检索结果-内蒙古大学图书馆

中国肿瘤临床 2013年第9期40卷 529-533页

作者：黎伯胜左钱飞肖斌邹全明郭刚第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室国家免疫生物制品工程技术研究中心重庆市生物制药工程技术研究中心重庆市400038

目的:分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本,用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧... 详细信息

目的:分析miR-25在胃癌组织中的表达水平并鉴定其新的靶基因。方法:选取10例胃癌患者的胃癌及癌旁正常组织样本,用qRT-PCR法检测miR-25的表达水平。利用miRNA靶基因预测数据库预测miR-25的靶基因。构建荧光素酶载体(pMIR-TOB1)及绿色荧光蛋白报告载体(pMIR-GFP-TOB1)(含有miR-25结合位点的TOB1的3'UTR片段),利用荧光素酶活性实验和GFP荧光强度报告实验鉴定miR-25的预测靶基因(TOB1)。qRT-PCR法和Western blot法分别检测TOB1的mRNA和蛋白质的表达水平。结果:miR-25在80%(8/10)的胃癌组织样本中表达上调。miR-25模拟物显著抑制了荧光素酶的活性(P<0.01)和GFP荧光强度。miR-25模拟物显著下调了AGS细胞中TOB1的mRNA(P<0.05)和蛋白质的表达。结论:miR-25在人胃癌组织中表达上调,miR-25能结合TOB1的3'UTR并下调TOB1的mRNA和蛋白质的表达。

关键词： miR-25 TOB1 胃癌

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百日咳毒素S1亚单位突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

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中国生物制品学杂志 2007年第4期20卷 264-266,270页

作者：张晓丽邹全明章金勇张卫军第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得... 详细信息

目的克隆百日咳毒素S1亚单位,获得其突变体(S1/9K-129G,rS1),构建原核表达系统,并鉴定融合蛋白的特异性。方法采用PCR和重叠延伸扩增得到突变体,将其与pMD18-T连接,转化至大肠杆菌DH5α,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18-T-rS1,经双酶切得到rS1活性结构域编码片段。将其插入pQE-30载体中,转化大肠杆菌M15株,经IPTG诱导表达。表达产物经镍离子柱纯化,并进行SDS-PAGE和Western blot鉴定。结果PCR及重叠延伸获得了约700bp的目的基因片段,并获得阳性重组表达载体克隆,表达产物为相对分子质量27000左右的蛋白,Western blot检测能与兔抗百日咳毒素多价抗血清发生反应。结论成功表达并纯化了百日咳毒素S1亚单位突变体,为研制百日咳疫苗候补抗原的相关分子免疫学研究奠定了基础。

关键词：百日咳毒素 S1亚单位突变体原核表达

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鼠源性抗EHEC O157:H7 Stx2噬菌体Fab抗体库的构建及筛选

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中国生物制品学杂志 2009年第2期22卷 111-114,123页

作者：刘璐曾浩罗萍吴剑张卫军毛旭虎邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室暨重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3... 详细信息

目的构建鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,并从中筛选特异性的抗体。方法用EHEC O157∶H7 Stx2类毒素免疫BALB/c小鼠,取脾分离淋巴细胞,提取总RNA,RT-PCR分别扩增抗体轻、重链(к和Fd)基因,经双酶切依次克隆入噬粒载体pComb3X中,电转化大肠杆菌XL1-Blue,以辅助噬菌体M13K07进行超感染,构建抗EHEC O157∶H7 Stx2的Fab噬菌体抗体库。以纯化的Stx2为抗原进行筛选,获得抗EHECO157∶H7Stx2的特异性Fab抗体,Western blot法检测噬菌体抗体与毒素抗原的结合活性,并对所得阳性克隆进行基因序列分析。结果构建了一个库容为1.56×107的Fab抗体库,筛选出3株特异性较强的阳性克隆,其中2个可与Stx2A1亚单位抗原反应,1个可与Stx2B亚单位抗原反应。基因序列分析显示,轻、重链可变区氨基酸序列与GenBank中已注册的鼠免疫球蛋白可变区氨基酸序列同源性分别为98.5%和99.6%。结论已成功构建了鼠源性抗EHEC O157∶H7 Stx2噬菌体Fab抗体库,为进一步制备抗EHECO157∶H7Stx2的治疗性人源化抗体奠定了基础。

关键词： EHEC O157:H7 Stx2亚单位噬菌体 Fab抗体库

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抗志贺毒素ⅡB亚单位单克隆抗体识别表位的初步鉴定

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第三军医大学学报 2007年第19期29卷 1831-1833页

作者：陈洪章曾浩毛旭虎罗萍余抒邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的初步确定抗志贺毒素ⅡB亚单位(Stx2B)单克隆抗体(McAb)1H9、1H10、3E5识别的抗原表位。方法运用DNAstar Protean软件,对Stx2B(1～72aa)全抗原进行表位预测;采用截短法分段构建重组质粒Stx2B50(23～72aa),Stx2B54(1～54aa)。用IPTG诱导表达融合蛋白。对表达产物进行SDS-PAGE蛋白电泳及Westernblot分析。结果1H9、1H10能够识别Stx2B和Stx2B50;3E5能够识别Stx2B、Stx2B50和Stx2B54。结论McAb1H9、1H10识别的抗原表位位于55～72aa,McAb3E5识别的抗原表位位于23～54aa。

关键词：志贺毒素ⅡB亚基抗原表位鉴定

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幽门螺杆菌表位疫苗的设计、构建、表达及其免疫原性研究

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 381-383,386页

作者：毛旭虎石云吴超张卫军邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的设计幽门螺杆菌(Hp)的表位疫苗并对其免疫原性进行研究。方法将Hp的尿素酶B亚单位的三个Th表位及一个B细胞表位串联,表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,合成全基因,克隆到pET22b载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;表达的重组蛋白经鉴定... 详细信息

目的设计幽门螺杆菌(Hp)的表位疫苗并对其免疫原性进行研究。方法将Hp的尿素酶B亚单位的三个Th表位及一个B细胞表位串联,表位之间用两个赖氨酸(KK)间隔,合成全基因,克隆到pET22b载体上,在大肠杆菌BL21(DE3)中表达;表达的重组蛋白经鉴定纯化后皮下免疫Balbc小鼠,检测细胞免疫应答及体液免疫应答。结果克隆表达的重组表位疫苗蛋白纯化后纯度达到95%,经N端测序证实为设计的表位疫苗蛋白,Th表位多肽(U546-561、U229-244、U237-251)、表位疫苗蛋白及rUreB均能够刺激表位疫苗致敏的小鼠淋巴细胞增殖(SI>2),并且此疫苗能够刺激机体产生特异性抗体。结论本研究中表位疫苗的设计方法能够使疫苗中包含的四个表位均发挥功能,并且具有较强的免疫原性,为研究Hp预防性和治疗性疫苗提供实验基础。

关键词：幽门螺杆菌尿素酶 B亚单位表位疫苗

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幽门螺杆菌疫苗候选抗原lpp20基因的克隆表达及其纯化研究

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第三军医大学学报 2006年第14期28卷 1499-1501页

作者：张卫军邹全明毛旭虎罗萍解庆华李玉红第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)lpp20基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入表达载体pET22b中,重组载体pET2... 详细信息

目的克隆表达幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)lpp20基因,为筛选预防或治疗幽门螺杆菌感染的疫苗保护性抗原奠定基础。方法用PCR方法从临床分离株9806的染色体DNA中扩增出lpp20基因片段,将目的基因插入表达载体pET22b中,重组载体pET22b-Lpp20经DNA测序鉴定后,将重组质粒转化大肠杆菌***21(DE3),IPTG诱导表达。采用镍离子亲和层析纯化蛋白,并用SDS-PAGE和W estern b lot鉴定。结果PCR扩增的lpp20基因长度为528bp,经酶切和测序分析,插入到载体的基因片段与GenBank公布的序列相似性达99%,SDS-PAGE显示,经IPTG诱导目的蛋白占总蛋白的19.7%,纯化后,蛋白纯度达80%以上。W estern b lot检测该蛋白与兔抗Hp的多克隆抗血清发生结合反应。结论成功构建了lpp20表达载体pET22b-Lpp20,并在大肠杆菌中表达。

关键词：幽门螺杆菌 lpp20基因克隆

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重组人IL-10融合蛋白的表达及其生物学活性测定

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 399-401,405页

作者：井申荣邹全明洪愉毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL10。方法限制性内切酶NcoⅠ和BamHⅠ双酶切目的基因IL10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL10pET32a,测序正确后转化***21(DE3),不同温度、低浓度I... 详细信息

目的在大肠杆菌中表达重组人白细胞介素10融合蛋白,获得有生物学活性的IL10。方法限制性内切酶NcoⅠ和BamHⅠ双酶切目的基因IL10,插入到同样双酶切的表达载体pET32a,构建重组载体IL10pET32a,测序正确后转化***21(DE3),不同温度、低浓度IPTG诱导工程菌表达目的蛋白,SDSPAGE和Westernblot检测目的蛋白的表达,ELISA和MC9细胞增殖法分别测定IL10的含量及生物学活性。结果构建的表达重组载体IL10pET32a经酶切鉴定和序列测定表明完全正确,诱导工程菌可以表达可溶性的融合蛋白IL10Trx,同时也存在包含体融合蛋白,经Westernblot鉴定存在有目的蛋白IL10,MC9细胞增殖法测定可溶性的融合蛋白具有生物学活性。结论成功表达了具有生物学活性的融合蛋白IL10Trx,有助于下游纯化和制备hIL10基因工程药物。

关键词：重组人白细胞介素10 融合蛋白可溶性生物学活性

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肠道黏膜免疫系统抗原提呈通路研究进展

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免疫学杂志 2006年第z1期22卷 42-46页

作者：周维英邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

抗原提呈是免疫应答过程中的核心环节,也是一个非常复杂的分子间相互作用的过程。本文以胃肠道黏膜存在的免疫细胞为基础,在细胞水平和分子水平阐述肠道黏膜免疫系统抗原提呈通路的研究新进展。

关键词：肠道黏膜免疫抗原提呈

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抗重组志贺样毒素ⅡA亚单位单链抗体的构建及表达

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 374-376,380页

作者：毛旭虎马颖陈洪章邹全明第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VHLinkerVL,并在VH基因5′端和VL基因3′端引入Sfi... 详细信息

目的构建重组志贺样毒素ⅡA亚单位(SLT2A)单链抗体基因(scFv),并在大肠杆菌中进行分泌表达。方法通过连接肽(Gly4Ser)3将已成功扩增的抗SLT2A单克隆抗体(mAb)5F3的VL和VH连接成scFv基因VHLinkerVL,并在VH基因5′端和VL基因3′端引入SfiⅠ和NotⅠ的酶切位点,克隆至经改造的分泌性表达载体pCANTAB6His中,转化EcoliHB2151,IPTG诱导表达。表达产物经亲和层析纯化后,SDSPAGE和Westernblot分析鉴定。结果经限制性酶切鉴定及DNA测序分析证实,基因构建正确。SDSPAGE和Westernblot分析表明scFv基因在大肠杆菌中得到表达,表达产物的相对分子质量为27000,与理论预期值相符,且可与相应抗原特异结合。结论成功地实现了抗SLT2AscFv基因的原核分泌表达,为探讨O157菌感染的机制及防治研究奠定了基础。

关键词：志贺样毒素单链抗体分泌表达

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幽门螺杆菌微球疫苗免疫诱导的免疫应答

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免疫学杂志 2006年第4期22卷 384-386页

作者：王毅超邹全明朱永红郭刚第三军医大学医学检验系临床微生物学及免疫学教研室重庆市生物制药工程技术研究中心重庆400038

目的通过对幽门螺杆菌微球免疫后Balbc小鼠血清IgG、IgA、胃肠sIgA的检测及脾脏IL4、IFNγ的mRNA表达水平、IgGASC、IgAASC数量的比较观察,探求疫苗的免疫保护机理。方法取Balbc小鼠口服免疫疫苗,剂量为150μg/(只·次),免疫时间为0... 详细信息

目的通过对幽门螺杆菌微球免疫后Balbc小鼠血清IgG、IgA、胃肠sIgA的检测及脾脏IL4、IFNγ的mRNA表达水平、IgGASC、IgAASC数量的比较观察,探求疫苗的免疫保护机理。方法取Balbc小鼠口服免疫疫苗,剂量为150μg/(只·次),免疫时间为0、14、30d。2周后取血清及胃肠洗液进行抗体检测,同时取脾脏检测细胞因子mRNA表达水平及ELISPOT检测抗体分泌细胞数量变化。结果免疫后小鼠以上检测指标与对照组比较均有不同程度的升高。结论微球疫苗所诱发的免疫保护是细胞免疫、体液免疫两者共同作用的结果。

关键词：微球疫苗幽门螺杆菌免疫应答

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