育、能量代谢、细胞增殖、存活以及迁徙等过程。近年来,SRC-3广泛的促瘤作用更成为研究热... 详细信息

类固醇受体辅激活因子3(SRC-3)是一类与转录激活有关的蛋白辅助因子,通过与激素激活的核受体和其他一些特定的转录因子结合,参与调控机体的生长发育、能量代谢、细胞增殖、存活以及迁徙等过程。近年来,SRC-3广泛的促瘤作用更成为研究热点。SRC-3蛋白不仅与核受体相互作用,还与多种转录因子结合,通过多条信号通路促进靶基因的转录,进而调控细胞生长、促进细胞增殖,在一些激素相关和非激素相关的癌症中发挥促瘤作用。该文就SRC-3作为促癌因子与肿瘤的相关性及其促增殖途径予以综述。

关键词：类固醇受体辅激活因子3 转录激活促瘤增殖

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^(125)I标记重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内分布的实验研究

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局解手术学杂志 2014年第3期23卷 221-224页

作者：申明强陈默王崧粟永萍王军平第三军医大学预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米医药工程技术研究中心重庆400038

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30... 详细信息

目的研究重组融合蛋白dTMP-GH在小鼠体内的分布情况,明确其是否具有靶向分布特点。方法实验室制备dTMP-GH重组融合蛋白;用放射性125I标记融合蛋白dTMP-GH后,按100μg/kg的标准小鼠尾静脉注射125I-dTMP-GH,分别于给药后5 min、15 min、30 min、1 h、2 h、4 h、8 h、12 h、24 h取心、肝、脾、肾、股骨、甲状腺等进行放射性计数。结果制备得到纯度大于98%的重组融合蛋白dTMP-GH;125I标记率为71.53%,放化纯度为96.53%,比活度为0.22 MBq/μl;尾静脉注射125I标记的dTMPGH后30 min股骨的放射性计数占到注射总量的10%,并随时间推移经肝脏和肾脏代谢。结论融合蛋白dTMP-GH经尾静脉注射后在小鼠体内主要分布于骨髓,具有骨髓组织偏向分布特点。

关键词： 125I标记 dTMP-GH 血小板小鼠

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