检索结果-内蒙古大学图书馆

中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 773-776页

作者：井申荣邹全明曾韦锟毛旭虎刘开云第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关键词：白细胞介素10 毕赤酵母分泌表达生物学活性重组人白细胞介素10 生物学活性测定毕赤酵母 IL-10基因质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western EcoRⅠ

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白细胞介素-10基因多拷贝表达盒的构建及在毕赤酵母中的表达

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中国生物制品学杂志 2007年第2期20卷 81-86页

作者：井申荣邹全明洪愉郭刚毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(A... 详细信息

目的构建白细胞介素-10(IL-10)基因多拷贝表达盒,提高IL-10在毕赤酵母中的表达水平。方法体外构建重组表达载体αIL-10/pAO815,BamHⅠ和BglⅡ双酶切获得目的基因表达盒(AOX-αIL-10),再连接到BglⅡ酶切位点处,依次构建多拷贝重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815。从质粒pPIC9K上用NdeⅠ和SalⅠ双酶切获得Kan抗性基因,重组到多拷贝表达载体n(AOX-αIL-10)/pAO815上。重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815电转化毕赤酵母,PCR筛选含有IL-10基因的酵母转化子,甲醇诱导表达,对表达量高的转化子再次经重组载体n(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan电转化,高浓度G418抗性筛选二次酵母转化子,使用甲醇诱导表达。ELISA测定IL-10含量,MC/9细胞测定IL-10活性。结果所构建的8拷贝表达盒的重组载体8(AOX-αIL-10)/pAO815和4拷贝表达盒4(AOX-αIL-10)/pAO815-Kan,转化子分泌表达IL-10水平最高,为(8.25±1.65)mg/L,比活性为1.465×105U/mg。结论已成功构建了高拷贝表达盒,并提高了IL-10在毕赤酵母中的表达水平。

关键词：白细胞介素-10 毕赤酵母多拷贝表达盒

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沙鼠感染幽门螺杆菌后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40表达水平的分析

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第三军医大学学报 2005年第13期27卷 1320-1322页

作者：刘开云郭刚解庆华邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室

目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组... 详细信息

目的通过比较幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,Hp)感染蒙古沙鼠前后胃粘膜INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA水平的变化,确定Hp感染在蒙古沙鼠胃粘膜诱发的免疫应答方式。方法采用临床分离的Hp强毒株对蒙古沙鼠进行感染,4周后剖杀。取胃粘膜组织作半定量RT-PCR检测INF-γ、IL-4及IL-12p40mRNA。结果与对照组相比,沙鼠感染Hp后,胃粘膜INF-γmRNA水平显著增加(P<0·05),IL-4mRNA水平显著降低(P<0·05),IL-12p40mRNA水平变化不显著(P>0·05)。结论Hp感染沙鼠诱导Th1型免疫应答,同时抑制Th2免疫应答,而对单核巨噬细胞的活化作用不明显。

关键词：幽门螺杆菌免疫应答 RT-PCR 蒙古沙鼠

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幽门螺杆菌双价亚单位分子内佐剂疫苗的构建表达与纯化

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第三军医大学学报 2008年第17期30卷 1587-1590页

作者：张卫军郭刚刘开云解庆华邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室

目的克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul)。方法采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂lt... 详细信息

目的克隆表达幽门螺杆菌外膜蛋白烷基过氧化氢还原酶ahpC、ureB414功能片段基因,与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位构建融合基因ahpC-ureB414-ltB(aul)。方法采用重叠延伸PCR的方法,以AhpC做为融合蛋白前端,与UreB414功能片段及黏膜佐剂ltB依次串联,在片段间引入5个氨基酸的柔性Linker GGGGS进行连接;将融合基因构建在原核表达载体pET-22b(+)中,经酶切及测序鉴定后转化宿主菌*** BL21(DE3),IPTG诱导表达融合蛋白ahpC-UreB414-ltB(AUL)。融合蛋白经AKTA-explore纯化仪纯化融合蛋白。结果PCR扩增出1350bp的目的基因片段aul,工程菌pET22b-aul/BL21经IPTG诱导后,SDS-PAGE显示有新生的蛋白表达条带,相对分子质量约为50×103,与预期值一致,目的蛋白约占菌体总蛋白的28.7%,重组蛋白用Ni2+-NTA树脂提纯。纯化后的蛋白质经SDS-PAGE分析可见单一条带,图像软件分析表明纯度可达85%以上。Western blot显示重组蛋白质具有良好的免疫反应性。结论成功构建、表达融合蛋白rAUL,纯化后的融合蛋白保持各亚单位组分及佐剂的独立免疫反应性。

关键词：幽门螺杆菌不耐热肠毒素B亚单位融合蛋白

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BALB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌热休克蛋白A疫苗的免疫应答

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第三军医大学学报 2004年第9期26卷 753-755页

作者：郭鹰邹全明朱永红吴超郭刚毛旭虎袁小澎第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、... 详细信息

目的　评价重组热休克蛋白A (rHspA)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成分的效果。方法　采用重组Hp保护性抗原HspA与粘膜免疫佐剂 (霍乱毒素 ,CT ;大肠不耐热肠毒素B亚单位 ,LTB)共口服免疫BALB c小鼠 ,ELISA分析小鼠血清、胃肠粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况以及IL4、IFN γ的变化。结果　单纯口服rHspA组产生的抗体水平与对照组 (PBS)相差不显著 ,而rHspA +佐剂组与对照组相差非常显著。rHspA +佐剂组小鼠脾淋巴细胞体外培养 ,在Hp抗原刺激作用下出现明显的增殖反应 ;不加佐剂免疫组分泌IFN γ水平增加 ,IL 4水平未发现增加 ;而加佐剂免疫组除IFN γ水平增加外 ,IL 4水平也发现显著增加。结论　BALB

关键词：幽门螺杆菌热休克蛋白A 口服疫苗免疫应答

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pT-ureB及pT-hpaA核酸疫苗诱导小鼠免疫应答的实验研究

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第三军医大学学报 2005年第23期27卷 2321-2323页

作者：柏杨邹全明曾韦锟第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照... 详细信息

目的观察并比较携带Hp不同抗原基因的质粒pTCAE-ureB(pT-ureB)和pTCAE-hpaA(pT-hpaA)肌注小鼠后诱导的体液免疫应答。方法构建真核表达质粒pT-ureB;与已成功构建的质粒pT-hpaA分别作为疫苗方案,肌肉注射免疫BALB/c小鼠并设置空质粒对照,末次免疫后第2、4、6周分别用间接ELISA法检测小鼠血清特异性IgG抗体滴度。结果两免疫组在末次免疫后第2周均可出现特异性IgG,抗体滴度随时间逐渐增高;末次免疫后第6周,两免疫组的抗体滴度与对照组相比较,差异极显著(P<0.01);且pT-ureB免疫组抗体滴度显著高于pT-hpaA(P<0.01)。结论pT-ureB具有良好的免疫原性,诱导体液免疫应答的能力优于pT-hpaA。

关键词：幽门螺杆菌 ureB hpaA 核酸疫苗小鼠免疫应答

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Hp中性粒细胞激活蛋白研究进展

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 64-67,72页

作者：高原邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及临床免疫学教研室重庆400038

幽门螺杆菌(Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体,可引起慢性胃炎和消化性溃疡,并与胃癌密切相关。人类幽门螺杆菌感染的特征是胃黏膜炎症部位中性粒细胞持续浸润。幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(***-lorineutrophil-act... 详细信息

幽门螺杆菌(Hp)是一种参与多种胃、十二指肠疾病的重要人类病原体,可引起慢性胃炎和消化性溃疡,并与胃癌密切相关。人类幽门螺杆菌感染的特征是胃黏膜炎症部位中性粒细胞持续浸润。幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白(***-lorineutrophil-activating protein,HP-NAP)正是由于其能活化中性粒细胞而被如此命名。HP-NAP不仅是重要的毒力因子,而且是主要的候选疫苗抗原。本文综述了HP-NAP的结构、生物学活性和致病机制等的研究进展,并对其应用前景进行了展望。

关键词：幽门螺杆菌中性粒细胞激活蛋白中性粒细胞:毒力因子抗原

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幽门螺杆菌沙鼠感染模型的定量分析研究

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第三军医大学学报 2002年第3期24卷 286-288页

作者：郭刚刘开云解庆华王毅超曾韦锟邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)蒙古沙鼠感染模型 ,并通过比较定量培养、快速脲酶试验和ELISA三种方法 ,确定Hp动物模型的最佳评判指标。方法　采用临床分离的Hp强毒株对 2 0只蒙古沙鼠进行感染 ,4周后剖杀。取血按常规E... 详细信息

目的　建立幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)蒙古沙鼠感染模型 ,并通过比较定量培养、快速脲酶试验和ELISA三种方法 ,确定Hp动物模型的最佳评判指标。方法　采用临床分离的Hp强毒株对 2 0只蒙古沙鼠进行感染 ,4周后剖杀。取血按常规ELISA法检测抗Hp抗体 ;分别剪取胃窦、胃体和胃底粘膜组织作定量培养 ;其余组织作快速脲酶试验及病理检查。结果　经定量培养结果显示沙鼠的Hp感染率达到 80 % (16/ 2 0 ) ,胃窦、胃体和胃底的Hp定植密度的对数均值分别为 5 2 4± 1 5 0、4 11± 3 2 2、和0 97± 2 3 9;16只Hp阳性沙鼠中脲酶试验有 4只阳性 ,ELISA有 7只阳性 ,阳性鼠的感染均值显著高于阴性鼠。结论　经筛选的Hp强毒株成功感染沙鼠后 4周 ,Hp主要定植于胃窦和胃体部 ;

关键词：幽门螺杆菌动物模型定量培养蒙古沙鼠

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口服聚乙二醇改性聚乳酸靶向分布实验

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第三军医大学学报 2002年第12期24卷 1415-1415,1419页

作者：曾韦锟任建敏邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

聚乙二醇改性聚乳酸（PELA）是能在生物体内被水解或酶解后睡并排出体外的高分子聚合物。它具有无毒、靶向、缓释性等优良性能，因此在载药方面显示出良好的应用前景。通过控制制造工艺，可以将其不同直径大小的微球，从而产生不同的定... 详细信息

聚乙二醇改性聚乳酸（PELA）是能在生物体内被水解或酶解后睡并排出体外的高分子聚合物。它具有无毒、靶向、缓释性等优良性能，因此在载药方面显示出良好的应用前景。通过控制制造工艺，可以将其不同直径大小的微球，从而产生不同的定位效果。本研究试采用与人在解剖结构上有较好可比性的小型猪为实验对象，采用造影剂示踪法，从大体上研究微球在动物胃肠道的靶向分布情况。

关键词：口服聚乙二醇改性聚乳酸靶向分布实验

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BalB/c小鼠口服重组幽门螺杆菌尿素酶B亚单位的免疫应答

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第三军医大学学报 2002年第3期24卷 280-282页

作者：毛旭虎邹全明鲁东水曾玮锟郭刚王毅超解庆华第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆400038

目的　评价重组尿素酶B亚单位 (rUreB)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法　采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)共口服免疫BalB/c小鼠 ,ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液... 详细信息

目的　评价重组尿素酶B亚单位 (rUreB)作为幽门螺杆菌 (Hp)口服疫苗成份的效果、探讨Hp的免疫保护机制。方法　采用重组Hp保护性抗原UreB与粘膜免疫佐剂霍乱毒素B亚单位 (CTB)共口服免疫BalB/c小鼠 ,ELISA分析血清、唾液和粪便、胃粘液中IgG、IgA抗体水平 ,体外培养脾淋巴细胞在Hp刺激下的增殖情况及IL 4、IFN γ的变化。结果　BalB/c小鼠口服rUreB和CTB混合制剂能有效激发机体产生全身和局部特异性的体液免疫应答和细胞免疫应答。

关键词：重组尿素酶B亚单位免疫应答幽门螺杆菌 BalB/c小鼠免疫保护机制

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