检索结果-内蒙古大学图书馆

肿瘤 2001年第3期21卷 213-214页

作者：司维柯罗朝学陈庆海第三军医大学医学检验系临床生化教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系核医学教研室第三军医大学西南医院检验科

目的　为探讨苦参碱抑制HepG2增殖的机制。方法　以不同浓度苦参碱作用于HepG2细胞不同时间用PI及AnnexinV FITC/PI双标记两法检测凋亡细胞。结果　 0 8,1 5 ,2 0g/L苦参碱处理细胞 72h ,细胞均出现了凋亡峰 ,凋亡细胞分别为 10 5 7,... 详细信息

目的　为探讨苦参碱抑制HepG2增殖的机制。方法　以不同浓度苦参碱作用于HepG2细胞不同时间用PI及AnnexinV FITC/PI双标记两法检测凋亡细胞。结果　 0 8,1 5 ,2 0g/L苦参碱处理细胞 72h ,细胞均出现了凋亡峰 ,凋亡细胞分别为 10 5 7,16 37,10 85 % ;细胞早期凋亡检测 :2 0 ,1 5 ,3 0g/L苦参碱分别作用 6h、12h、12h ,凋亡细胞分别达 7 7,8 6 ,15 7% ;当 3 0g/L苦参碱作用 12h ,坏死细胞达 2 1 9%。结论　一定浓度苦参碱可诱导HepG2细胞凋亡 ,凋亡与坏死相伴存在并呈剂量和时间依赖性。

关键词：苦参碱肿瘤细胞培养细胞凋亡流式细胞术肝肿瘤

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谈谈开展临床生化领域科研活动的尝试

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临床检验杂志 2002年第U8期20卷 130-132页

作者：司维柯第三军医大学医学检验系临床生化教研室重庆400038

检验医学(laboratory medicine)又称临床检验诊断学,是一门应用性强、年轻且发展非常迅速的学科,它是基础医学、临床医学及现代实验室科学技术在高层次上的结合,它的任务是为疾病的预防、诊断、治疗、病程监控和预后判断提供实验室的分... 详细信息

检验医学(laboratory medicine)又称临床检验诊断学,是一门应用性强、年轻且发展非常迅速的学科,它是基础医学、临床医学及现代实验室科学技术在高层次上的结合,它的任务是为疾病的预防、诊断、治疗、病程监控和预后判断提供实验室的分析手段和可靠的分析数据,并提供多层次的临床诊断和咨询.目前该学科的发展现状可用'三高'来概括:即高度自动化--先进的自动化仪器已普及到县区级医院检验科,逐渐取代了繁杂的手工操作.高度信息化--新仪器、新方法不断涌现,使原来单一的检测项目变成了多指标、全方位、连续动态反应疾病变化的多信息的实验数据.高速发展的学科--新理论、新知识、新技术层出不穷,使研究领域不断地扩大和深入,形成了多学科交叉的发展态势.所有这些均对从事检验医学的人员提出更高的要求:不但能高质量完成日常工作,为临床诊断提供可靠的实验数据,还应尝试进行一些改革和创新性的科研工作,这样才能不断地提高自身的业务水平,紧跟学科发展步伐而不被高速发展的科学技术所淘汰,同时为学科的发展作出贡献.

关键词：临床生物化学检验医学学科发展

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肺炎克雷伯菌黏附因子相关研究进展

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中国生物制品学杂志 2009年第12期22卷 1259-1262页

作者：方立超郑峻松第三军医大学医学检验系临床检验学教研室

肺炎克雷伯菌为机会性致病菌,是导致医院获得性尿道感染、肺炎、败血症和伤口感染的重要致病菌。黏附于宿主细胞表面是致病菌感染的第一步,也是关键的一步。本文就肺炎克雷伯菌黏附因子相关研究进展及其前景作一综述。

关键词：肺炎克雷伯菌黏附因子

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幽门螺杆菌UreB与大肠杆菌LTB基因融合及表达的研究

引用

中华微生物学和免疫学杂志 2002年第2期22卷 175-179页

作者：吴超邹全明郭红张卫军袁小澎毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物教研室第三军医大学附属新桥医院消化内科

目的　构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法　采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .... 详细信息

目的　构建和表达幽门螺杆菌尿素酶B亚单位 (UreB)与大肠杆菌不耐热肠毒素B亚单位 (LTB)的重组融合蛋白 ,并对其基本的生物学及免疫学特性进行研究。方法　采用PCR技术从幽门螺杆菌染色体DNA中扩增出 1713bp的ureB基因 ,并克隆至pFS2 .2载体中与ltB基因融合 ,将ltB ureB融合基因插入改造后的原核表达载体PinPointTMXa Ⅱ ,并在工程菌E .coliJM10 9中诱导表达。结果　经序列分析 ,ltB ureB融合基因由 2 10 3个碱基组成 ,为编码 70 1个氨基酸残基的多肽。SDS PAGE和Westernblot检测发现 ,融合蛋白的相对分子质量 (Mr)约为 75× 10 3 ,并与幽门螺杆菌感染的阳性血清发生抗原抗体反应 ,ELISA检测显示 ,融合蛋白中存在LTB组分。同时发现所表达的融合蛋白无尿素酶活性 ,但保持与LT受体神经节苷脂GM1结合的活性。结论　LTB

关键词：幽门螺杆菌尿素酶B 不耐热肠毒素B 基因融合原核表达

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抗人心脏型脂肪酸结合蛋白单克隆抗体的制备、表位鉴定及其应用

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细胞与分子免疫学杂志 2013年第6期29卷 620-624页

作者：韩起丛珊易维京陈莎梁文斌陈安胡川闽李淑慧第三军医大学医学检验系临床生物化学教研室重庆400038

目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和... 详细信息

目的制备抗人心脏型脂肪酸结合蛋白(H-FABP)单克隆抗体(mAb),鉴定其基本特性并通过配对检测临床样本血清,对已配对的mAb进行表位鉴定。方法通过已制备的H-FABP抗原和合成肽免疫BALB/c小鼠,常规融合筛选后进行抗体亚型鉴定、效价和亲和力检测,纯化mAb后通过间接ELISA、Western blot法对mAb进行特异性检测;将获得的mAb分别作为捕获和检测抗体,经过配对建立检测重组H-FABP的ELISA体系,并初步用于临床血清检测;采用生物信息学分析设计2段H-FABP表位,通过原核表达获得其短肽并纯化,通过Western blot法对配对的mAb进行表位鉴定。结果成功获得4株抗H-FABP特异性mAb,亚类分别为IgG2a和IgG2b,抗体效价为1∶51 200～1∶1024 000,亲和力最高可达到9.02×109mol/L;经Western blot法和间接ELISA鉴定均能够特异检测重组H-FABP蛋白,经过配对发现mAb 3-H5和1-F10能够检测重组H-FABP,并在其临床血清样本检测中发现正常组和急性心梗组之间H-FABP水平具有显著性统计学差异;通过表位鉴定发现未知表位的mAb 1-F10能够特异识别位点为H-FABP的第86到第133位氨基酸。结论制备了4株高特异性和高亲和力的抗H-FABPmAb,成功建立了检测临床样本血清中的ELISA体系,并对其表位进行了分析鉴定。

关键词： H-FABP 单克隆抗体 ELSIA体系检测表位鉴定

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微流控分析芯片在医学领域的应用

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生物工程学报 2006年第1期22卷 167-171页

作者：毕颖楠张惠静第三军医大学医学检验系分析化学教研室重庆400038

微全分析系统(μ_TAS)又称为芯片实验室,自从Manz等于20世纪90年代首次提出这一概念以来,经过十余年的发展μ_TAS已成为生物分析的一个独立领域并被学术界所认可。微流控分析芯片作为μ_TAS发展的主要方向以其快速、高效分析,低消耗和... 详细信息

微全分析系统(μ_TAS)又称为芯片实验室,自从Manz等于20世纪90年代首次提出这一概念以来,经过十余年的发展μ_TAS已成为生物分析的一个独立领域并被学术界所认可。微流控分析芯片作为μ_TAS发展的主要方向以其快速、高效分析,低消耗和微型化等特点发展非常迅速。在此结合微流控分析芯片在医学领域的应用状况,着重从基因检测、蛋白质分析和细胞分析等方面,对该技术在医学领域里的应用及其未来发展趋势作一综述。

关键词：微流控分析芯片基因检测蛋白质分析细胞分析

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类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染RAW264.7细胞模型的建立

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中国人兽共患病学报 2013年第3期29卷 282-285页

作者：方瑶潘静李倩顾江唐彬张卫军毛旭虎第三军医大学医学检验系临床微生物教研室重庆400038 第三军医大学医学检验系临床血液教研室重庆400038

目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法摸索类鼻疽伯克霍尔德氏菌培养条件、构建模型的感染条件(e.g.感染复数,感染时间),通过吉姆萨染色、透射电镜、活细胞工作站动... 详细信息

目的建立类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染小鼠巨噬细胞RAW264.7的细胞模型,为进一步研究其致病机制奠定基础。方法摸索类鼻疽伯克霍尔德氏菌培养条件、构建模型的感染条件(e.g.感染复数,感染时间),通过吉姆萨染色、透射电镜、活细胞工作站动态观察等确证胞内感染和宿主细胞的形态变化,分析病原菌侵袭率、胞内复制率和宿主反应性来评价该模型中病原菌侵入RAW264.7特点和病理损伤类型。结果确定了类鼻疽伯克霍尔德氏菌的一般培养条件,感染复数MOI=100感染宿主细胞,170g离心5min后37℃共孵1h以利于细菌侵入胞内,含250μg/ml卡那霉素的DMEM-10培养以杀死胞外病原菌。形态观察,类鼻疽伯克霍尔德氏菌感染后最早8h可观察到异物多核巨细胞(MNGC),RAW264.7细胞伸出伪足,相互融合。感染初期(<3h)TNF-α升高较快,9h后则下降至低值,直至感染后期(15～24h)再次升高。结论成功构建类鼻疽伯克霍尔德氏菌胞内感染模型,拟为进一步研究其致病机制提供了条件。

关键词：类鼻疽伯克霍尔德氏菌小鼠巨噬细胞(RAW264 7) 细胞模型

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重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

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中华微生物学和免疫学杂志 2005年第9期25卷 773-776页

作者：井申荣邹全明曾韦锟毛旭虎刘开云第三军医大学医学检验系临床微生物及免疫学教研室

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组... 详细信息

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验。方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Westernblot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性。结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg。结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性。

关键词：白细胞介素10 毕赤酵母分泌表达生物学活性重组人白细胞介素10 生物学活性测定毕赤酵母 IL-10基因质粒pPIC9K SDS-PAGE rhIL-10 Western EcoRⅠ

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溶酶体相关膜蛋白2AshRNA对乳腺癌细胞株紫杉醇耐药的影响

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细胞与分子免疫学杂志 2014年第4期30卷 351-354页

作者：韩起陈莎杨明珍张竹君陈安胡川闽李淑慧第三军医大学西南医院医学检验系临床生物化学教研室

目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构... 详细信息

目的制备针对人溶酶体相关膜蛋白2A(LAMP2A)的shRNA重组慢病毒,获得稳定低表达LAMP2A的MDA-MB-231乳腺癌细胞株,观察LAMP2A分子下调对乳腺癌细胞紫杉醇耐药性的影响。方法通过对LAMP2A的mRNA序列分析,设计了4条shRNA,通过基因重组技术构建pGLV-EGFP-shRNA慢病毒表达质粒,并测序鉴定。将构建的表达质粒和包装质粒共转染人胚肾HEK293T细胞包装产生慢病毒,测定病毒滴度。将构建的shRNA慢病毒表达载体感染人乳腺癌MDA-MB-231细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定细胞株后,Western blot法检测LAMP2A表达,验证蛋白表达抑制效果。采用1 nmol/L、10 nmol/L、100nmol/L的紫杉醇处理LAMP2A低表达乳腺癌细胞株后,用MTT法观察LAMP2A低表达组和对照组之间增殖效率的差异。结果测序结果显示重组慢病毒质粒构建正确,病毒滴度达2×108TU/mL。乳腺癌稳定细胞株中LAMP2A蛋白表达量显著降低。在10 nmol/L、100 nmol/L紫杉醇处理后,LAMP2A低表达乳腺癌细胞株对紫杉醇耐药性明显降低(P<0.05)。结论成功构建了人的LAMP2A基因shRNA慢病毒载体,获得了稳定低表达LAMP2A的乳腺癌细胞株,证实LAMP2A下调能够降低乳腺癌细胞株对紫杉醇的耐药性。

关键词：溶酶体相关膜蛋白2A 小发夹RNA 慢病毒载体紫杉醇

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用原位聚合酶链反应检测尖锐湿疣中人乳头瘤病毒DNA

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中华实验和临床病毒学杂志 1997年第1期11卷 77+89-77+89页

作者：郭华阳周来新汪江华刘斌刘盛华黄松生吴沾芬第三军医大学医学检验系临床生化教研室

用原位聚合酶链反应检测尖锐湿疣中人乳头瘤病毒ＤＮＡ郭华阳周来新汪江华刘斌刘盛华黄松生吴沾芬尖锐湿疣（ＣＡ）是由人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染引起的最常见的性传播疾病之一，治疗后容易复发。由于ＨＰＶ的抗原性差或拷贝数低，免... 详细信息

用原位聚合酶链反应检测尖锐湿疣中人乳头瘤病毒ＤＮＡ郭华阳周来新汪江华刘斌刘盛华黄松生吴沾芬尖锐湿疣（ＣＡ）是由人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染引起的最常见的性传播疾病之一，治疗后容易复发。由于ＨＰＶ的抗原性差或拷贝数低，免疫细胞化学和核酸分子杂交对ＣＡ中的...

关键词：人乳头瘤病毒尖锐湿疣乳头状瘤 DNA 聚合酶链反应

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