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第三军医大学学报 2007年第12期29卷 1155-1157页

作者：张丽龙艾国平粟永萍程天民郑虎翁玲玲第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 四川大学华西药学院药物化学教研室成都610041

目的研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性。方法采用MTT法,以5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein,GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合... 详细信息

目的研究经结构修饰后的异黄酮类化合物F11是否具较好的体外、体内抗癌活性。方法采用MTT法,以5,7,4′-三羟基异黄酮(genistein,GEN)作为对照,研究化合物F11对Hela细胞的抗增殖作用;采用荷瘤裸鼠模型,以GEN和环磷酰胺作为对照,研究化合物F11在体抗癌效应。结果MTT实验结果显示,在相同的作用浓度下,F11处理组Hela细胞形态异常改变,死细胞明显增多,细胞存活率显著低于GEN作用组(P<0.05)。荷瘤动物实验结果表明与GEN相比,F11对Hela细胞裸鼠移植瘤的生长有显著的抑制作用(P<0.01),效果与环磷酰胺相当,且未观察到毒副反应。结论异黄酮类化合物经过特定结构修饰,可显著增强其抗癌效应,有值得进一步研究开发的潜在价值。

关键词：异黄酮 Hela MTT 裸鼠

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SELEX技术筛选钙通道特异性核酸适配体及其抗肥大细胞活化的作用

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第三军医大学学报 2014年第4期36卷 307-312页

作者：杨永强陈晓红李怡然陈波冉新泽杨涛孙仁山第三军医大学大坪医院野战外科研究所皮肤科重庆400042 第三军医大学药学系药理学教研室重庆400038 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用聚苯乙烯... 详细信息

目的筛选针对Orai1分子第1膜外区蛋白的核酸适配体,探讨适配体通过拮抗钙离子释放激活通道(Ca2+release activation channel,CRAC)抑制肥大细胞活化的效应。方法构建随机单链DNA文库,利用不对称PCR对单链DNA文库进行扩增。采用聚苯乙烯酶联板为介质的指数富集配体系统进化(systematic evolution of ligand by exponential enrichment,SELEX)技术筛选核酸适配体。利用酶联免疫吸附实验检测各轮筛选序列与靶蛋白的亲和力,验证适配体与靶蛋白的特异性结合;激光共聚焦显微镜观察适配体对细胞内钙离子浓度变化的影响;利用IgE介导的肥大细胞脱颗粒模型,观察适配体对β-氨基己糖苷酶释放的抑制效应。结果经过12轮SELEX筛选,获得了7条核酸适配体,其中AptamerY1解离常数(Kd值)为1.72×10-8mol/L。以终浓度2μg/mL的AptamerY1可抑制由IgE介导的人肥大细胞系LAD2钙离子内流,并对LAD2细胞的β-氨基己糖苷酶释放抑制率达95%。结论通过SELEX筛选,获得了7条针对Orai1分子第1膜外区的核酸适配体,所获得适配体可对肥大细胞LAD2钙内流有效抑制,进而抑制肥大细胞活化和β-氨基己糖苷酶的释放。

关键词：肥大细胞 SELEX适体技术钙离子释放激活通道 β-氨基己糖苷酶

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创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子和中性粒细胞趋化因子差异表达的研究

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第三军医大学学报 2006年第17期28卷 1742-1745页

作者：江德鹏向静文亮粟永萍屈纪富冉新泽第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室、全军复合伤研究所、创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学大坪医院野战外科研究所神经内科重庆400042 第三军医大学西南医院急诊科重庆400038

目的研究真皮间充质干细胞(dermal mesenchymal stem cells, dMSCs)参与创伤修复中白细胞蛋白酶抑制因子(secretory leukocyte protease inhibitor, SLPI)和中性粒细胞趋化因子(cytokine-induced neutrophil chemoattractant-2, CINC-2)的差异表达,并探讨其相关功能。方法采用前期建立的技术分离、纯化并扩增dMSCs,通过RT-PCR检测创伤修复时SLPI和CINC-2在dMSCs中表达,通过3H-TdR掺入实验研究SLPI和dMSCs有丝分裂的关系,利用Boyden趋化小室研究dMSCs对中性粒细胞的趋化作用。结果分离的大鼠dMSCs呈梭形,在体外显示多向分化潜能。RT-PCR提示伤口液刺激24 h后dMSCs中SLPI,CINC-2表达升高,同时检测到在全层切割伤后1 d大鼠皮肤组织中SLPI和CINC-2均为高表达,3H-TdR掺入实验提示SLPI能够促进dMSCs的有丝分裂,趋化小室实验显示dMSCs对中性粒细胞有趋化作用,加入中和抗体后趋化作用减弱。结论创伤后SLPI,CINC-2在dMSCs中表达升高,其表达升高可能同dMSCs的增殖和趋化有关。

关键词：干细胞差异表达白细胞蛋白酶抑制因子中性粒细胞趋化因子

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颈交感神经阻滞调节放烧复合伤小鼠巨噬细胞GR的表达及细胞因子分泌的影响

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第三军医大学学报 2007年第4期29卷 284-286页

作者：陆建华粟永萍陶军叶建宁第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院麻醉科重庆400037 第三军医大学新桥医院神经内科重庆400037

目的探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic ganglia block,SB)在放烧复合伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为单纯放烧复... 详细信息

目的探讨颈交感神经阻滞(cervical sympathetic ganglia block,SB)在放烧复合伤小鼠腹腔巨噬细胞糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)表达及炎性细胞因子分泌中的作用。方法TBSA15%Ⅲ度烧伤合并5Gy放射损伤小鼠分为单纯放烧复合伤组、放烧复合伤后单侧颈部SB治疗组、放烧复合伤后双侧颈部SB治疗组,另设正常对照组,每组8只,比较各组巨噬细胞GR水平及巨噬细胞分泌炎性细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的差异。结果单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞GR蛋白水平均显著高于放烧复合伤组(P<0.01),单侧及双侧SB组腹腔巨噬细胞分泌TNF-α、IL-1β、IL-6的作用均显著低于放烧复合伤组(P<0.05)。放烧复合伤后颈部单侧SB组与双侧SB组间巨噬细胞GR蛋白水平及TNF-α、IL-1β、IL-6的表达释放无明显差异(P>0.05)。结论单侧或双侧颈部SB均可改善放烧复合伤巨噬细胞GR功能,抑制其过度分泌炎性细胞因子。

关键词：颈交感神经节阻滞放烧复合伤巨噬细胞,糖皮质激素受体细胞因子

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新型斑蝥素类似物LB1协同阿霉素杀伤肝癌细胞的实验研究

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第三军医大学学报 2012年第6期34卷 522-525页

作者：王得春谭旭张二龙王曙光史春梦第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆市纳米工程研究中心重庆400038 第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所重庆400038

目的通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用。方法体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤... 详细信息

目的通过水溶性化学小分子蛋白磷酸酶2A抑制剂LB1与阿霉素(doxorubicin,DOX)联合应用,研究其在肝癌化疗过程中的协同作用。方法体外细胞活性分析检测不同剂量LB1对HepG2细胞活性影响及其与阿霉素(DOX)的协同杀伤效应;通过裸鼠体内荷瘤模型以及组织化学分析,进一步观察LB1对肿瘤生长影响以及在体与阿霉素的协同化疗作用。结果 LB1对HepG2细胞生长与作用剂量相关,低剂量时可促进其生长,高剂量时则促进其凋亡,而且在联合阿霉素后,可显著提高对HepG2肿瘤细胞的杀伤作用;体内实验也发现,单纯给予阿霉素抑瘤率为57%,而LB1联合应用后,抑瘤率可达77%,显著提高了阿霉素对肿瘤的杀伤作用(P<0.05),且无明显毒副作用。结论 LB1联合应用可显著提高阿霉素(DOX)对肝癌细胞的化学杀伤作用。

关键词：斑蛰素衍生物 PP2A抑制剂 LB1 阿霉素 HepG2细胞

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高渗和低渗造影剂对大鼠肾动脉内皮功能的影响及意义

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第三军医大学学报 2006年第16期28卷 1713-1715页

作者：赵景宏黄岚王军平晋军宋耀明陈剑飞武晓静周健于世勇第三军医大学新桥医院心血管内科全军心血管内科中心重庆400037 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨不同类型和剂量的造影剂对大鼠肾动脉内皮功能的影响和内皮细胞损伤情况,为造影剂肾病的发生及防治提供研究资料。方法肾动脉血管环在含不同剂量高渗造影剂泛影葡胺和低渗造影剂碘佛醇的IMDM培养液中孵育1h,Griess法和放免法分... 详细信息

目的探讨不同类型和剂量的造影剂对大鼠肾动脉内皮功能的影响和内皮细胞损伤情况,为造影剂肾病的发生及防治提供研究资料。方法肾动脉血管环在含不同剂量高渗造影剂泛影葡胺和低渗造影剂碘佛醇的IMDM培养液中孵育1h,Griess法和放免法分别检测培养液中一氧化氮(nitricoxide,NO)和内皮素(endothelin-1,ET-1)的含量,并用化学发光法检测血管内皮细胞乳酸脱氢酶(lactatedehydrogenase,LDH)的释放情况。结果肾动脉血管环在含泛影葡胺和碘佛醇的培养液中孵育1h后,NO分泌无明显变化,而ET-1分泌增加,且呈剂量依赖性。孵育4h后,泛影葡胺90μl/ml组肾动脉内皮LDH释放显著增加;碘佛醇各剂量组引起的LDH释放增加没有统计学意义。结论高渗造影剂泛影葡胺和低渗造影剂碘佛醇都可以影响肾动脉内皮功能,这一作用可能主要与ET-1分泌增加有关,而NO的分泌没有明显改变。泛影葡胺对肾动脉内皮功能的影响比碘佛醇严重,大剂量的泛影葡胺在一定时间内还可以导致孵育的肾动脉内皮细胞损伤。

关键词：造影剂肾动脉内皮一氧化氮内皮素乳酸脱氢酶

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修饰GLP2分泌性表达载体的构建及促增殖活性测定的实验研究

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第三军医大学学报 2007年第17期29卷 1650-1653页

作者：谭虎杨天德粟永萍艾国平黄岚陶军刘晓宏楼淑芬第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学新桥医院麻醉科重庆400037 第三军医大学新桥医院全军心血管病研究所重庆400037

目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-... 详细信息

目的对胰高血糖素样肽-2(glucagon-like peptid-2,GLP-2)进行基因修饰,观察其促细胞增殖活性。方法通过RT-PCR方法获得含GLP2编码序列的高血糖素原cDNA片段;通过PCR重叠延伸技术得到GLP2信号肽及成熟肽的嵌合分子,并将编码GLP2成熟肽N-末端第二位丙氨酸的序列(GCT)突变为编码甘氨酸的序列(GGT);将其插入真核表达质粒pVITRO3,转染至肠上皮细胞(Caco-2),观察其对细胞增殖活性的影响。结果克隆的修饰GLP2基因与国外报道的核苷酸序列及其编码的氨基酸序列完全一致,并成功拼接GLP2的信号肽及成熟肽;且加入pVITRO3-GLP2-Caco-2培养上清的细胞生长明显快于对照组。结论PCR重叠延伸技术适用于分泌性载体构建。构建的修饰GLP2表达系统所表达的蛋白具有促进肠上皮细胞增殖的作用。

关键词：胰高血糖素样肽-2 基因克隆 PCR重叠延伸技术肠上皮细胞增殖

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Delta1-IRES-EGFP双顺反子逆转录病毒表达载体的构建及鉴定

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第三军医大学学报 2005年第12期27卷 1197-1200页

作者：何飞谭颖徽杨峥嵘第四军医大学秦都口腔医院西安710032 第三军医大学新桥医院口腔科重庆400037 第三军医大学预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的　构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法　利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +... 详细信息

目的　构建并鉴定人Delta1和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子逆转录病毒表达载体。方法　利用基因重组技术将人Delta1基因构建到含IRES EGFP逆转录病毒载体中;电穿孔法将重组质粒pDelta1 IRES EGFP分别转入单、双嗜性包装细胞GP +E86和PA3 17,嘌呤霉素(puromycin)筛选获得阳性表达克隆;“乒乓球”法提高病毒滴度;重组病毒感染NIH3T3细胞,流式细胞仪(FACS)及RT PCR法分别检测细胞荧光和Delta1mRNA表达变化;C2C12共培养实验检测蛋白的功能。结果　酶切、PCR鉴定及DNA测序证实逆转录病毒表达载体pDelta1 IRES EGFP构建正确;经体外包装,获得最高滴度9 7×10 5CFU ml的重组病毒液;重组病毒液感染NIH3T3细胞,FACS检测部分细胞荧光强度显著提高;RT PCR证实细胞内有外源基因Delta1表达;C2C12共培养实验证实外源蛋白Delta1可抑制C2C12细胞的分化。结论　逆转录病毒基因转移系统安全,效率较高,可获得外源基因长期、稳定的表达。

关键词： Delta GFP IRES 逆转录病毒基因转移基因表达

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VEGF165基因转染真皮多能干细胞的实验研究

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第三军医大学学报 2006年第18期28卷 1854-1856页

作者：刘志君徐辉粟永萍冉新泽许川山第三军医大学大坪医院野战外科研究所创伤实验室重庆400002 第三军医大学军事预防医学院防原医学教研室全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 重庆医科大学超声影像学研究所重庆400010

目的为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-... 详细信息

目的为获得高表达生物活性血管内皮细胞生长因子VEGF165的皮肤种子细胞,拟将转基因治疗与真皮多能干细胞相结合,为难愈性创面的促愈治疗奠定基础。方法构建真核表达载体pIRES2-EGFP-VEGF165,经脂质体法介导转染真皮多能干细胞;半定量RT-PCR检测VEGF165 mRNA的表达,W estern b lot和酶联免疫ELISA法检测VEGF蛋白的表达;并检测了表达产物的生物活性及转染VEGF(derm almu ltipotential stem cells,DMSCs)增殖活性的变化。结果转染后VEGF165 mRNA和VEGF蛋白的表达均显著增强(P<0.01),约为对照组的1.6倍,且转染VEGF后DMSCs的培养上清显著提高hECV304细胞增殖活性(P<0.01)。MTT结果显示转染VEGF后DMSCs增殖活性显著增高,约为转染空载体组DMSCs的2倍(P<0.01)。结论成功获得了高水平表达并分泌具有生物活性的VEGF的基因治疗种子细胞DMSCs,为下一步动物在体进行基因治疗打下了基础。

关键词： VEGF165 DMSCs 基因疗法

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小鼠间充质祖细胞向神经元样细胞诱导分化的实验研究

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重庆医科大学学报 2010年第6期35卷 801-805页

作者：杨里万立华粟永萍彭毅赵文勇重庆医科大学基础医学院法医学教研室重庆400016 第三军医大学军事预防医学院全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性。方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免... 详细信息

目的:体外培养C57小鼠密质骨碎片来源的间充质祖细胞(Mesenchymal progenitor cells,MPC),探讨MPC体外向神经元样细胞定向诱导分化的可行性。方法:取C57小鼠后肢长骨,剪成骨碎片,经Ⅱ型胶原酶消化后体外培养MPC,流式细胞术检测鉴定其免疫学表型。取生长良好的第三代MPC,神经元原代培养上清液定向诱导,对诱导后的MPC,以神经元特异性标志物神经元特异性烯醇化酶(Neuron specific enolase,NSE)及神经丝蛋白(Neurofilament protein,NF)为对照,应用免疫细胞化学染色法,检测神经元标志物的表达。结果:成功培养原代MPC,传代后生长良好,流式细胞术检测CD29、CD44组阳性率与其同型对照组相比有明显差异(P<0.05)。经神经元原代培养上清液诱导后,MPC可表达神经元特异性标志物NSE及NF。结论:从小鼠密质骨碎片分离培养出的间充质祖细胞获得率高,并可诱导分化为神经元样细胞。

关键词：间充质祖细胞分化神经元样细胞诱导

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