检索结果-内蒙古大学图书馆

中国修复重建外科杂志 2005年第1期19卷 70-73页

作者：王劲罗成基徐辉冉新泽闫国和粟永萍程天民第三军医大学全军复合伤研究所创伤烧伤与复合伤国家重点实验室

目的　探讨骨髓间充质干细胞 (marrow mesenchmal stem cells,MSCs)移植至肌肉组织后的原位成肌分化情况。　方法　以 Bal B/ C雌性小鼠 36只 ,建立放射损伤合并创伤 (切割伤 +冻伤 )的严重肌损伤模型 ,再将分离扩增的雄性小鼠的单纯 M... 详细信息

目的　探讨骨髓间充质干细胞 (marrow mesenchmal stem cells,MSCs)移植至肌肉组织后的原位成肌分化情况。　方法　以 Bal B/ C雌性小鼠 36只 ,建立放射损伤合并创伤 (切割伤 +冻伤 )的严重肌损伤模型 ,再将分离扩增的雄性小鼠的单纯 MSCs及经 10μmol/ L 5 -氮杂胞苷 (5 - azacytidine,5 - Aza- CR)诱导 2 4 h的 MSCs以局部注射移植法 ,植入雌性小鼠正常肌肉组织和创伤后的肌肉组织 ,采用荧光标记的原位杂交法、免疫组织化学法在移植后 1、3、6、9、12及 15 d检测植入的 MSCs在肌肉组织原位的数量变化及成肌分化情况。　结果　植入的 MSCs数量随着时相延长而减少 ;单纯 MSCs植入正常肌肉组织 15 d,5 - Aza- CR诱导后的 MSCs植入正常肌肉组织 6 d,可见 MSCs分化为肌细胞 ,表达 desmin阳性 ;5 - Aza- CR诱导的 MSCs植入损伤肌肉组织 3d,单纯 MSCs植入损伤肌肉组织 6 d,可见 MSCs分化为肌细胞 ,表达 desmin阳性。　结论　 MSCs局部移植至肌肉组织局部可实现成肌分化 ,但经 5 - Aza- CR诱导后的MSCs植入损伤肌肉组织的 MSCs其成肌分化时相明显早于单纯 MSCs植入正常肌组织的

关键词：植入正常分化 MSC 肌肉组织诱导局部荧光标记骨髓间充质干细胞肌细胞

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Red/ET同源重组介导细菌人工染色体的快速修饰

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生物化学与生物物理进展 2005年第5期32卷 468-473页

作者：王军平张友明粟永萍第三军医大学预防医学系全军复合伤研究所创伤烧伤复合伤国家重点实验室 GeneBridgeGmbH Dresden01307Germany

随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL... 详细信息

随着基因组测序工程的实施与完成,如何对包含完整基因信息的特定细菌人工染色体(BAC)进行有目的修饰,已成为功能基因组学研究的一个重要环节.应用新近优化的Red/ET同源重组技术对目标BAC进行修饰,以pSC101-BAD-gbaA为依托质粒,采用rpsL鄄neo为正/反向筛选系统,可以快速、高效地对BAC进行剪切、插入、替换等操作,其中能够进行抗性筛选的一步BAC修饰只需一周时间,以插入非抗性标记基因Cre为代表的两步BAC修饰在两周内即可完成.通过阿拉伯多糖诱导调控和简单地变化培养温度,能使pSC101-BAD-gbaA依托质粒在发挥完Red/ET同源重组作用后自然消失,最终获得完整而纯净的修饰后BAC,为加快功能基因组学研究提供了一个可靠的实验平台.

关键词： Red/ET同源重组 BAC修饰功能基因组

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放烧复合伤的治疗研究

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中华烧伤杂志 2008年第5期24卷 387-389,400页

作者：程天民冉新泽第三军医大学全军复合伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

放射损伤复合烧伤即为放烧复合伤。在一些情况下，还会复合冲击伤、弹片伤等其他伤害，成为放烧冲、放烧创等复合伤，广义而言，也可归入放烧复合伤。此类伤害主要见于核爆炸、核事故、贫铀弹伤害、核恐怖脏弹袭击，以及核设施遭袭击后... 详细信息

放射损伤复合烧伤即为放烧复合伤。在一些情况下，还会复合冲击伤、弹片伤等其他伤害，成为放烧冲、放烧创等复合伤，广义而言，也可归入放烧复合伤。此类伤害主要见于核爆炸、核事故、贫铀弹伤害、核恐怖脏弹袭击，以及核设施遭袭击后发生的次生伤害。

关键词：烧伤治疗放射损伤复合伤

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依那普利拉对严重烫伤大鼠早期心肌力学的影响

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中华烧伤杂志 2008年第3期24卷 183-186页

作者：张兵钱王广张东霞党永明胡炯宇宋华培张家平卞修武黄跃生第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学西南医院病理研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的了解依那普利拉对严重烫伤大鼠早期心肌力学的影响。方法将84只SD大鼠背部造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤后，随机分为烫伤组，伤后按Parkland公式腹腔注射等渗盐水；小剂量治疗组、中剂量治疗组、大剂量治疗组，伤后即刻分别腹腔注射1、2... 详细信息

目的了解依那普利拉对严重烫伤大鼠早期心肌力学的影响。方法将84只SD大鼠背部造成30％TBSA的Ⅲ度烫伤后，随机分为烫伤组，伤后按Parkland公式腹腔注射等渗盐水；小剂量治疗组、中剂量治疗组、大剂量治疗组，伤后即刻分别腹腔注射1、2、4mg／kg依那普利拉。烫伤组、小剂量治疗组伤后1、3、6、12、24h，中剂量治疗组、大剂量治疗组伤后6、12h左心室置管检测大鼠左心室收缩压（LVSP）、左心室舒张末期压（LVEDP）、左心室压力最大上升／下降速率（±dp／dtmax），并处死大鼠取心肌组织检测血管紧张素Ⅱ（AⅡ）含量。另取6只大鼠作为假伤组，模拟烫伤后检测以上指标。结果伤后3～24h，烫伤组及各剂量治疗组大鼠LVSP、LVEDP、±dp／dt max值普遍低于假伤组（P〈0．05或P〈0．01）；而各剂量治疗组LVSP、LVEDP、±dp／dt max值普遍高于烫伤组（P〈0．05或P〈0．01）；伤后6、12h，大剂量治疗组±dp／dtmax明显低于小、中剂量治疗组。伤后1h，烫伤组心肌组织AⅡ含量[（53．0±2．6）pg／200mg]明显高于假伤组[（14．8±0．7）pg／200mg，P〈0．01]，6h达高峰，以后逐渐下降，伤后24h仍明显高于假伤组（P〈0．01）；伤后3～24h，小剂量治疗组AⅡ含量均明显高于假伤组（P〈0．05或P〈0．01），但均低于烫伤组。伤后6h烫伤组AⅡ含量为（145．2±14．5）pg／200mg，高于小、中、大剂量治疗组[（65．1±0．9）、（53．6±1．1）、（34．2±0．9）pg／200mg，P〈0．01]。结论严重烫伤后早期心肌组织损害明显，心功能即明显下降，依那普利拉注射液可以改善心肌力学指标、保护心功能，以小剂量效果最为明显。

关键词：烧伤依那普利拉心肌力学

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直流电场对BALB/c小鼠乳鼠真皮成纤维细胞定向迁移与排列的作用及其机制

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中华烧伤杂志 2016年第4期32卷 224-231页

作者：刘杰任淅郭小伟孙寰博汤勇罗争辉张琼张东霞黄跃生张家平第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室

目的明确外源性直流电场对BALB/c小鼠乳鼠真皮Fb定向迁移与排列的作用,初步探讨其相关机制。方法取12只BALB/c小鼠乳鼠,分4批次,每批次取3只乳鼠背部皮肤培养真皮Fb,将第2代Fb以5×10;个/mL接种于27块方形盖玻片。（1）实验1。取6... 详细信息

目的明确外源性直流电场对BALB/c小鼠乳鼠真皮Fb定向迁移与排列的作用,初步探讨其相关机制。方法取12只BALB/c小鼠乳鼠,分4批次,每批次取3只乳鼠背部皮肤培养真皮Fb,将第2代Fb以5×10;个/mL接种于27块方形盖玻片。（1）实验1。取6块接种了第2代Fb的盖玻片（下同）分为加电组和假电组,各3块。于活细胞工作站内,加电组加电处理,电场强度为200 mV/mm,假电组模拟操作但不通电（下同）,持续作用6 h,计算细胞增殖率。（2）实验2。取6块盖玻片同实验1分组并处理,活细胞工作站下观察并分析电场作用6 h内细胞的运动轨迹;电场作用0（即刻）、1、2、3、4、5、6 h细胞迁移方向性变化,以cos（α）表示;电场作用6 h内细胞的迁移速度;电场作用6 h内细胞长轴方向变化;电场作用0、1、2、3、4、5、6 h细胞排列的方向性变化,以极向值cos[2（θ-90）]表示。电场作用6 h后,采用免疫荧光染色法观察细胞微丝、微管形态变化。（3）实验3。取6块盖玻片,分为细胞松弛素D组（加入1μmoL/L的细胞松弛素D处理10 min）和秋水仙素组（加入5μmol/L的秋水仙素处理10 min）,各3块。同实验2分别观察2组细胞微丝、微管形态变化。（4）实验4。取9块盖玻片分为对照组,细胞松弛素D组、秋水仙素组,各3块。对照组不进行任何处理,细胞松弛素D组、秋水仙素组处理同实验3。均加电处理6 h,电场强度200 mV/mm。分析电场作用6 h内细胞运动轨迹,并计算电场作用6 h内细胞迁移速度;计算电场作用0、3、6 h细胞极向值;记录电场作用0、6 h细胞形态变化。对数据行独立样本t检验、单因素方差分析、LSD检验。结果（1）加电组、假电组细胞增殖率比较,差异无统计学意义（t=-0.24,P>0.05）。（2）加电组细胞电场作用6 h内整体趋向于朝电场阳极方向迁移,假电组细胞6 h内呈任意方向运动。电场作用0 h,2组细胞的cos（α）均为0;电场作用1 h,加电组细胞的cos（α）达-0.57±0.06,绝对值显著高于假电组的0.13±0.09（t=6.68,P<0.01）;此后2;h一直明显高于假电组（t值为5.33;.83,P值均小于0.01）。电场作用6 h内,加电组细胞的迁移速度为（0.308±0.019）μm/min,显著高于假电组的（0.228±0.021）μm/min（t=-2.76,P<0.01）。加电组细胞电场作用6 h内细胞长轴趋向于与电场方向垂直,假电组细胞6 h内呈任意取向排列。电场作用2;h,加电组细胞极向值均显著高于假电组（t值为-7.52;0.90,P值均小于0.01）。电场作用6 h,加电组细胞的微丝和微管形态与假电组相似。（3）细胞松弛素D组细胞的微丝荧光强度显著减弱,束状结构模糊;秋水仙素组细胞的微管呈弱荧光强度的弥散模糊结构。（4）电场作用6 h内,对照组细胞整体趋向于朝电场阳极方向迁移,而细胞松弛素D组和秋水仙素组细胞均呈任意方向运动。电场作用6 h内,3组细胞的迁移速度差异明显（F=6.36,P<0.01）。与对照组相比,细胞松弛素D组、秋水仙素组细胞迁移速度显著降低（P<0.05或P<0.01）。电场作用0、3、6 h,3组细胞极向值相近（F值为0.99;.51,P值均大于0.05）。电场作用0 h,对照组细胞为梭形,细胞松弛素D组细胞呈多角形或不规则形,秋水仙素组细胞呈锯齿状圆形或椭圆形;电场作用6 h,对照组细胞形态无明显变化,细胞松弛素D组细胞呈梭形且两端呈多分叉形态,秋水仙素组细胞呈锯齿状椭圆形。结论生理强度外源性直流电场可诱导BALB/c小鼠乳鼠真皮Fb发生定向迁移和排列。微丝、微管是电场诱导Fb定向迁移所必需的骨架结构,而非电场诱导Fb定向排列所必需。

关键词：成纤维细胞细胞运动微丝微管电场

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烧伤患者2748株病原菌分布特点及耐药性分析

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中华烧伤杂志 2012年第2期28卷 87-95页

作者：彭代智刘小玲刘智勇舒文婷周新刘敬黄跃生吴军府伟灵第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038 第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点检验科重庆400038

目的提供近年烧伤患者病原菌分布及耐药性状况的流行病学资料，以指导临床合理使用抗生素。方法选择2003年3月-2011年6月西南医院全军烧伤研究所478例患者1977份临床标本（血液、导管、创面分泌物等），共分离出病原菌2748株。用AP... 详细信息

目的提供近年烧伤患者病原菌分布及耐药性状况的流行病学资料，以指导临床合理使用抗生素。方法选择2003年3月-2011年6月西南医院全军烧伤研究所478例患者1977份临床标本（血液、导管、创面分泌物等），共分离出病原菌2748株。用API细菌鉴定板条鉴定菌株；采用K-B纸片扩散法，选择庆大霉素、妥布霉素、哌拉西林、阿米卡星等55种常用抗生素进行药物敏感试验。采用WHONET 5.3软件统计分析如下项目：各年度不同类型、不同标本来源的病原菌分布情况，主要革兰阴性杆菌、革兰阳性球菌、真菌对多种抗生素的耐药率变化情况，铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌、鲍氏不动杆菌、白色念珠菌对多种抗生素的敏感率变化情况。结果2748株病原菌中，革兰阴性杆菌1879株占68. 38%、革兰阳性球菌628株占22. 85%、真菌241株占8.77%。创面分泌物标本病原菌检出率最高（1022株占37. 19%），其次是呼吸道（995株占36. 210/0）和血液（421株占15. 32%），其他类型标本检出率较低。铜绿假单胞菌检出率最高，共996株占36. 24%，其次是金黄色葡萄球菌和鲍氏不动杆菌，依次为495株占18. 01%，395株占14. 37%。鲍氏不动杆菌检出率呈逐年增加趋势，金黄色葡萄球菌呈逐年下降趋势，铜绿假单胞菌检出率较稳定。检出的葡萄球菌中以甲氧西林耐药金黄色葡萄球菌为主，共484株占17. 61%。铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌对多黏菌素E、多黏菌素B的耐药率低于30. 00%，鲍氏不动杆菌对米诺环素的耐药率仅为39. 68%，除此之外，这2种细菌对其他抗生素如第三代头孢菌素、B内酰胺类、氨基糖苷类、喹诺酮类等抗生素呈多药耐药，耐药率为57. 910/0-100. 00%。2004-2011年，铜绿假单胞菌对喹诺酮类抗生素敏感率呈逐年增加趋势，鲍氏不动杆菌对米诺环素、奈替米星、亚胺培南、美罗培南、妥布霉素和头孢哌酮／舒巴坦敏感率呈逐年下降趋势。粪肠球菌、屎肠球菌和金黄色葡萄球菌对替考拉宁和利奈唑胺的耐药率低于10.00%。金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌和屎肠球菌对万古霉素的耐药率均为O。金黄色葡萄球菌对奎奴普丁／达福普汀、米诺环素、夫西地酸和复方磺胺甲嗯唑的耐药率较低，分别为0.82%、9. 35%、2.21c70和31. 85c70；该菌对红霉素、克林霉素、复方磺胺甲呱唑、四环素和米诺环素的敏感率呈还年增加趋势。真菌感染率很低，且对药物的耐药率不高；白色念珠菌对5种抗生素的耐药率均低于15. 00%，除对5-氟胞嘧啶的敏感率略呈下降趋势外，对其他4种抗生素的敏感率均呈逐年上升趋势。结论近年引发西南医院烧伤研究所患者感染的病原菌中，居前3位的依次为铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌和鲍氏不动杆菌。所有分离菌株中铜绿假单胞菌和鲍氏不动杆菌的多药耐药性尤为突出，鲍氏不动杆菌将可能取代铜绿假单胞菌成为烧伤感染死亡的主要致病菌。

关键词：烧伤感染抗药性流行病学病原菌

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异体颗粒状脱细胞真皮基质与自体刃厚皮复合移植修复大鼠皮肤缺损创面效果观察

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中华烧伤杂志 2011年第1期27卷 10-15页

作者：左海斌彭代智郑必祥陈博刘小玲王勇周灵第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的观察异体颗粒状脱细胞真皮基质（PADM）与自体刃厚皮复合移植修复大鼠皮肤缺损创面的效果。方法采用随机数字表法将12只SD大鼠分为实验组和对照组，每组6只。于2组大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，实验组创面复合移植SD大鼠异体PADM... 详细信息

目的观察异体颗粒状脱细胞真皮基质（PADM）与自体刃厚皮复合移植修复大鼠皮肤缺损创面的效果。方法采用随机数字表法将12只SD大鼠分为实验组和对照组，每组6只。于2组大鼠背部制作全层皮肤缺损创面，实验组创面复合移植SD大鼠异体PADM（扩张比10：5）及厚度0．20mm的自体刃厚皮，对照组创面仅移植厚度0．20mm自体刃厚皮。术后2周起打开敷料观察大鼠创面愈合情况。术后2、3、4、6、8、12、20周计算2组创面移植皮片成活率、收缩率（或扩张率）。术后20周取2组创周正常皮肤及创面皮肤标本，采用HE染色法观察胶原纤维束结构，测量胶原纤维束直径和间隙率；用天狼星红染色法观察I、Ⅲ型胶原分布情况，测量I、Ⅲ型胶原含量及其比值。对实验数据行独立样本t检验、Levene检验、t’检验。结果（1）术后2周，实验组大鼠创面移植皮片成活率[（76．1±13．1）％]低于对照组[（94．5±1．3）％，t’=3．440，P=0．018]。术后3周，实验组创面移植皮片收缩率[（34±8）％]明显大于对照组[（16±12）％，t=-3．211，P=0．009]；术后8周，2组移植皮片扩张率接近一致。（2）HE染色和天狼星红染色显示，与大鼠创周正常皮肤比较，对照组移植皮片胶原纤维束呈均质化改变，胶原纤维纤细，排列紊乱；实验组移植皮片胶原纤维束结构、排列更接近创周正常皮肤，可见未完全降解的PADM。与对照组创面皮肤胶原纤维束直径[（7．3±1．4）um]、间隙率[（17±4）％]、I型胶原含量[（68．1±8．4）％]、Ⅲ型胶原含量[（32．0±8．4）％]以及I、Ⅲ型胶原比例（2．3±1．0）比较，实验组胶原纤维束更粗[（9．6±0．8）um，t=-3．562，P=0．005]，间隙率更大[（24±5）％，t=-2．760，P=0．020]，I型胶原含量更高[（80．2±5．4）％，t=-2．981，P=0．014]，Ⅲ型胶原含量更低[（19．8±5．4）％，t=2．981，P=0．014]，I、Ⅲ型胶原比例更高（4．3±1．2，t=-3．204，P=0．009）。实验组创面皮肤上述胶原相关指标更接近于创周正常皮肤水平。结论异体PADM在体内作为真皮再生模板，有助于改善自体刃厚皮所修复的大鼠皮肤缺损创面中真皮胶原纤维束的结构，提高再生真皮组织的成熟度。

关键词：皮肤移植细胞外基质颗粒状脱细胞真皮基质真皮再生

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雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响及其分子机制

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中华烧伤杂志 2016年第1期32卷 40-45页

作者：张均辉张东霞赵利平闫甜甜张琼贾杰只黄跃生第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响，并初步分析其分子机制。方法采用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液（简称培养液）常规培养HaCaT细胞。（1）取对数生长期细胞，按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200n... 详细信息

目的探讨雷帕霉素对人表皮细胞株HaCaT迁移的影响，并初步分析其分子机制。方法采用含体积分数10％FBS的RPMI1640培养液（简称培养液）常规培养HaCaT细胞。（1）取对数生长期细胞，按照随机数字表法将其分为对照组及1、5、50、100、200nmol／L雷帕霉素组，每组6孔。5个雷帕霉素组细胞分别加入含相应质量浓度雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含二甲基亚砜（DMSO）的培养液。常规培养4h后，采用酶标仪检测细胞增殖活性（以吸光度值表示）。（2）取对数生长期细胞，同实验（1）分组培养，每组l孑L。常规培养4h后，在活细胞工作站下观察各组细胞3h内运动范围，计算细胞曲线运动速度，筛选雷帕霉素适宜实验浓度。（3）取对数生长期细胞，按随机数字表法将其分为雷帕霉素组和对照组，每组1孔。雷帕霉素组细胞加入含50nmol／L雷帕霉素的培养液，对照组细胞加入含DMSO的培养液。常规培养4h后行划痕实验，观察划痕后0（即刻）、5、10、15h的划痕面积并计算后3个时相点的细胞迁移率。（4）取对数生长期细胞，同实验（3）分组培养，每组1孔。用蛋白质印迹法检测细胞黏着斑激酶（FAK）活性（以磷酸化FAK与FAK灰度值比值表示）。上述实验重复3次或5次。对数据行单因素方差分析、LSD检验、t检验。结果（1）对照组及1、5、50、100、200nmol／L雷帕霉素组细胞增殖活性分别为1．22±0．28、1．29±0．38、1．12±0．27、1．20±0．29、1．15±0．30、1．39±0．40，组间比较差异无统计学意义（F=2．112，P=0．068）。（2）1、5nmol／L雷帕霉素组细胞的运动范围与对照组接近，其余3个雷帕霉素组细胞的运动范围明显小于对照组。组间细胞曲线运动速度总体比较，差异有统计学意义（F=3．525，P=0．004）。l、5nmol／L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为（0．8±0．4）、（0．8±0．8）μm／min，与对照组[（0．9±0．5）μm／min]相近（P值均大于0．05）；50、100、200nmol／L雷帕霉素组细胞曲线运动速度分别为（0．7±0．5）、（0．7±0．4）、（0．7±0．4）μm／min，明显慢于对照组（P值均小于0．01）。选择50nmol／L雷帕霉素用于后续实验。（3）划痕后0、5h，雷帕霉素组细胞划痕面积与对照组相近；划痕后10、15h，雷帕霉素组细胞划痕面积较对照组大。划痕后5h，对照组及雷帕霉素组的细胞迁移率分别为（17．5±2．6）％、（15．8±3．5）％，组间比较差异无统计学意义（t=1．951，P〉0．05）。雷帕霉素组划痕后10、15h的细胞迁移率分别为（42．5±4．0）％、（71．3±9．2）％，明显低于对照组的（46．9±6．7）％、（88．0±7．7）％，t值分别为2．732、6．746，P值均小于0．01。（4）雷帕霉素组细胞FAK活性为O．16±0．08，明显低于对照组的0．46±0．14，t=4．967，P〈0．01。结论在HaCaT细胞中，FAK信号通路对雷帕霉素敏感，FAK活性下降可能参与介导雷帕霉素对HaCaT细胞迁移的抑制效应。

关键词：西罗莫司细胞增殖细胞迁移分析细胞运动黏着斑激酶 HaCaT细胞

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缺氧诱导因子1α对P311的作用及其对小鼠表皮干细胞迁移的影响

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中华烧伤杂志 2017年第5期33卷 287-294页

作者：徐正东李海胜王淞贺伟峰吴军罗高兴第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）相互作用及对小鼠表皮干细胞（ESC）迁移影响。方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观... 详细信息

目的体外条件下模拟缺氧环境，探讨P311和缺氧诱导因子1α（HIF-1α）相互作用及对小鼠表皮干细胞（ESC）迁移影响。方法取15只C57BL/6J野生型新生小鼠，5只同属来源P311基因敲除新生小鼠，分离培养2种小鼠ESC，取第1代细胞行形态学观察，采用流式细胞仪检测细胞表面标志物CD71、CD49f表达后行以下实验。（1）取2种小鼠ESC划痕处理后，立即按随机数字表法（下同）将P311基因敲除小鼠ESC分为常氧组（将细胞加入完全培养基置于常氧二氧化碳培养箱培养，常氧处理下同）和缺氧组（将细胞置于含体积分数1%氧气的缺氧二氧化碳培养箱培养，缺氧处理下同），每组12个插件；将野生型小鼠ESC分为常氧组、单纯缺氧组、二甲基亚砜（DMSO）对照组（用2 μL DMSO溶剂常氧处理1 h后行缺氧培养）、HIF-1α抑制剂组（加入11 μmol/L HIF-1抑制剂2 μL常氧培养1 h后行缺氧培养）、HIF-1α稳定剂组（加入2 μmol/L FG-4592 2 μL常氧处理1 h后行缺氧培养），每组12个插件。每组各时相点取3个插件分别于划痕后0（即刻）、12 、24、48 h在100倍倒置相差显微镜下测量划痕剩余宽度。（2）取野生型小鼠ESC行缺氧培养，蛋白质印迹法检测缺氧0（即刻）、12、24、48 h HIF-1α蛋白表达。（3）取野生型小鼠ESC同实验（1）分为单纯缺氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制剂组、HIF-1α稳定剂组并行相应处理，分别在缺氧0、12、24、48 h采用实时荧光定量RT-PCR法检测P311 mRNA表达，免疫细胞化学染色法观测P311表达（样本数均为12）。（4）取第2代人胚胎肾293（HEK-293）细胞分为空载缺氧组（转染空载质粒后进行缺氧培养）、P311常氧组（转染P311报告基因质粒后进行常氧培养）、P311缺氧组（转染P311报告基因质粒后进行缺氧培养）、P311缺氧＋HIF-1α抑制剂组（HIF-1抑制剂处理后转染P311报告基因质粒然后进行缺氧培养），分别于培养0、12 h检测荧光素酶活性，采用生物信息学方法预测HIF-1α对P311转录调节的结合位点并查找P311启动子序列。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验以及Bonferroni校正。结果（1）ESC结果。细胞呈现铺路石样改变，细胞由于增殖潜能不同而呈现不同克隆状态。CD71－CD49f＋细胞占85%左右，说明ESC的干性较强、纯度较高。与P311基因敲除小鼠常氧组比较，单纯缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），缺氧组、野生型小鼠常氧组、DMSO对照组、HIF-1α抑制组、HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。与野生型小鼠常氧组比较，缺氧组、单纯缺氧组、DMSO对照组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较小（P〈0.05）。与单纯缺氧组比较，缺氧组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较大（P值均小于0.05），HIF-1α抑制剂组细胞划痕后12 h划痕剩余宽度较大（P〈0.05），HIF-1α稳定剂组细胞划痕后12、24 h划痕剩余宽度较小（P值均小于0.05）。7组小鼠细胞间划痕后48 h划痕剩余宽度总体比较差异不明显（F＝19.02，P〉0.05）。野生型小鼠ESC缺氧0、12、24、48 h的HIF-1α蛋白表达量分别为1.02±0.05、2.56±0.09、1.60±0.17、1.17±0.03。与缺氧0 h比较，HIF-1α蛋白表达量缺氧12 h明显增加（P〈0.01），缺氧24 h开始下降但仍高于缺氧0 h（P〈0.05），缺氧48 h后降至常氧水平（P〉0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311 mRNA表达量均明显下降（P值均小于0.05），HIF-1α稳定剂组细胞P311 mRNA表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞在缺氧0、12、24 h P311 mRNA表达量均明显升高（P值均小于0.05）。与单纯缺氧组比较，HIF-1α抑制剂组细胞缺氧各时相点P311表达量均明显下降（P值均小于0.05），而HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量则在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。与HIF-1α抑制剂组比较，DMSO对照组和HIF-1α稳定剂组细胞P311表达量在缺氧12、24 h明显升高（P值均小于0.05）。（2）HEK-293细胞结果。培养0 h，空载缺氧组、P311常氧组、P311缺氧组、P311缺氧＋

关键词：缺氧诱导因子1 细胞迁移分析伤口愈合表皮干细胞 P311

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人工真皮联合碱性成纤维细胞生长因子在瘢痕和皮肤深度创面整复中的临床应用

引用

中华烧伤杂志 2016年第4期32卷 198-203页

作者：刘洋张宜澜黄亚兰罗高兴彭毅志颜洪罗奇志张家平吴军彭代智第三军医大学西南医院全军烧伤研究所创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室重庆400038

目的观察人工真皮联合bFGF应用于瘢痕和皮肤深度创面整复的临床效果。方法回顾性分析2010年10月-2015年4月笔者单位收治的符合人选标准的应用人工真皮修复创面的72例患者临床资料，创面类型为瘢痕切除后创面、无肌腱或骨外露深度烧伤创... 详细信息

目的观察人工真皮联合bFGF应用于瘢痕和皮肤深度创面整复的临床效果。方法回顾性分析2010年10月-2015年4月笔者单位收治的符合人选标准的应用人工真皮修复创面的72例患者临床资料，创面类型为瘢痕切除后创面、无肌腱或骨外露深度烧伤创面、小面积肌腱或骨外露创面，共102个创面。根据是否联合应用bFGF，将创面分为人工真皮组60个和人工真皮＋bFGF组42个。人工真皮组I期手术行瘢痕松解和切除或深度创面彻底清创，移植人工真皮，待人工真皮血管化完成时，行Ⅱ期手术移植自体刃厚皮修复创面。人工真皮＋bFGF组的人工真皮先用bFGF浸泡30min后再移植，其余手术方法同人工真皮组。统计2组创面手术面积、人工真皮完全血管化时间、皮片存活情况及随访情况。对数据行t检验、Fisher确切概率法检验。结果（1）2组创面中瘢痕切除后、无肌腱或骨外露深度烧伤、小面积肌腱或骨外露创面手术面积相近（t值为-1．853～-0．200，P值均大于0．05）。人工真皮＋bFGF组创面中瘢痕切除后、无肌腱或骨外露深度烧伤、小面积肌腱或骨外露创面人工真皮完全血管化时间分别为（15．6±2．9）、（14．7±2．7）、（20．3±4．g）d，较人工真皮组相应创面的（18．3±4．7）、（18．7±4．2）、（27．7±8．8）d平均分别缩短2．7、4．0、7．4d（t值为-2．779～-2．383，P值均小于0．05）。（2）人工真皮＋bFGF组3种类型创面中，相同类型创面皮片存活为优者所占比例均高于人工真皮组，但差异无统计学意义（P值均大于0．05）。（3）术后随访1～48个月，2组创面植皮区和供皮区均无明显瘢痕生长。结论人工真皮联合bFGF能有效缩短人工真皮在瘢痕切除后创面和皮肤深度创面的血管化时间。

关键词：瘢痕烧伤伤口愈合真皮成纤维细胞生长因子新生血管化,生理性深度皮肤创面

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