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第三军医大学学报 2011年第5期33卷 463-468页

作者：夏章权张从纪王涛第三军医大学西南医院口腔科重庆400038 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的构建人血管内皮生长因子165(vascular endothelial growth factor,VEGF165)和人β防御素3(humanbeta defensins,HBD3)双基因共表达真核质粒载体、观察其在293FT细胞中的表达,并检测其活性。方法利用RT-PCR方法分别从白血病细胞(HL60)和牙龈组织中扩增出VEGF165和HBD3基因片段,通过DNA重组技术将基因片段先后重组于pVIVO1-mcs真核表达载体上,构建成pVIVO1-VEGF165-HBD3重组质粒载体,分别用酶切电泳分析及DNA测序的方法对重组质粒载体进行鉴定。运用脂质体转染的方法将重组质粒转染293FT细胞后,RT-PCR和Western blot法检测目的基因的表达。用转染重组质粒的293FT无血清上清刺激内皮细胞***926增殖,CCK-8法检测其增殖效应。取转染重组质粒的293FT无血清上清的浓缩液,采用K-B纸片扩散法进行抗菌活性实验。结果①酶切电泳分析得到相应的目的片段,大小与理论计算值一致,DNA测序证实目的基因序列正确无突变,成功构建真核表达质粒载体pVIVO1-VEGF165-HBD3。②RT-PCR和Western blot法分别从mRNA和蛋白质2个水平证实:转染重组质粒的293FT细胞高表达VEGF165和HBD3。③转染重组质粒的293FT无血清上清明显促进内皮细胞***926的增殖,证实了表达分泌出的VEGF165的活性。转染重组质粒的293FT无血清上清的浓缩液对大肠埃希菌(escherichia coli,EC)(ATCC 25922)、金黄色葡萄球菌(staphylococcus aureus,SA)(ATCC 25923)、绿脓杆菌(pseudomonas aeruginosa,PA)(ATCC 27853)和枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis,BS)(ATCC62037)产生明显的抑菌环,证实了表达分泌出的HBD3的活性。结论构建了pVIVO1-VEGF165-HBD3双基因共表达真核质粒载体,证实其转染293FT细胞后双基因的表达和活性。

关键词：血管内皮生长因子165 人β防御素3 基因表达

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鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的作用及其机制研究

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第三军医大学学报 2011年第3期33卷 274-277页

作者：艾志波张荣华闫国和粟永萍艾国平第三军医大学:西南医院中西医结合科重庆400038 第三军医大学:军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(k... 详细信息

目的探讨鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(hepatic fibrosis,HF)的作用及其机制。方法 SD雄性大鼠90只,随机分6组,每组15只,其中以40%CCl4处理(3 ml/kg)8周复制中毒肝纤维化模型(模型组),复制模型的同时分别用鳖甲煎改良方高剂量组28.4 g/(kg.d)、中剂量组14.2 g/(kg.d)、低剂量组7.1 g/(kg.d)灌胃治疗并且以复方鳖甲软肝片灌胃0.6 g/(kg.d)作阳性对照组治疗6周。以复制模型同样方式与用量于右后腿皮下注射橄榄油及生理盐水灌胃(10 ml/kg.d)作空白对照组。苏木精-伊红(HE)染色观察各组8周后肝纤维化变化程度,RT-PCR检测其转化生长因子β1(transforming growth factor beta one,TGF-β1)、Smad3及Smad7变化,免疫组化(S-P法)观测TGF-β1、smad3、smad7表达情况。结果 8周后,与模型组比较,鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组肝小叶结构破坏明显减轻,部分肝细胞脂肪变性,炎性细胞浸润与少量胶原纤维形成;肝组织TGF-β1与Smad3的mRNA及蛋白表达显著减少(P<0.01),smad7 mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01)且鳖甲煎改良方高、中、低剂量组和复方鳖甲软肝片组疗效并无显著差异。结论鳖甲煎改良方能显著改善大鼠肝纤维化,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β/smad信号通路有关。

关键词：鳖甲煎改良方肝纤维化 TGF-β1 Smad3 Smad7

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干扰素诱导蛋白IFIT1的克隆与原核可溶性表达

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重庆医学 2011年第19期40卷 1873-1875页

作者：李洪涛粟永萍徐建明冉新泽王军平艾国平程天民第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 Dept.of Molecular and Cellular Biology Baylor College of MedicineHouston

目的研究干扰素诱导蛋白IFIT1的原核可溶性表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得IFIT1编码序列,克隆入原核表达载体,电穿孔转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,诱导细菌表达,蛋白凝胶电泳观察。结果构建的原核表达平台实现了较丰富的... 详细信息

目的研究干扰素诱导蛋白IFIT1的原核可溶性表达。方法通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)获得IFIT1编码序列,克隆入原核表达载体,电穿孔转化大肠杆菌,筛选阳性克隆,诱导细菌表达,蛋白凝胶电泳观察。结果构建的原核表达平台实现了较丰富的麦芽糖结合蛋白融合IFIT1(MBP-IFIT1)可溶性表达。结论 MBP-IFIT1的原核可溶性表达为后续IFIT1蛋白结合分析及免疫分析提供了材料及方法学基础。

关键词：创伤和损伤细胞应激重组原核表达

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电离辐射诱导小鼠小肠隐窝和绒毛的基因表达分析

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第三军医大学学报 2011年第13期33卷 1318-1322页

作者：程晋王锋超孙慧勤赵吉清粟永萍陈俊杰邹仲敏第三军医大学军事预防医学院防化医学教研室重庆400038 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 Department of Experimental Radiation Oncology Division of Radiation OncologyThe University of Texas MD Anderson Cancer Center

目的通过基因表达的芯片分析方法,观察电离辐射引起的小鼠小肠上皮隐窝和绒毛基因表达的改变,探讨隐窝细胞的DNA损伤和修复、细胞周期调控的特点。方法 20只5周龄C57/BL6小鼠雄性20～22 g,随机分组,对照组不经电离辐照,处理组经12 Gy电... 详细信息

目的通过基因表达的芯片分析方法,观察电离辐射引起的小鼠小肠上皮隐窝和绒毛基因表达的改变,探讨隐窝细胞的DNA损伤和修复、细胞周期调控的特点。方法 20只5周龄C57/BL6小鼠雄性20～22 g,随机分组,对照组不经电离辐照,处理组经12 Gy电离辐射全身照射后,于4、8、24 h分离小肠隐窝和绒毛上皮细胞,用cDNA表达谱芯片分别检测隐窝和绒毛基因表达的动态变化,对上调或下调的基因进行聚类分析,并重点对DNA损伤修复相关和细胞周期相关基因进行分析。结果与对照组相比上调或下调2倍以上的基因(P<0.01)经聚类分析被归属为各细胞信号通路,其中主要涉及p53通路、MAPK通路、凋亡、细胞周期以及免疫反应(P<0.05),将P值排序发现p53通路、MAPK通路对隐窝的调控更为明显。各DNA修复途径代表基因在隐窝和绒毛中均有不同程度的上调表达,且与细胞周期的变化相一致。基因表达特点提示隐窝细胞以准确性高的方式(核苷酸外切修复、同源重组)进行DNA损伤修复,而绒毛细胞则以快速但易发生错误修复的方式(错配修复)恢复基因的完整性。结论电离辐射诱导的DNA损伤反应与细胞分化程度相关,隐窝细胞对损伤更敏感。

关键词：电离辐射小肠上皮 DNA损伤细胞周期信号通路

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BMDCs多途径参与肺损伤修复的实验研究

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重庆医学 2011年第21期40卷 2102-2103,2124,I0002,I0001页

作者：罗丹刘登群刘国祥第三军医大学西南医院呼吸科重庆400038 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室/全军复合伤研究所/创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的观察骨髓来源细胞(BMDCs)通过多途径在不同时间点参与肺损伤修复的作用。方法构建FVB/NJ小鼠博莱霉素诱导肺损伤模型,24 h或21 d后接受BMDCs或空培养基尾静脉注射,第7、14、21和28天取材,行HE染色、马森染色、羟脯氨酸含量检测和肿... 详细信息

目的观察骨髓来源细胞(BMDCs)通过多途径在不同时间点参与肺损伤修复的作用。方法构建FVB/NJ小鼠博莱霉素诱导肺损伤模型,24 h或21 d后接受BMDCs或空培养基尾静脉注射,第7、14、21和28天取材,行HE染色、马森染色、羟脯氨酸含量检测和肿瘤细胞坏死因子-α(TNF-α)的Western blot检测。同时构建GFP骨髓嵌合小鼠模型,放射性肺损伤1个月后肺组织取材进行免疫荧光双标。结果早期输入BMDCs能明显缓解博莱霉素导致的肺组织炎细胞浸润和肺泡破坏等病理改变,降低各个时间点的羟脯氨酸含量至第21天达到最低值(P<0.05),在第7天明显下调肺内TNF-α的含量(P<0.05)。推迟BMDCs输入的肺组织病理改变与对照组无差异。放射性肺损伤后1月,骨髓嵌合鼠中可见绿色荧光蛋白(GFP)与广谱细胞角蛋白(PCK)双阳性的BMDCs来源支气管上皮细胞和GFP与表面蛋白C(SPC)双阳性的BMDCs来源Ⅱ型肺泡上皮。结论早期输入BMDCs能通过多途径明显缓解放化疗引起的肺损伤。晚期输入BMDCs没有加重肺纤维化,对肺损伤也无缓解作用。

关键词：骨髓来源细胞肺损伤小鼠

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鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化的防治作用

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世界华人消化杂志 2011年第1期19卷 13-18页

作者：艾志波张荣华闫国和中国人民解放军第三军医大学西南医院中西医结合科重庆市400038 中国人民解放军第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市400038

目的:研究鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(HF)的防治作用及对TGF-β1和Sman3/7蛋白表达的影响,探讨其机制.方法:SD♂大鼠90只,随机取10只作为正常对照组(A组),其余大鼠用皮下注射40%CCl4橄榄油油剂3mL/kg诱导大鼠肝纤维化模型8wk,于第2周... 详细信息

目的:研究鳖甲煎改良方对大鼠肝纤维化(HF)的防治作用及对TGF-β1和Sman3/7蛋白表达的影响,探讨其机制.方法:SD♂大鼠90只,随机取10只作为正常对照组(A组),其余大鼠用皮下注射40%CCl4橄榄油油剂3mL/kg诱导大鼠肝纤维化模型8wk,于第2周时随机处死5只大鼠证实HF形成后,将剩下的大鼠随机分为肝纤维化模型组(B组)、鳖甲煎改良方高剂量组[C组,28.4g/(kg·d)]、中剂量组[D组,14.2g/(kg·d)]、低剂量组[E组,7.1g/(kg·d)]、复方鳖甲软肝片组[F组,0.6g/(kg·d)],每组15只.C、D、E、F组给予10mL/(kg·d)相应药液灌胃治疗,A、B组同时给予等剂量的生理盐水灌胃处理.8wk后采血测定血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、草氨酸氨基转移酶(AST)、白蛋白和球蛋白含量;取肝组织作HE染色观察肝纤维化程度变化;Westernblot方法检测TGF-β1、Smad3和Smad7蛋白的表达.结果:8wk后,与B组比较,C、D、E组和F组肝小叶结构破坏明显减轻,肝纤维化程度分级较B组明显好转;ALT和AST含量显著降低(P<0.01),白蛋白含量显著增加(37.85g/L±3.08g/L,38.25g/L±1.90g/L,38.13g/L±1.50g/L,38.09g/L±3.27g/Lvs27.05g/L±4.81g/L,均P<0.01);TGF-β1、Smad3蛋白表达显著减少(TGF-β1:0.127±0.014,0.122±0.051,0.126±0.027,0.119±0.020vs0.332±0.074,均P<0.01;Smad3:0.415±0.057,0.427±0.074,0.425±0.080,0.432±0.075vs0.527±0.054,均P<0.01),Smad7蛋白的表达明显增加(0.308±0.077,0.326±0.086,0.315±0.071,0.348±0.065vs0.185±0.059,均P<0.01),且C、D、E组和F组间疗效比较无明显差异.结论:鳖甲煎改良方能够显著减轻CCl4导致的大鼠肝纤维化程度,其作用机制可能与鳖甲煎改良方调控TGF-β1和Sman3/7信号转导蛋白表达有关.

关键词：鳖甲煎改良方肝纤维化转化生长因子β1 Smad3 Smad7

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成年C57BL/6小鼠空肠Cajal间质细胞的分离、培养及鉴定

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胃肠病学和肝病学杂志 2011年第6期20卷 538-541页

作者：刘登群龙爽王军平史春梦冉新泽粟永萍第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的尝试优化体外培养成年小鼠小肠Cajal间质细胞的操作方法,为深入研究该细胞的生理功能提供一定细胞模型。方法 6～8周龄C57BL/6小鼠禁食24 h,无菌条件下截取3～5 cm中段空肠,分离平滑肌肌条并剪至小块后使用Ⅱ型胶原酶消化20 min,离... 详细信息

目的尝试优化体外培养成年小鼠小肠Cajal间质细胞的操作方法,为深入研究该细胞的生理功能提供一定细胞模型。方法 6～8周龄C57BL/6小鼠禁食24 h,无菌条件下截取3～5 cm中段空肠,分离平滑肌肌条并剪至小块后使用Ⅱ型胶原酶消化20 min,离心后进行组织块原代培养,观察不同时期细胞形态。使用c-Kit免疫荧光染色鉴定细胞表型是否为Cajal间质细胞。Fluo-3 AM染色细胞内钙,观察细胞能否自发产生钙离子振荡。结果分离所得组织不含空肠上皮和固有层组织,仅为小肠肌层。联合使用胶原酶消化和组织块原代培养能够较方便地培养出原代细胞,该细胞呈梭形,且具有细胞突起,彼此交织成网状。该细胞免疫荧光染色呈c-Kit阳性,平滑肌标志物SMA阴性。钙成像分析显示其能够产生钙离子振荡。结论联合使用酶消化和组织块培养能够较方便地培养出成年小鼠的空肠Cajal间质细胞,该方法为后续探讨Cajal间质细胞的生理功能及机制提供了一定的细胞模型。

关键词：胃肠道 Cajal间质细胞原代培养

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医学研究生创新能力的个人培养途径

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2011年第1期13卷 103-105页

作者：刘登群龙爽李蓉粟永萍第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

当今社会对医学专业研究生创新能力的要求越来越高。在施教者努力创造有利于研究生创新能力培养外部条件的同时,医学研究生个人也必须认识到培养自身创新能力是时代对研究生的必然要求,树立创新意识,加强自我管理,注重从多方面提高自身... 详细信息

当今社会对医学专业研究生创新能力的要求越来越高。在施教者努力创造有利于研究生创新能力培养外部条件的同时,医学研究生个人也必须认识到培养自身创新能力是时代对研究生的必然要求,树立创新意识,加强自我管理,注重从多方面提高自身的创新能力。

关键词：研究生教育教学方法自我管理创新能力

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从日本福岛核电站事故谈防原医学教学改革

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山西医科大学学报（基础医学教育版） 2011年第7期13卷 630-632页

作者：刘登群李蓉史春梦王军平孙慧勤冉新泽粟永萍罗成基程天民第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

防原医学是军事预防医学的重要分支学科,主要内容涉及核武器和核事件所致放射损伤的临床表现、诊断和救治措施。随着社会实践的不断发展,越来越多的核相关事件(事故)需要运用防原医学知识进行处理,因此必须对防原医学教学进行相应改革... 详细信息

防原医学是军事预防医学的重要分支学科,主要内容涉及核武器和核事件所致放射损伤的临床表现、诊断和救治措施。随着社会实践的不断发展,越来越多的核相关事件(事故)需要运用防原医学知识进行处理,因此必须对防原医学教学进行相应改革以适应社会发展需要。近期发生的日本福岛核电站事故在全球范围内引起广泛影响和关注,结合此次核事故从教学理念、教学内容、教学形式和考评策略四个方面初步探讨如何进行防原医学教学改革。

关键词：防原医学教学改革核事故创新能力

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贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性的影响

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中国微生态学杂志 2011年第10期23卷 883-886页

作者：任泂唐欢魏泓郝玉徽刘晶李蓉粟永萍第三军医大学军事预防医学院复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的观察贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性的影响。方法通过将不同剂量的贫铀混入饲料中饲养小鼠,以小鼠肝脏和肾脏铀含量作为判断贫铀在动物体内蓄积的指标,建立贫铀经口慢性染毒小鼠模型,观察各组小鼠之间的体重变化,对各组小鼠... 详细信息

目的观察贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性的影响。方法通过将不同剂量的贫铀混入饲料中饲养小鼠,以小鼠肝脏和肾脏铀含量作为判断贫铀在动物体内蓄积的指标,建立贫铀经口慢性染毒小鼠模型,观察各组小鼠之间的体重变化,对各组小鼠进行基于细菌16S rRNA V6-V8区的PCR-DGGE分析。结果食入贫铀的各组小鼠肝脏和肾脏铀含量显著高于对照组(P<0.05),各组小鼠体重差异无统计学意义(P>0.05),各组小鼠V6-V8区DGGE图谱的丰富度和多样性指数差异均无统计学意义(P>0.05)。结论贫铀经口慢性染毒对小鼠肠道菌群多样性无显著影响。

关键词：贫铀慢性染毒肠道菌群多样性

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