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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2012科学研究与结核病防治高峰论坛

作者： Wu Yuan 吴园 Hu Pinpin 胡频频 Wang Yiwei 王易伟 Li Xiuquan 李秀全 Mao Xuhu 毛旭虎 Zhong Min 钟敏 254 PLA Hospital Tianjin300142China Department of Clinical Microbiology and immunolgy college of l 解放军第二五四医院检验科天津300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 Central Laboratory of Genetic Diagnosis of Tuberculosis of Chongqing Chongqing 400020China 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 254 PLA Hospital Tianjin300142China 解放军第二五四医院检验科天津300142 Department of Clinical Microbiology and immunolgy college of laboratory medicineThird Military Medi 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 Central Laboratory of Genetic Diagnosis of Tuberculosis of Chongqing Chongqing 400020China Chongqin 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆 400036

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结... 详细信息

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果：实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论：iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌结构蛋白基因测序多态性分析

胃癌及癌前病变患者幽门螺杆菌的sabA基因多态性的研究

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第三军医大学学报 2011年第9期33卷 892-895页

作者：任莉廖亚玲郭刚邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的对癌症和癌前病变患者幽门螺杆菌进行sabA基因遗传信息多态性的研究。方法采用特异引物聚合酶链反应(PCR)及测序和比较基因组方法分析42株国内癌症及癌前病变患者幽门螺杆菌的sabA基因CT双核苷酸重复序列调节区多态性。结果 sabA基... 详细信息

目的对癌症和癌前病变患者幽门螺杆菌进行sabA基因遗传信息多态性的研究。方法采用特异引物聚合酶链反应(PCR)及测序和比较基因组方法分析42株国内癌症及癌前病变患者幽门螺杆菌的sabA基因CT双核苷酸重复序列调节区多态性。结果 sabA基因调节区的阳性检测率为85%,功能性sabA基因占所有测序菌株的55%。对随机挑选的18株检测阳性菌株进行测序分析,结果显示在碱基水平及氨基酸水平存在显著的遗传多态性。对sabA基因调节区的氨基酸序列聚类分析中发现,本研究菌株与国际已经完成测序的7株幽门螺杆菌可以明显的分为两个组,即中国组与西方组。结论 sabA基因CT双核苷酸重复序列调节区在中国菌株中普遍存在,且在翻译水平有很显著的多态性。聚类分析发现含有功能性sabA基因的幽门螺杆菌菌株多态性存在明显的地域性分布差异。

关键词：幽门螺杆菌 sabA基因 CT重复片段地域性分布

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microRNA在胃肠道肿瘤中的研究进展

中国肿瘤临床 2010年第11期37卷 656-659页

作者：黎伯胜肖斌刘真(综述) 邹全明(审校) 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市400038

microRNA(miRNA)是一段长度约22nt的内源性非编码单链RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达。研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用。近年来,miRNA已经被证实能够抑制癌基因... 详细信息

microRNA(miRNA)是一段长度约22nt的内源性非编码单链RNA分子,能在转录后水平调控基因的表达。研究证实,miRNA在细胞增殖、发育、分化、凋亡、代谢、信号转导以及肿瘤发生中发挥重要的调节作用。近年来,miRNA已经被证实能够抑制癌基因或抑癌基因的表达,参与了胃肠道肿瘤的发生和发展。本文就miRNA在人胃肠道肿瘤中的作用作一综述。

关键词：微小RNA 胃肠道癌幽门螺杆菌

miR-222在胃癌中的表达分析及其靶基因FOS的鉴定

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第三军医大学学报 2010年第24期32卷 2577-2581页

作者：朱恩东李娜肖斌黎伯胜毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因。方法选取第三军医大学新桥医院普外科10例患者的胃癌及远癌组织,匀浆法提取总RNA,用Real-time PCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan,MICROCOSM及PicTa... 详细信息

目的分析miR-222在胃癌中的表达水平并鉴定miR-222的靶基因。方法选取第三军医大学新桥医院普外科10例患者的胃癌及远癌组织,匀浆法提取总RNA,用Real-time PCR法检测miR-222表达。利用miRNA靶基因预测数据库TargetScan,MICROCOSM及PicTar对miR-222的靶基因进行预测。化学合成包含有miR-222结合位点的靶基因3′非编码区(3′UTR)退火引物,插入荧光素酶报告载体pMIR-REPORT及绿色荧光蛋白(GFP)报告载体pMIR-GFP-RE-PORT,检测荧光素酶的活性变化及观察GFP表达量,并在蛋白水平用Western blot检测miR-222对靶基因的抑制。结果 miR-222在70%(7/10)的胃癌组织样本中表达上调。生物信息学(TargetScan,MICROCOSM及PicTar 3个miRNA靶基因预测数据库)分析可得在包括人类在内的不同物种中,FOS基因3′UTR区都有miR-222的保守结合种子序列。通过荧光素酶活性检测和GFP抑制试验可得miR-222在mRNA水平可以与FOS基因结合。Western blot结果显示miR-222可以抑制c-fos蛋白表达。结论 miR-222在胃癌样本中表达上调,证明FOS为miR-222的一个靶基因。

关键词： miR-222 FOS 胃癌

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miRNA在细胞因子表达调控中的作用

生命的化学 2010年第4期30卷 514-517页

作者：李娜肖斌邹全明毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

最新研究表明miRNA在免疫系统的精细调节中发挥重要作用,本综述则重点探讨miRNA如何调节细胞因子基因的机制。细胞因子转录后水平的调节主要是通过使富含腺嘌呤/尿嘧啶元件(AU-rich element,ARE)稳定性降低,然而miRNA表达具有空间和时... 详细信息

最新研究表明miRNA在免疫系统的精细调节中发挥重要作用,本综述则重点探讨miRNA如何调节细胞因子基因的机制。细胞因子转录后水平的调节主要是通过使富含腺嘌呤/尿嘧啶元件(AU-rich element,ARE)稳定性降低,然而miRNA表达具有空间和时间上的特异性,使得其在上述过程中发挥了重要作用。深入理解miRNA调节免疫反应的机制,不仅有助于鉴定调节免疫反应的新靶标,还有助于建立基于miRNA的有效新疗法。

关键词： microRNA 细胞因子富含腺嘌呤/尿嘧啶元件

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中国防痨杂志 2010年第11期32卷 756-759页

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科天津300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆400036

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法用大肠埃希菌做为阴性对照,提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过ApaⅠ/EcoRⅤ、KpnⅠ/SmaⅠ双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论 iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：分枝杆菌,结核细菌蛋白质类多态性,限制性诊断长度

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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2010年中国防痨协会临床/基础专业学术大会

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科天津 300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 解放军第二五四医院检验科天津 300142 第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆 400038 重庆市结核基因诊断中心实验室重庆 400020 重庆市公共卫生医疗救治中心重庆 400036

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性，确认其保守性，分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠杆菌做为阴性对照，提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的... 详细信息

目的：研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性，确认其保守性，分析依赖利福平结核分枝杆菌(依R菌)在利福平(R)培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法：用大肠杆菌做为阴性对照，提取依R菌(14株)、耐R菌(23株)、R敏感的结核分枝杆菌(12株)、结核分枝杆菌标准株H37Rv及BCG(共51株)的细菌基因组DNA，利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因，通过ApaI／EcoRV、Kpn I／Sma I双酶切，琼脂糖凝胶电泳检测其带型，对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果：实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同，测序结果亦证实iniB基因无突变。结论：iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0341蛋白编码基因iniB 限制性片段长度多态性分析结核病

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结核分枝杆菌Rv0341蛋白编码基因iniB的多态性分析

2010年中国防痨协会临床专业委员会和基础细菌免疫专业委员会专题研讨会

作者：吴园胡频频王易伟李秀全毛旭虎钟敏解放军第二五四医院检验科第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市结核基因诊断中心实验室重庆市公共卫生医疗救治中心

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）在利福平（R）培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法:用大肠杆菌做为阴性对照,提取依R菌（14株）、耐R菌（23株）、R敏感... 详细信息

目的研究结核分枝杆菌假设蛋白Rv0341编码基因iniB的多态性,确认其保守性,分析依赖利福平结核分枝杆菌（依R菌）在利福平（R）培养管中Rv0341高表达的可能原因。方法:用大肠杆菌做为阴性对照,提取依R菌（14株）、耐R菌（23株）、R敏感的结核分枝杆菌（12株）、结核分枝杆菌标准株HRv及BCG（共51株）的细菌基因组DNA,利用PCR自基因组DNA中扩增iniB基因,通过Apa I/EcoRV、Kpn I/Sma I双酶切,琼脂糖凝胶电泳检测其带型,对iniB基因进行限制性片段长度多态性分析并测序。结果:实验组中iniB基因的酶切图谱完全相同,测序结果亦证实iniB基因无突变。结论:iniB基因在对R依赖、耐药和敏感等不同类型的结核分枝杆菌中是相对保守的;依R菌在Rv0341蛋白表达方面的差异可能是RNA转录差异或利福平诱导的结果。

关键词：结核分枝杆菌 Rv0341 iniB 限制性片段长度多态性分析

鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选

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中国生物制品学杂志 2009年第2期22卷 111-114,123页

作者：刘璐曾浩罗萍吴剑张卫军毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3... 详细信息

目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。

关键词： EHEC O157:H7 Stx2亚单位噬菌体 Fab抗体库