检索结果-内蒙古大学图书馆

免疫学杂志 2005年第6期21卷 460-462,467页

作者：段文元白云张华欣姜曼黎万玲第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038

目的利用基因工程手段构建hPD1Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD1Fc融合蛋白。方法PCR方法扩增编码hPD1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD1Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法... 详细信息

目的利用基因工程手段构建hPD1Fc重组cDNA,用真核表达系统制备有活性的hPD1Fc融合蛋白。方法PCR方法扩增编码hPD1膜外区的cDNA序列,将其与人IgG1Fc和pcDNA3.1(+)片段连接,构建成hPD1Fc重组表达载体。用脂质体法转染CHO细胞,夹心ELISA法检测上清液中融合蛋白hPD1Fc的表达,经ProteinA亲合层析纯化,SDSPAGE、免疫印迹鉴定表达产物。结果PCR扩增得到编码人PD1全长的288aa编码基因片段,将其膜外区167aa的编码序列与hIgG1Fc的cDNA片段一起连接并插入pcDNA3.1(+)表达质粒。重组质粒转染CHO细胞后,夹心ELISA法检测显示培养上清液中有hPD1Fc蛋白表达。纯化后的hPD1Fc蛋白经SDSPAGE和免疫印迹鉴定其相对分子质量约42800,与理论预测值相符。结论成功构建了hPD1Fc重组表达载体,利用哺乳动物细胞CHO表达出有活性的hPD1Fc融合蛋白,为进一步研究PD1分子在免疫耐受、自身免疫性疾病中的作用奠定了基础。

关键词： PD-1-Fc 基因工程真核表达

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小胶质细胞表达OX40L对T细胞增殖与凋亡的影响

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中华微生物学和免疫学杂志 2006年第9期26卷 805-811页

作者：王艳艳李茂全宋敏白云 400038 重庆第三军医大学医学遗传学教研室成都医学院公共卫生学教研室

目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用.方法通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋... 详细信息

目的鉴定免疫共刺激分子OX40配体(OX40 ligand,OX40L)在小胶质细胞上的表达,并探讨OX40L信号在小胶质细胞对中枢神经系统内T细胞增殖与凋亡中的作用.方法通过RT-PCR、免疫印迹和流式细胞术检测小胶质细胞株N9活化前后OX40L在mRNA和蛋白水平的表达变化,细胞免疫化学法鉴定原代小胶质细胞上OX40L表达情况.体外将小胶质细胞株N9与活化后T细胞共培养并阻断OX40L信号后,3H-TdR掺入实验和FITC-annexin-Ⅴ/PI荧光染色方法分别检测T细胞的增殖和凋亡情况,ELISA检测T细胞分泌IL-2的水平.结果小胶质细胞株N9活化前后均有OX40L表达,其蛋白表达率由23%增加为94%;原代小胶质细胞活化后表达OX40L.小胶质细胞表达OX40L后显著增强了T细胞增殖和IL-2分泌,抑制了T细胞凋亡.结论小胶质细胞活化后表达OX40L分子,OX40L-OX40信号可促进活化后T细胞增殖,抑制其凋亡,从而可能在维持中枢神经系统内T细胞免疫应答效应中发挥重要作用.有助于了解中枢神经系统内固有细胞和T细胞的相互作用机制,进一步认识OX40L的表达及功能.

关键词：小胶质细胞 T淋巴细胞共刺激分子 OX40L 中枢神经系统

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虫媒病防控研究与卫勤保障

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陆军军医大学学报 2022年第1期44卷 9-15页

作者：徐文岳徐小峰陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院病原生物学教研室重庆400038 陆军军医大学(第三军医大学)基础医学院医学遗传学教研室重庆400038

虫媒病不但是全球公共卫生问题,而且也是影响世界各国军队卫勤保障的重要问题。媒介生物的有效控制和叮咬防护手段的研制能从群体水平上控制和预防各种虫媒病的流行和传播,而针对具体虫媒病的特异性疫苗和药物的研制则能有效预防特定虫... 详细信息

虫媒病不但是全球公共卫生问题,而且也是影响世界各国军队卫勤保障的重要问题。媒介生物的有效控制和叮咬防护手段的研制能从群体水平上控制和预防各种虫媒病的流行和传播,而针对具体虫媒病的特异性疫苗和药物的研制则能有效预防特定虫媒病的感染。虽然目前在媒介生物控制、驱避剂和疟疾疫苗研制等方面取得了显著的进展,但仍然缺乏安全、高效的虫媒病防控手段,有待于在基因驱动改造媒介生物种群、昆虫寻找宿主和机体抗虫媒病原体保护性免疫机制等方面展开深入研究。

关键词：虫媒病媒介生物防控叮咬防护疫苗卫勤保障

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鼠ICOSIg融合蛋白腺病毒的制备及其对胰岛细胞系NIT-1的感染

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第三军医大学学报 2006年第21期28卷 2135-2137页

作者：许雪青王丰陈雪丹熊加祥段文元白云第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院检验科重庆400038

目的制备mICOSIg腺病毒,研究其对胰岛细胞系NIT-1的感染情况,及可否使后者正确表达分泌mICOSIg。方法从pMIG-ICOSIg质粒上切下ICOSIg融合蛋白的表达框,插入pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdmICOSIg,在Adeasy-1大肠杆菌中进行同源重... 详细信息

目的制备mICOSIg腺病毒,研究其对胰岛细胞系NIT-1的感染情况,及可否使后者正确表达分泌mICOSIg。方法从pMIG-ICOSIg质粒上切下ICOSIg融合蛋白的表达框,插入pAdtrack-CMV中构建腺病毒穿梭质粒pAdmICOSIg,在Adeasy-1大肠杆菌中进行同源重组,随后转染293细胞进行病毒颗粒包装。收集病毒后感染NIT-1细胞,用免疫印迹证实mICOSIg在NIT-1细胞中的正确分泌表达。结果ICOSIg编码框被正确构建到pAdtrack-CMV中,并经测序证实无误。目的病毒成功包装出来,并能有效感染胰岛细胞系NIT-1,免疫印迹证实培养上清中存在正确大小的mICOSIg融合蛋白。结论成功制备了mICOSIg腺病毒,该病毒能有效将mICOSIg转入胰岛细胞系NIT-1,并能准确分泌mICOSIg蛋白。为研究1型糖尿病中ICOS信号通路在T细胞破坏胰岛细胞中的作用提供了有效的研究手段。

关键词： ICOS 腺病毒胰岛细胞

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Variation_91720拷贝数变异与食管鳞癌易感性的关联研究

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第三军医大学学报 2014年第24期36卷 2437-2440页

作者：刘曦吴园园张坤陶桓晟官兴颖杨康第三军医大学西南医院胸心外科重庆2400038 第三军医大学医学遗传学教研室重庆2400038

目的探讨PIK3CA基因中Variation_91720拷贝数变异（copy number variation,CNV）与中国西南地区汉族人群食管鳞状细胞癌（esophageal squamous cell carcinoma,ESCC）易感性的关联。方法选取149例中国西南地区ESCC患者和205例年龄、性别相匹配的健康人群作为研究对象,采用基于Taq Man实时定量PCR检测外周血中Variation_91720拷贝数;基于SYBR Green实时定量PCR检测34例ESCC患者癌及癌旁组织中PIK3CA基因mRNA表达量。结果Variation_91720拷贝数在ESCC患者和对照人群中分布有显著差异（P〈0.01）,ESCC患者中Variation_91720拷贝数减少频率显著高于对照人群（P〈0.01,OR=5.617,95%CI=2.750-11.470）,是ESCC发生的危险因素;Variation_91720拷贝数增加显著低于对照人群（P=0.028,OR=0.419,95%CI=0.193-0.911）,是ESCC发生的保护因素。34例ESCC患者中癌组织的PIK3CA基因mRNA表达量显著高于癌旁组织（P=0.038）,基因表达差异与相应的外周血基因组Variation_91720拷贝数变异之间无显著统计学差异（P=0.066）。结论 Variation_91720拷贝数变异与中国西南地区汉族人群ESCC的易感性相关联;其拷贝数减少与增加ESCC的易感性相关而其拷贝数增加与降低ESCC的易感性相关,可能成为ESCC的高危人群筛选和早期诊断生物标记物。

关键词：食管鳞状细胞癌拷贝数变异 Variation_91720 易感性

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OX40信号上调Survivin表达对CD4^+T淋巴细胞增殖存活的影响

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免疫学杂志 2005年第2期21卷 81-83,87页

作者：王艳艳白云宋建勋杨晓亚第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学全军免疫学研究所重庆400038

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点... 详细信息

目的　探讨OX4 0信号抑制活化后CD4 + T细胞凋亡,维持细胞存活及促增殖作用是否与Survivin相关。方法　分离培养小鼠脾脏CD4 + T淋巴细胞,以去除T细胞的脾细胞作为抗原呈递细胞,交联CD3单克隆抗体活化T细胞。用免疫印迹法比较不同时相点,加入OX4 0抗体及转染Survivin负显性突变体基因后,CD4 + T细胞中Survivin蛋白表达差异。流式细胞仪检测AnnexinV染色后细胞凋亡数量。〔3H〕TdR掺入法测细胞增殖。结果　CD4 + T细胞活化后2～8d ,OX4 0抗体刺激可明显增强Survivin表达,并减少2 5 %细胞凋亡;Survivin突变体降低Survivin蛋白表达后使凋亡增加2 2 %。结论　OX4 0信号能够通过上调Survivin表达来抑制CD4 + T细胞凋亡,从而维持细胞存活和增殖。

关键词： OX40 存活素 T淋巴细胞

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小胶质细胞人补体攻膜复合物亚溶破模型制作及功能鉴定

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第四军医大学学报 2006年第10期27卷 872-874页

作者：罗娜白云周静然宋敏王艳艳杨晓亚许雪青段文元熊加祥第三军医大学医学遗传学教研室重庆400038 第三军医大学免疫学教研室重庆400038

目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用... 详细信息

目的：体外建立小鼠小胶质细胞补体攻膜复合物亚溶破模型，并进行功能鉴定，探讨补体攻膜复合物（sublytic membrane attack complex，sMAC）对中枢神经系统小胶质细胞的亚溶破刺激效应，方法：分离培养新生小鼠大脑皮层小胶质细胞，用酵母多糖激活急性期患者血清制备补体优球蛋白C56，以新鲜正常人血清（NHS）作为C7-C9来源，体外组装小鼠小胶质细胞sMAC亚溶破模型，CCK-8比色实验确定sMAC亚溶破剂量，激光共聚焦显微镜（LSCM）鉴定sMAC沉积，脱落细胞计数及台盼蓝拒染法分别判定细胞黏附力变化及脱落细胞活力．ELISA法测定sMAC对小胶质细胞NO和TNF—α分泌量的影响．结果：确定C561：480，NHS1：20为小胶质细胞亚溶破补体量；LSCM显示sMAC沉积于小胶质细胞表面；sMAC刺激小胶质细胞后与对照组相比细胞脱落增加（P〈0．05），而活力正常．刺激后12hNO及TNF-α分泌量比对照组显著增加（P〈0．05），不同时相观察sMAC刺激后小胶质细胞TNF—α分泌量均显著高于失活sMAC（P〈0．05）．结论：sMAC刺激小胶质细胞后分泌NO及TNF—α增多，并且可降低小胶质细胞黏附力而不影响细胞活力，推测sMAC对小胶质细胞具有炎性刺激效应．

关键词： C56 补体攻膜复合物小神经胶质细胞显微镜检查,共焦细胞活力一氧化氮肿瘤坏死因子

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B7-H1慢病毒的制备及其在B16F10细胞中的表达鉴定

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第三军医大学学报 2007年第1期29卷 24-27页

作者：张立群段文元许雪青黄钢陈雪丹白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7... 详细信息

目的构建小鼠B7-H1分子慢病毒表达载体并包装成感染性病毒颗粒,获得稳定表达B7-H1的B16F10细胞。方法以小鼠B7-H1的测序质粒为模板,PCR扩增B7-H1全长,装入pLenti6/V5-D-TOPO慢病毒表达载体,经过测序证实其序列与标准序列完全一致。将B7-H1表达载体用L ipofectam ineTM2000转染293FT细胞,包装成感染性病毒颗粒,感染B16F10细胞后,加入含B lastic id in(终浓度为4.0μg/m l)的RPM I1640培养基,筛选出稳定表达B7-H1蛋白的B16F10细胞株。结果PCR扩增得到编码小鼠B7-H1的877 bp基因片段,与预期大小一致。B7-H1重组慢病毒感染B16F10细胞后,用B7-H1单抗进行免疫组化检测,荧光显微镜观察显示B7-H1分子表达于B16F10细胞。FACS测定B16F10细胞荧光阳性率为36%。结论成功构建了B7-H1慢病毒表达载体,包装出感染性病毒颗粒,重组慢病毒感染B16F10细胞后表达出有活性的B7-H1膜表面蛋白,为进一步研究B7-H1分子在器官移植、自身免疫性疾病以及肿瘤免疫逃逸机制中的作用奠定了基础。

关键词： B7-H1 慢病毒基因治疗

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MTF-1对食管鳞癌EC109细胞株生长和迁移的影响

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第三军医大学学报 2014年第8期36卷 750-754页

作者：傅莉媛熊刚李娟张坤戴礼猛白云第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的研究外源性金属反应转录因子-1(metal-responsive transcription factor-1,MTF-1)对食管鳞癌EC109细胞的增殖、凋亡、迁移及细胞周期的影响,并探讨其作用机制。方法构建MTF-1真核表达载体pcDNA3.1-MTF-1,转染EC109细胞,采用RT-PCR和Western blot分别检测MTF-1 mRNA和蛋白水平的表达。采用CCK-8法检测细胞生长,流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,Transwell实验检测细胞迁移能力。结果与转染pcDNA3.1的对照组相比,转染pcDNA3.1-MTF-1显著上调了EC109细胞中MTF-1表达量。过表达MTF-1 48 h后,EC109细胞生长显著加快(P<0.01);细胞凋亡率降低(P<0.05);细胞周期比例发生显著改变,G1期细胞比例降低(P<0.01),S期细胞比例升高(P<0.01);细胞迁移能力无显著改变。结论 MTF-1通过抑制细胞凋亡、促进细胞周期G1到S期的转换进而促进食管鳞癌EC109细胞的生长,但对EC109的迁移能力没有显著影响。

关键词：金属反应转录因子1 食管鳞癌细胞增殖细胞迁移

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重组VIP腺病毒载体的构建及其在293细胞的表达

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第三军医大学学报 2007年第9期29卷 806-809页

作者：宋敏白云段文元章波杨晓亚许雪青第三军医大学基础医学部医学遗传学教研室重庆400038

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利... 详细信息

目的构建血管活性肠肽重组腺病毒载体,以期用于体内实验研究。方法利用RT-PCR扩增小鼠大脑VIPmRNA,亚克隆到穿梭质粒pAdTrack-CMV,在pAdeasy内同源重组,筛选阳性克隆,酶切、测序鉴定正确,线性化后脂质体法转染293细胞进行包装、扩增,利用报告基因EGFP对病毒滴度进行监测。PCR、免疫荧光鉴定pAdeasy-VIP感染293细胞后VIP基因的表达,ELISA检测重组病毒转染后293细胞上清中的表达。结果测序、酶切证实VIP基因重组腺病毒载体构建成功。RT-PCR,免疫荧光检测pAdeasy-VIP病毒感染的293细胞,均有VIP的表达。与对照组相比,重组病毒转染后293细胞上清中VIP多肽的表达明显增高。结论成功构建了含小鼠VIP基因的重组腺病毒载体,并成功表达VIP多肽。

关键词：血管活性肠肽腺病毒基因治疗

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