检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 773-776页

作者：井申荣邹全明曾韦锟毛旭虎刘开云第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关键词：白细胞介素10 毕赤酵母分泌表达生物学活性重组人白细胞介素10 生物学活性测定毕赤酵母 IL-10基因质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western EcoRⅠ

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白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

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中国生物制品学杂志 2007年第2期20卷 81-86页

作者：井申荣邹全明洪愉郭刚毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(A... 详细信息

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。

关键词：白细胞介素-10 毕赤酵母多拷贝表达盒

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沙鼠感染幽门螺杆菌后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40表达水平的分析

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1320-1322页

作者：刘开云郭刚解庆华邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室

目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组... 详细信息

目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组织作半定量RT-PCR检测INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA。结果与对照组相比,沙鼠感染Hp后,胃粘膜INF-γmRNA水平显著增加(P<0·05),IL-4mRNA水平显著降低(P<0·05),IL-12p40mRNA水平变化不显著(P>0·05)。结论Hp感染沙鼠诱导Th1型免疫应答,同时抑制Th2免疫应答,而对单核巨噬细胞的活化作用不明显。

关键词：幽门螺杆菌免疫应答 RT-PCR 蒙古沙鼠

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幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化

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第三军医大学学报 2008年第17期30卷 1587-1590页

作者：张卫军郭刚刘开云解庆华邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室

目的克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul)。方法采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂lt... 详细信息

目的克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul)。方法采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b(+)中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌*** BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414-ltB(AUL)。融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白。结果PCR扩增出1350bp的目的基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯。纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上。Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性。结论成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性。

关键词：幽门螺杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合蛋白

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重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫学性质研究

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第三军医大学学报 2003年第10期25卷 887-889页

作者：鲁东水毛旭虎邹全明吴超张卫军第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的　分析重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫学性质。方法　重组尿素酶B亚单位注射免疫BALB/c小鼠、家兔 ,双向琼脂扩散、ELISA、免疫印迹分析特异抗体的产生及性质。结果　重组尿素酶B亚单位能有效刺激机体的免疫应答 ,且产生的抗体... 详细信息

目的　分析重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫学性质。方法　重组尿素酶B亚单位注射免疫BALB/c小鼠、家兔 ,双向琼脂扩散、ELISA、免疫印迹分析特异抗体的产生及性质。结果　重组尿素酶B亚单位能有效刺激机体的免疫应答 ,且产生的抗体能与天然幽门螺杆菌发生抗原抗体反应。结论　重组尿素酶B亚单位表现出天然幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫学性质。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位基因重组免疫学性质

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表达肠出血性大肠杆菌O157:H7 EspA抗原的减毒沙门氏菌株的构建

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免疫学杂志 2007年第2期23卷 187-190页

作者：宁元元毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋... 详细信息

目的利用平衡致死系统构建表达O157:H7 EspA的减毒鼠伤寒沙门氏菌。方法构建表达EspA的重组质粒,再将其转入终宿主菌减毒鼠伤寒沙门氏菌x4550株中构建成口服活疫苗株,用IPTG进行诱导表达,经聚丙烯酰胺凝胶电泳、Westen-blot检测EspA蛋白的表达情况。并观察重组菌体外培养的稳定性。结果利用宿主-载体平衡致死系统构建了表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌,经Tricine-SDS-PAGE电泳出现了1条Mr约21000的蛋白条带,Westen-blot检测能与抗EspA的单克隆抗体发生特异性反应。且在没有选择压力的条件下体外能稳定地繁殖、生长和传代。结论表达O157:H7 EspA的重组减毒沙门氏菌构建成功,为发展口服抗EHEC O157:H7的疫苗奠定了初步基础。

关键词：减毒鼠伤寒沙门氏菌平衡致死系统 EHEC O157:H7

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沙鼠IgG兔抗血清的制备及其在IgG抗体检测中的应用

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 227-229,232页

作者：吴超张卫军刘开云邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,... 详细信息

目的用纯化的蒙古沙鼠血清IgG制备相应兔抗血清,并用于幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)疫苗免疫后沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。方法采用饱和硫酸铵沉淀法和Q sepharose high performance阴离子交换层析法纯化蒙古沙鼠血清IgG,免疫日本大白耳兔制备兔抗沙鼠IgG抗血清并进行rProtein A亲和纯化,建立间接ELISA方法用于检测Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠后血清抗原特异性IgG水平。结果以纯化的蒙古沙鼠血清IgG(纯度大于98%)免疫日本大白耳兔获得相应兔抗血清,经亲和层析后其纯度大于90%,回收率约为85%,双扩效价为1:16,ELISA效价为1:320 000;ELISA检测结果显示Hp疫苗注射免疫蒙古沙鼠于第2次免疫后产生高水平IgG,第4次免疫后第7天IgG水平达到高峰,随后几周仍然保持高水平。结论所制备的兔抗沙鼠IgG抗体可以用于蒙古沙鼠血清中抗原特异性IgG的检测。

关键词：蒙古沙鼠IgG 抗血清蛋白纯化 ELISA

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重组人幽门螺杆菌尿素酶B亚单位及其生物学性质

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第一军医大学学报 2003年第6期23卷 549-552页

作者：鲁东水毛旭虎邹全明吴超杨珺张卫军王缚鲲解庆华罗萍第三军医大学医学检验系临床微生物学与免疫学教研室重庆400038

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆UreB基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达UreB的重组质粒pET-11C-UreB,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导... 详细信息

目的基因重组人幽门螺杆菌(Hp)尿素酶B亚单位(UreB)并分析重组蛋白的生物学性质。方法采用PCR从我国临床分离的Hp菌株中克隆UreB基因,并通过DNA重组技术构建非融合表达UreB的重组质粒pET-11C-UreB,转化至大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达。结果重组UreB在大肠杆菌中表达,相对分子质量约62 000,表达率26%,N端15个氨基酸序列为MKKISRKEYVSMYGP,肽图及氨基酸组成成分分析结果与理论预测值吻合。以重组UreB免疫BalB/c小鼠,能产生抗UreB抗体。ELISA及Western blotting分析显示,重组UreB具有良好的免疫原性和反应性,表现出与天然Hp UreB相似的生物学功能。结论为重组UreB作为Hp亚单位疫苗成分奠定了免疫学基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B亚单位生物学性质大肠杆菌

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BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答

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第三军医大学学报 2004年第9期26卷 753-755页

作者：郭鹰邹全明朱永红吴超郭刚毛旭虎袁小澎第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、... 详细信息

目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN γ的变化。结果　单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组 (PBS)相差不显著 ,而rHspA +佐剂组与对照组相差非常显著。rHspA +佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养 ,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应 ;不加佐剂免疫组分泌IFN γ水平增加 ,IL 4水平未发现增加 ;而加佐剂免疫组除IFN γ水平增加外 ,IL 4水平也发现显著增加。结论　BALB

关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白A 口服疫苗免疫应答

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pT-ureB及pT-hpaA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

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第三军医大学学报 2005年第23期27卷 2321-2323页

作者：柏杨邹全明曾韦锟第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照... 详细信息

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照,末次免疫后第2、4、6周分别用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度。结果两免疫组在末次免疫后第2周均可出现特异性IgG,抗体滴度随时间逐渐增高;末次免疫后第6周,两免疫组的抗体滴度与对照组相比较,差异极显著(P<0.01);且pT-ureB免疫组抗体滴度显著高于pT-hpaA(P<0.01)。结论pT-ureB具有良好的免疫原性,诱导体液免疫应答的能力优于pT-hpaA。

关键词：幽门螺杆菌 ureB hpaA 核酸疫苗小鼠免疫应答

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