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第三军医大学学报 2010年第5期32卷 422-426页

作者：庞浩刘昌峨刘勤王露露郭科男王勇魏泓第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的构建和筛选小鼠P4503A11基因miR RNAi慢病毒载体,建立CYP3A11基因knock-down小鼠。方法利用Ravi Sachidanandam's Lab的在线软件设计沉默小鼠P4503A11基因的miRNA所对应的shRNA序列,PCR扩增后克隆到PCI-GFP-MiR质粒中,其再与慢... 详细信息

目的构建和筛选小鼠P4503A11基因miR RNAi慢病毒载体,建立CYP3A11基因knock-down小鼠。方法利用Ravi Sachidanandam's Lab的在线软件设计沉默小鼠P4503A11基因的miRNA所对应的shRNA序列,PCR扩增后克隆到PCI-GFP-MiR质粒中,其再与慢病毒载体FUW进行重组。将psPAX2和pMD2.G两个载体和FUW-GFP-MiR-shRNA重组慢病毒载体共转染293FT细胞,包装成病毒。用包装好的病毒液感染293FT细胞后,并利用GFP蛋白表达水平进行滴度测定。将上述重组慢病毒载体分别转染FVB/N小鼠肝细胞,转染48h后,检测P4503A11基因mRNA表达水平的变化。选取干扰效果最好的FUW-GFP-MiR-shRNA1重组慢病毒载体进行制备基因knock-down小鼠模型。用显微注射法将浓缩的shRNA1病毒液注射至FVB/N小鼠12细胞期胚胎透明带下。将注射后发育至22细胞期的胚胎移植至假孕受体母鼠,得F0代小鼠。在紫外光照射下利用滤光片观察GFP在小鼠活体内的表达水平。结果DNA测序结果显示3个重组慢病毒载体均与所设计的shRNA序列一致。检测的3个浓缩前慢病毒悬液的滴度均≥106TU/ml,经过高速离心对病毒进行浓缩和纯化,其滴度达到109TU/ml以上。转染FUW-GFP-MiR-shRNA1、2的2组肝细胞的P4503A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组均显著下降(P<0.05),而转染阴性对照FUW-GFP-MiR-shRNA-NC的肝细胞P4503A11基因mRNA表达水平相对于空白对照组无明显改变。选用FUW-GFP-MiR-shRNA1慢病毒载体制备的F0代3A11基因knock-down小鼠,在紫外光照射下,阳性小鼠可见较强的荧光。结论构建并筛选出小鼠P4503A11基因有效的靶向miR RNAi慢病毒载体,并成功建立CYP3A11基因knock-down小鼠。

关键词：细胞色素P-450 CYP3A knock-down 微RNAs 慢病毒小鼠

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辐照猪皮与重组人表皮生长因子凝胶治疗小面积Ⅱ度烧伤的临床观察

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第三军医大学学报 2010年第1期32卷 71-73页

作者：王震葛良鹏荣新洲魏泓刘立柱杨荣华张涛广州医学院附属广州市第一人民医院烧伤科广州510180 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的观察辐照猪皮与重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)凝胶用于治疗Ⅱ度烧伤的临床疗效。方法选择135例Ⅱ度烧伤患者,分成3组,分别是辐照猪皮组、rhEGF凝胶组和对照组(碘伏油纱组),观察创面愈合时... 详细信息

目的观察辐照猪皮与重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)凝胶用于治疗Ⅱ度烧伤的临床疗效。方法选择135例Ⅱ度烧伤患者,分成3组,分别是辐照猪皮组、rhEGF凝胶组和对照组(碘伏油纱组),观察创面愈合时间、患者疼痛度、换药工作量、色素沉着度、愈合后效果以及1年后随访效果。结果不同治疗方式的愈合时间:对照组>rhEGF凝胶组>辐照猪皮组。辐照猪皮组和rhEGF凝胶组对Ⅱ度烧伤创面的治疗效果均优于对照组,平均愈合时间提前3～5 d,差异有统计学意义(P<0.01),且辐照猪皮组效果要略优于rhEGF凝胶组(P<0.05);rhEGF凝胶组和辐照猪皮组的患者疼痛度减轻及换药工作量相对对照组明显减少(P<0.01),且患者创面愈合效果良好、较少引起色素沉着,1年后部分患者随访证实远期愈合效果好,较少引起瘢痕增生。结论辐照猪皮和rhEGF治疗Ⅱ度烧伤效果确切、预后良好,临床上值得广泛使用。

关键词：辐照猪皮重组人表皮生长因子凝胶碘伏 Ⅱ度烧伤

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8株光合细菌的鉴定及其系统进化关系分析

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解放军检验医学杂志 2010年第1期6卷 29-34页

作者：方立超魏泓郑峻松第三军医大学医学检验系临床检验学暨军事检验医学教研室重庆400038 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的为8株光合细菌作为益生菌株提供系统资料.方法用常规方法对8株光合细菌菌株的形态、培养特性及生理生化特征进行鉴定,同时定性分析菌株产生的类胡萝卜素和CoQ,测定菌株16S Rdna序列并分析其系统进化关系,并在GenBank中获取了8个16... 详细信息

目的为8株光合细菌作为益生菌株提供系统资料.方法用常规方法对8株光合细菌菌株的形态、培养特性及生理生化特征进行鉴定,同时定性分析菌株产生的类胡萝卜素和CoQ,测定菌株16S Rdna序列并分析其系统进化关系,并在GenBank中获取了8个16S Rdna序列号.结果菌株2C、2c和13ing为沼泽红假单胞菌.Ga、Ⅱ106、WS8N 3为类球红细菌,MT1131为荚膜红细菌,rub为深红红螺菌.菌株16S Rdna序列的系统进化树显示,同一种菌并不总是聚为一族,但相隔较近;种属完全不同的菌株,尽管序列相似性高达97%以上,在系统进化树上相隔较远.结论 8株 PSB 菌株的鉴定和系统进化关系分析结果为后续研究提供了背景资料,同时菌株在GcnBank中获得的16S Rdna序列的序列号为菌株作上了生物标记,为菌株的产权保护提供了依据.

关键词：光合细菌 16SrDNA序列系统进化关系

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8株光合细菌的鉴定及其系统进化关系分析

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中国微生态学杂志 2010年第5期22卷 439-443页

作者：方立超魏泓郑峻松第三军医大学医学检验系暨药学院临床检验学教研室重庆400038 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的为8株光合细菌(photosynthetic bacteria,PSB)作为益生菌株提供系统资料。方法用常规方法对8株PSB菌株的形态、培养特性及生理生化特征进行鉴定,同时定性分析菌株产生的类胡萝卜素和CoQ,测定菌株16S DNA序列并分析其系统进化关系,在... 详细信息

目的为8株光合细菌(photosynthetic bacteria,PSB)作为益生菌株提供系统资料。方法用常规方法对8株PSB菌株的形态、培养特性及生理生化特征进行鉴定,同时定性分析菌株产生的类胡萝卜素和CoQ,测定菌株16S DNA序列并分析其系统进化关系,在GenBank中获取了8个16S DNA序列号。结果菌株鉴定结果表明:菌株2C、2c和13ing为沼泽红假单胞菌,Ga、Il106、WS8N为类球红细菌,MT1131为荚膜红细菌,rub为深红红螺菌。基于菌株16S DNA序列的系统进化树显示,同一种菌并不总是聚为一簇,但相隔较近;种属完全不同的菌株,尽管序列相似性高达97%以上,在系统进化树上相隔较远。结论8株PSB菌株的鉴定和系统进化关系分析结果为后续研究提供了背景资料,同时菌株在GenBank中获得的16S DNA序列号为菌株作上了生物标记,也为菌株的产权保护提供了依据。

关键词：光合细菌 16S DNA序列系统进化关系益生菌背景资料

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模拟胃肠环境对3株光合细菌存活率影响的实验研究

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中国微生态学杂志 2010年第3期22卷 229-231,234页

作者：方立超魏泓郑峻松第三军医大学医学检验系暨药学院临床检验学教研室重庆400038 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的模拟胃肠环境对3株光合细菌(Photosynthetic bacteria,PSB)存活率影响进行体外实验研究。方法测定3株PSB分别在pH2.0、3.0和4.0的模拟胃液及含有或不含有0.45%牛胆盐(pH8.0)的模拟小肠液中不同时间的存活率。结果pH2.0时模拟胃液处... 详细信息

目的模拟胃肠环境对3株光合细菌(Photosynthetic bacteria,PSB)存活率影响进行体外实验研究。方法测定3株PSB分别在pH2.0、3.0和4.0的模拟胃液及含有或不含有0.45%牛胆盐(pH8.0)的模拟小肠液中不同时间的存活率。结果pH2.0时模拟胃液处理不同时间对3株PSB存活率有显著影响(P<0.01);pH3.0时,模拟胃液处理60、90和180 min对菌株rub存活率有显著影响(P<0.01),处理90、180 min对菌株Ga存活率有显著影响(P<0.05),处理180 min对菌株2C存活率无显著影响(P>0.05);pH4.0时模拟胃液处理180 min对3株PSB存活率无显著影响(P>0.05)。模拟小肠液处理240 min对3株PSB菌株活菌数无显著影响(P>0.05)。结论模拟胃液对3株PSB存活率影响具有菌株特异性和pH依赖性,而模拟小肠液对3株PSB存活率无显著影响。

关键词：光合细菌模拟胃肠环境存活率

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光合细菌2c菌株益生特性的实验研究

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中国微生态学杂志 2010年第4期22卷 321-324页

作者：方立超魏泓郑峻松第三军医大学医学检验系暨药学院临床检验学教研室重庆400038 第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的研究沼泽红假单胞菌2c菌株益生特性。方法利用耐酸、耐胆盐、体外黏附、平板抑菌试验及大鼠摄入2c菌株后在其体内的存活和持续时间实验研究其益生特性。结果pH2.5条件下处理30min及0.5%或0.9%牛胆盐处理对2c菌株活菌数无显著影响(P&... 详细信息

目的研究沼泽红假单胞菌2c菌株益生特性。方法利用耐酸、耐胆盐、体外黏附、平板抑菌试验及大鼠摄入2c菌株后在其体内的存活和持续时间实验研究其益生特性。结果pH2.5条件下处理30min及0.5%或0.9%牛胆盐处理对2c菌株活菌数无显著影响(P>0.05);2c菌株体外对4株临床致病菌无抑制作用,体外黏附性能一般。2c菌株在大鼠体内存活和持续时间与摄入剂量有关,停止摄入3d后便不能富集出。结论2c菌株具有较好益生特性。

关键词：光合细菌 2c菌株益生特性研究

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ApoE^(-/-)母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的影响

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局解手术学杂志 2010年第6期19卷 459-461页

作者：章磊谢彩虹唐欢袁静曾本华焦静魏泓西南大学生命科学学院重庆400715 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的研究母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生影响。方法 ApoE-/-孕鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G组)和普通饮食组(P组),G组雄性子代成年鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G-G)和普通饮食组(G-P),P组子代雄性成年鼠继续喂养... 详细信息

目的研究母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生影响。方法 ApoE-/-孕鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G组)和普通饮食组(P组),G组雄性子代成年鼠分为高脂高胆固醇饮食组(G-G)和普通饮食组(G-P),P组子代雄性成年鼠继续喂养普通饲料(P-P),60 d后检测子代成年鼠总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)浓度,HE染色观察血管形态学变化及动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)斑块形成情况。结果 G-G组和G-P组的TC、TG、LDL和HDL浓度较P-P组明显升高,且与P-P组相比TC浓度存在显著性差异(P<0.05),TG、LDL和HDL浓度存在极显著性差异(P<0.01);P-P组无AS斑块形成,G-G组与G-P组均有AS斑块形成,前者斑块形成率及斑块面积与血管管腔面积之比(PA/LA)都高于后者,两组PA/LA存在极显著性差异(P<0.01)。结论母体孕期高脂高胆固醇饮食对子代成年鼠动脉粥样硬化的发生具有重要影响。

关键词： ApoE-/- 母体高脂高胆固醇动脉粥样硬化动脉粥样硬化斑块

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模拟胃肠环境对3株光合细菌存活率影响的实验研究

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解放军检验医学杂志 2010年第1期6卷 42-45页

作者：方立超魏泓郑峻松中国人民解放军第三军医大学医学检验系临床检验学暨军事检验医学教研室重庆400038 中国人民解放军第三军医大学基础部实验动物学教研室重庆400038

目的本文旨在就模拟胃肠环境对3株光合细菌(Photosynthetic bacteria,PSB)存活率影响进行体外实验研究.方法测定3株PSB分别在Ph2.0、3.0、4.0的模拟胃液及含有或不含有0.45%牛胆盐(Ph8.0)的模拟小肠液中不同时间的存活率.结果 Ph2.0... 详细信息

目的本文旨在就模拟胃肠环境对3株光合细菌(Photosynthetic bacteria,PSB)存活率影响进行体外实验研究.方法测定3株PSB分别在Ph2.0、3.0、4.0的模拟胃液及含有或不含有0.45%牛胆盐(Ph8.0)的模拟小肠液中不同时间的存活率.结果 Ph2.0时模拟胃液处理不同时间对3株PSB存活率有显著影响(p<0.01);Ph3.0时,模拟胃液处理60rain、90min、180min对菌株rub存活率有显著影响(p<0.01),处理90rain、180min对菌株Ga存活率有显著影响(p<0.05),处理180min对菌株2C存活率无显著影响(p>0.05);Ph4.0时模拟胃液处理180min对3株PSB存活率无显著影响(p>0.05).模拟小肠液处理240min对3株PSB菌株活菌数无显著影响(p>0.05).结论模拟胃液对3株PSB存活率影响具有菌株特异性和Ph依赖性,而模拟小肠液对3株PSB存活率无显著影响.

关键词：光合细菌模拟胃肠环境存活率

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C_(57)BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库的建立

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局解手术学杂志 2010年第3期19卷 166-167页

作者：邓玉江陈俊颖邱全光王勇魏泓西南大学生命科学院重庆400715 解放军第324医院病理科重庆400020 第三军医大学信息网络管理中心重庆400038 第三军医大学基础医学部实验动物学教研室重庆400038

目的建立C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。方法选取C57BL/6J小鼠雌性10只,雄性10只,将其麻醉致死,解剖切取心、肝、脾、肺、肾、胃等45个器官和组织,用10%的中性缓冲福尔马林固定,石蜡切片,常规HE染色,用显微镜观察,图像采集,用计... 详细信息

目的建立C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。方法选取C57BL/6J小鼠雌性10只,雄性10只,将其麻醉致死,解剖切取心、肝、脾、肺、肾、胃等45个器官和组织,用10%的中性缓冲福尔马林固定,石蜡切片,常规HE染色,用显微镜观察,图像采集,用计算机对图像进行标注。采用SQLSEVER2000数据库管理系统,C#编程语言,B/S(浏览器/服务器)为系统构架。结果解剖20只C57BL/6J小鼠主要器官和组织,制做了1 589张切片,观察采集了13 578张图片,对1 563张图片进行了标注,建立了容量达7.85 GB的C57BL/6J小鼠主要器官的组织学数据库。结论构建可查询的C57BL/6J小鼠主要器官的形态学数据库,是研究疾病模型小鼠方便快捷的对照图库。

关键词： C57BL/6J小鼠组织学切片数据库

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整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

整合素β1在微粒皮混合移植中的异位表达及定量分析

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第八届西南五省一市烧伤整形学术会议暨贵州省医学会烧伤整形分会2010年学术年会

作者：林恒彭代智严泉周新刘敬创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室第三军医大学西南医院全军烧伤研究所重庆市器官移植研究所重庆市疾病蛋白质组学重点实验室第三军医大学基础医学部实验动物学教研室

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;... 详细信息

目的:初步探索自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的机理。方法:建立自异体微粒皮混合移植大鼠动物模型。实验分两部分,第一部分分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为10:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积扩张比各为10:1;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为10:1和10:3。第二部分也分为三组:(1)自体皮组,移植面积扩张比为20:1的自体微粒皮;(2)混合1组,自异体微粒皮移植面积分别为20:1和20:3;(3)混合2组,自异体微粒皮移植面积扩张比分别为20:1和20:6。于混合移植术后从各组大鼠愈合创面取样,第一部分动物实验取样时间为术后2、3、4周,第二部分动物实验取样时间为术后3、4周,每组动物每个时相点取3个标本。然后进行HE染色和整合素β1(Integrinβ1)免疫组织化学染色,并对表皮层厚度进行显微测量,然后软件测定、比较各组标本中整合素β1的表达情况。结果:(1)HE染色:微粒皮移植后大鼠创面的表皮层厚度明显增加,真皮内有不同程度的血管扩张和单个核细胞浸润;(2)术后2～4周,第一部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05);术后3～4周,第二部分动物实验中两个混合组大鼠皮肤表皮层厚度均明显厚于自体皮组(p<0.05)。(3)混合移植术后各组新生表皮中均可见整合素β1阳性细胞,以棘细胞层和颗粒层为主。术后2周,第一部分实验中混合组整合素β1的表达情况明显强于自体皮组(p<0.01),且混合1组的表达也要明显强于混合2组(p<0.01);术后3～4周,混合1组的表达仍然明显强于自体皮组和混合2组(p<0.01)。第二部分实验仅在术后3周时混合2组整合素β1的表达要高于自体皮组(p<0.05)。结论:在白异体微粒皮混合移植中,整合素β1的异位表达和表达增强与表皮细胞的增殖分化、创面再上皮化以及表皮层增厚有密切关系,而且在自异体微粒皮混合移植促进创面愈合的过程中,整合素β1表达阳性细胞很可能发挥了重要的作用。

关键词：微粒皮扩张比混合移植整合素异位表达定量分析

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