检索结果-内蒙古大学图书馆

生物工程学报 2008年第2期24卷 291-296页

作者：王艾平粟永萍程天民邹仲敏王军平第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

采用PCR扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mHD-5)密码子序列,并将其克隆至pMAL-p2x质粒,构建pMAL-p2x-mHD-5表达载体,转化大肠杆菌BL_(21)(DE_3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换... 详细信息

采用PCR扩增大肠杆菌偏好的人α防御素5成熟肽(mHD-5)密码子序列,并将其克隆至pMAL-p2x质粒,构建pMAL-p2x-mHD-5表达载体,转化大肠杆菌BL_(21)(DE_3),诱导表达,SDS-PAGE分析目的蛋白表达量并优化表达条件。经亲和层析、酶切和离子交换层析等方法分离、纯化重组mHD-5(rmHD-5)多肽。采用浊度法测定rmHD-5对细菌的抑制活性。通过优化表达条件,获得约30%的可溶性目的蛋白表达量,并成功纯化rmHD-5。rmHD-5对大肠杆菌标准菌株(ATCC25922)具有较强的抑制活性,在终浓度为62.5μg/mL时,90%以上的细胞被抑制。结果表明采用可溶性融合表达策略,在原核表达系统中诱导表达并纯化具有生物活性的防御素是可行的途径之一。

关键词：防御素原核表达纯化生物活性

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骨髓源性干细胞的异质性及在肠道修复中的作用研究进展

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中国修复重建外科杂志 2008年第9期22卷 1130-1134页

作者：刘登群粟永萍第三军医大学军事预防医学院防原教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的对骨髓源性干细胞(bone marrow derived stem cells,BMDSCs)的异质性及其形成机制和意义进行综述,分析其在肠上皮重建中的作用和可能机制。方法查阅和分析近年有关BMDSCs异质性和其在肠上皮损伤修复中作用的相关文献,并作进一步综... 详细信息

目的对骨髓源性干细胞(bone marrow derived stem cells,BMDSCs)的异质性及其形成机制和意义进行综述,分析其在肠上皮重建中的作用和可能机制。方法查阅和分析近年有关BMDSCs异质性和其在肠上皮损伤修复中作用的相关文献,并作进一步综合分析。结果BMDSCs异质性可以解释其多向分化能力,可能以直接定植于肠道或通过和肠道干细胞融合以及促进损伤微环境的重建等多种机制参与肠上皮功能修复。结论BMDSCs在炎症性肠病等胃肠道损伤和修复中具有广阔的应用前景。

关键词：骨髓源性干细胞异质性肠上皮上皮下肌成纤维细胞炎症性肠病

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防御素基因工程制备研究进展

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微生物学通报 2008年第3期35卷 436-442页

作者：王艾平王军平粟永萍第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,... 详细信息

本文综述了防御素在重组表达与制备方面的主要进展,包括在原核细胞表达时宿主菌、载体、表达策略的选择,在酵母等真核细胞中进行重组表达的优缺点,以及重组防御素纯化研究的现状。本文还概括了当前防御素研发与临床应用面临的主要问题,将来的研究方向和开发前景。

关键词：防御素重组表达纯化工艺生物活性

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小鼠肌肉组织特异性微小RNA miR-133a腺病毒表达载体的构建及表达

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西安交通大学学报（医学版） 2008年第3期29卷 265-268页

作者：王涛艾国平粟永萍第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的制备小鼠肌肉组织特异性微小RNA miR-133a的腺病毒表达载体并观察其在HeLa细胞的表达。方法利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增miR-133a前体对应的基因组片段,克隆到质粒pAdTrack-CMV,而后以同源重组的形式插入到腺病毒表达载体,由人胚... 详细信息

目的制备小鼠肌肉组织特异性微小RNA miR-133a的腺病毒表达载体并观察其在HeLa细胞的表达。方法利用PCR技术从小鼠基因组DNA扩增miR-133a前体对应的基因组片段,克隆到质粒pAdTrack-CMV,而后以同源重组的形式插入到腺病毒表达载体,由人胚肾293细胞包装,获得有感染能力的重组腺病毒颗粒。重组腺病毒感染HeLa细胞后,利用Northern blot检测miR-133a成熟分子的表达。结果①成功构建穿梭质粒pAdTrack-miR-133a;②成功构建重组腺病毒质粒pAdeasy-miR-133a;③293细胞包装获得有感染能力的重组腺病毒;④转染的HeLa细胞能够高效表达成熟miR-133a。结论构建了小鼠miR-133a的腺病毒表达载体,证实其转染HeLa后的表达,为后续研究miR-133a的功能打下了基础。

关键词：腺病毒 miR-133a HeLa

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含邻苯二酚基团的黄酮化合物促排急性贫铀中毒效果的研究

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第三军医大学学报 2008年第24期30卷 2251-2253页

作者：李蓉任洞杨峥嵘刘晶艾国平徐辉粟永萍程天民第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的寻找对急性贫铀中毒促排效果较好的含邻苯二酚基团的黄酮类化合物。方法给予Wistar大鼠贫铀20mg/kg,立即给予黄酮类化合物10mg/kg,连续3d,并设邻苯二酚类化合物8102及DMSO做为对照。3d后做肾功能检测和肾脏、肝脏、骨髓、脾脏等病... 详细信息

目的寻找对急性贫铀中毒促排效果较好的含邻苯二酚基团的黄酮类化合物。方法给予Wistar大鼠贫铀20mg/kg,立即给予黄酮类化合物10mg/kg,连续3d,并设邻苯二酚类化合物8102及DMSO做为对照。3d后做肾功能检测和肾脏、肝脏、骨髓、脾脏等病理观察。结果8102和F1组血清肌酐和尿素氮含量显著下降,F2、T1和T2组的肌酐浓度也显著降低。病理观察显示,T2组肾脏、肝脏几乎无明显损伤;8102和T1次之;F1和QU组肾损伤较重;DMSO组的损伤最重,但较贫铀组轻。结论T2对贫铀敏感器官的保护最好;F1可改善肾功能。这两种化合物均具有做为贫铀促排剂的潜能。

关键词：贫铀促排黄酮类化合物邻苯二酚基团

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贫铀长期摄入对大鼠肾脏损伤效应的研究

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第三军医大学学报 2008年第18期30卷 1686-1689页

作者：冷言冰李蓉艾国平徐辉粟永萍程天民第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的研究贫铀摄入后不同时相点对大鼠肾脏的损伤效应。方法雄性Wistar大鼠40只,其中20只以含有50μg/L和70μg/kg的贫铀饮水及饲料喂食大鼠作为摄入组。观察大鼠接触贫铀后3、6、12、18个月大鼠肾脏超微结构和病理形态学改变,肾功能检... 详细信息

目的研究贫铀摄入后不同时相点对大鼠肾脏的损伤效应。方法雄性Wistar大鼠40只,其中20只以含有50μg/L和70μg/kg的贫铀饮水及饲料喂食大鼠作为摄入组。观察大鼠接触贫铀后3、6、12、18个月大鼠肾脏超微结构和病理形态学改变,肾功能检测和胶原染色,并采用免疫荧光和蛋白印记杂交检测肾脏不同时间段纤维化相关因子TGF-β1、Smad、TIMP和MMP-9表达。结果大鼠摄入贫铀后不同时间段大鼠肾脏出现不同程度的病理改变,表现为肾小球固缩、后继肾小管萎缩和局部肾间质纤维组织增生以及炎性细胞浸润。纤维化程度随接触时间延长而加重。胶原染色显示胶原分布主要位于肾小管周围,且具有区域性。Western blot分析显示贫铀接触后大鼠肾脏中TGF-β1等纤维化相关因子蛋白含量均有不同程度的增加(P<0.05)。结论贫铀长时间暴露后大鼠肾脏可出现病理学及超微结构的改变,TGF-β1、Smad、TIMP和MMP-9均参与了其纤维化进程。

关键词：贫铀肾脏纤维化毒性

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重组融合蛋白rTMP-GH在巴斯德毕赤酵母中表达的研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2037-2040页

作者：王崧王军平陈默许杨陈芳申明强王艾平粟永萍开丽第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的实现TPO模拟肽(throm bopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(human growth hormone,hGH)的重组融合蛋白rTMP-GH在巴氏毕赤酵母中的高效表达。方法以含有rTMP-GH核苷酸序列的原核质粒为模板,PCR方法获得rTMP-GH的编码序列,并... 详细信息

目的实现TPO模拟肽(throm bopoietin mimetic peptide,TMP)与人生长激素(human growth hormone,hGH)的重组融合蛋白rTMP-GH在巴氏毕赤酵母中的高效表达。方法以含有rTMP-GH核苷酸序列的原核质粒为模板,PCR方法获得rTMP-GH的编码序列,并亚克隆至载体pPIC9K中,将所构建pPIC9K-rTMP-GH表达质粒转化酵母宿主细胞GS115,MD/MM平板及G418抗性筛选高表达株,然后进行试管补料分批表达,Western blot对表达产物进行鉴定,通过巨核细胞集落形成能力对其生物学活性进行初步检测。结果成功构建pPIC9K-rTMP-GH表达质粒,筛选到高表达rTMP-GH重组融合蛋白的巴氏毕赤酵母细胞株,初步证实所表达产物具有刺激巨核细胞集落形成的能力。结论成功实现了rTMP-GH融合蛋白在巴氏毕赤酵母中的高效表达。

关键词： rTMP—GH 毕赤酵母表达

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微小RNA分子miR-21和miR-22对C2C12细胞成肌分化影响的研究

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第三军医大学学报 2008年第9期30卷 803-806页

作者：王涛艾国平邹仲敏王军平冉新泽徐辉粟永萍第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨微小RNA(microRNAs)分子miR-21和miR-22对于C2C12细胞体外成肌分化进程的影响。方法以C2C12细胞体外成肌分化为模型,Northern blot检测miR-21和miR-22两个分子在分化过程中的表达变化及组织表达谱,转染DNA/LNA杂合体反义链进行l... 详细信息

目的探讨微小RNA(microRNAs)分子miR-21和miR-22对于C2C12细胞体外成肌分化进程的影响。方法以C2C12细胞体外成肌分化为模型,Northern blot检测miR-21和miR-22两个分子在分化过程中的表达变化及组织表达谱,转染DNA/LNA杂合体反义链进行loss-of-fuction功能研究,RT-PCR分析其对分化相关分子的影响。结果成功建立C2C12细胞体外成肌分化模型,2个分子在分化过程中均表达上调,且它们具有各自的组织分布特点;建立了以DNA/LNA杂合体反义链为手段的microRNAs研究的loss-of-fuction平台;与对照组比较,抑制这2个microRNAs对于成肌分化相关的骨骼肌α-肌动蛋白、成肌素和MEF-2D等分子的表达没有影响。结论抑制miR-21和miR-22在C2C12细胞成肌分化过程中的上调不影响其分化,说明这2个分子对于分化的进程影响不大。

关键词：微小RNA C2C12 成肌分化

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小鼠胚胎间充质干细胞系C3H／10T1／2的多向分化潜能研究

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第三军医大学学报 2008年第21期30卷 2029-2033页

作者：王明科邹仲敏粟永萍罗成基王军平冉新泽王涛闫国和第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型。方法用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维... 详细信息

目的建立小鼠胚胎间充质干细胞系C3H/10T1/2细胞成肌、成脂、成内皮、成神经元分化的细胞实验模型。方法用化学诱导剂5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/2细胞成肌、成脂,血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)联合诱导C3H/10T1/2细胞成内皮,bFGF、β-巯基乙醇(β-mercaptoethanol,β-ME)、DMSO诱导C3H/10T1/2细胞成神经元细胞分化。诱导期间应用细胞形态学观察、油红"O"染色、免疫细胞化学染色检测内皮细胞表面标志CD31和神经元特异性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)对分化细胞进行鉴定。结果5-氮杂胞苷诱导C3H/10T1/210d后细胞变长,17d后可见明显肌管形成,15d少量细胞出现脂滴,25d油红"O"染色见细胞质大量红色脂滴;VEGF和bFGF诱导5d后细胞呈现"鹅卵石"样形态,8d后阳性表达CD31;bFGF、β-巯基乙醇和DMSO联合诱导3d后细胞胞体收缩,突起变长,15dNSE染色阳性。结论C3H/10T1/2细胞具有多向分化的潜能,可用作研究间充质干细胞生物学特性的模型。

关键词： C3H/10T1/2 成肌分化成脂分化成内皮分化成神经元分化

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对急性贫铀中毒的促排措施研究

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第三军医大学学报 2008年第6期30卷 461-464页

作者：李蓉任泂冷言冰杨峥嵘艾国平徐辉粟永萍程天民第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的比较常见的几种贫铀促排剂,寻找高效低毒的药物或组合方案。方法分别在给予贫铀溶液前1h、立即、延迟4h给予碳酸氢钠、Tiron、dimethylthiourea(DMTU)和diethylenetriaminepenta-methylene phosphonic acid(DTPMP)及相应的组合方案,并在3d后进行肾功能检测及病理学观察。结果提前给药,血清尿素氮和肌酐浓度下降程度显著(P<0·05),下降最明显的是NaHCO3+DMTU组和单用DTPMP组;立即给药,尿素氮和肌酐显著降低的是NaHCO3+DM-TU组、单用NaHCO3组和单用Tiron组(P<0·05);延后给药,肾功能均未见明显改善(P>0·05)。提前给药和立即给药,NaHCO3+DMTU组肾脏病变最轻;延后给药,病变比提前给药和立即给药的严重,其中以单用Tiron组肾脏病变最轻。结论急性贫铀中毒时,提前1h和立即给药时,NaHCO+DMTU合用效果较好;延后4h给药,单用Tiron的效果相对较好。

关键词：贫铀促排肾功能碳酸氢钠

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