检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 1998年第6期20卷 548-550页

作者：毛琼国张波第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验... 详细信息

目的：对大鼠骨骼肌胰岛素受体的结构和特征进行分析。方法：采用麦胚凝集素琼脂糖凝胶（ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ）部分纯化骨骼肌胰岛素受体；通过ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、胰岛素结合实验以及受体自身磷酸化和外源性底物磷酸化实验，分析受体的结构，并研究其特征。结果：ＳＤＳ－ＰＡＧＥ证明骨骼肌胰岛素受体由两处分子量分别为１３５×１０３ｕ和９５×１０３ｕ亚基组成；受体结合实验经Ｓｃａｔｃｈａｒｄ作图分析表明受体与胰岛素结合呈负协同效应，最大结合容量为（０．９６±０．３４）ｐｍｏｌ／ｍｇ，受体β－亚基能自身磷酸化，且能激活受体内在酪氨酸蛋白激酶（ＴＰＫ）活性，并呈胰岛素剂量依赖关系。结论：ＷＧＡ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ纯化的骨骼肌胰岛素受体纯度和活性较好。

关键词：骨骼肌胰岛素受体纯化大鼠 TPK

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星形胶质细胞抑制T细胞增殖及机制探讨

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第三军医大学学报 2005年第20期27卷 2020-2023页

作者：熊加祥白云宋敏许雪青王艳艳杨晓亚第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞... 详细信息

目的初步探讨星形胶质细胞影响T细胞增殖作用及机制。方法利用分离培养小鼠原代星形胶质细胞,以LPS和IFNγ刺激细胞活化,用RTPCR方法检测非活化与活化状态的星形胶质细胞B7.2、B7.1、MHCⅡ和B7H1等免疫分子的表达情况;将不同状态的细胞分别与PHA刺激活化的小鼠T细胞进行共培养,观测其对T细胞增殖的影响,并分析可能的机制。结果小鼠原代星形胶质细胞在非活化状态下组成性表达B7.2和B7H1mRNA,在LPS和IFNγ刺激活化24h后B7H1的表达减少,而同时诱导表达MHCⅡ和B7.1mRNA,而TNFα作用不明显;非活化的星形胶质细胞对PHA刺激活化的T细胞增殖具有明显的抑制作用,而活化的星形胶质细胞的抑制作用减弱。结论小鼠星形胶质细胞在非活化及活化状态下对T细胞增殖具有不同的作用,其机制可能与其表达不同的免疫分子有关。

关键词：星形胶质细胞免疫分子 T细胞增殖

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载体介导的SIRNA抑制B7-H1在星形胶质细胞上的表达

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 298-300页

作者：熊加祥许雪青白云陈雪丹王璞宋敏第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利... 详细信息

目的构建SIRNA稳定表达载体,抑制B7-H1分子在星形胶质细胞上的表达,为研究大脑内B7-H1分子的功能提供有效实验工具。方法设计合成带有双向启动子具有转录功能性SIRNA载体,转入小鼠星形胶质细胞株CRL-2541内,干扰免疫分子B7-H1的表达,利用荧光载体N1平行观察转染效果,RT-PCR方法检测B7-H1的MRNA表达,免疫组化检测蛋白表达水平,以观察干扰效率。结果星形胶质细胞株CRL-2541经RNAI沉默后B7-H1MRNA表达下调,免疫组化发现其蛋白水平下降。结论成功建立具有双向启动子的SIRNA载体,并在星形胶质细胞中抑制B7-H1的表达。

关键词： RNAi B7-H1 星形胶质细胞

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人LIGHT基因的克隆及其在293T细胞中的表达

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 667-669页

作者：姜曼黄钢黎万玲白云第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部:分子遗传学教研室重庆400038

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核... 详细信息

目的　克隆人LIGHT分子的全长cDNA ,构建重组真核表达质粒pCI neo LIGHT并在 2 93T细胞上获得稳定表达。方法　从人T细胞cDNA文库中用PCR技术克隆人LIGHT全长cDNA ,装入T Easy载体 ,测序证实后 ,将LIGHTcDNA装入质粒pCI neo中构建真核表达载体。用电穿孔法转染 2 93T细胞 ,经G418筛选后 ,用流式细胞仪检测LIGHT分子的表达。结果　测序证实克隆的LIGHT全长cDNA阅读框正确完整 ,酶切证实LIGHT pCI neo中LIGHT插入方向正确。转染的2 93T细胞经G418筛选 3个月后 ,流式细胞仪检测有 78 69%的细胞表达人LIGHT分子。结论　成功克隆LIGHT基因并获得稳定表达膜型LIGHT分子的 2 93T细胞系。

关键词： LIGHT 293T细胞基因克隆真核表达

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PTTG1基因上调表达对A549细胞增殖和凋亡的影响

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第三军医大学学报 2006年第9期28卷 961-963页

作者：钱春荣刘昕刘丽莎卓勤强程英第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时... 详细信息

目的研究人垂体瘤转化基因1(hum an p itu itary tumor transform ing gene 1,PTTG1)上调表达对肺腺癌细胞株(A549)增殖和凋亡的影响。方法构建含PTTG1基因的真核表达载体,脂质体法转染A549细胞并用G418筛选出高表达的阳性克隆株,实时荧光定量PCR(real-tim e fluorescent quantitation PCR)和免疫细胞化学(immunocytochem ical assay,ICA)分别检测PTTG1 mRNA及蛋白表达的改变,3H胸腺嘧啶核甙(3H-TdR)掺入法检测细胞增殖活性,AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测凋亡情况。结果成功构建含PTTG1基因的真核表达载体,获得上调表达PTTG1的A549细胞,转染含PTTG1基因重组质粒的A549细胞增殖活性较未转染组细胞及转染空白质粒组细胞均显著增强(P<0.05);3组细胞间的凋亡率无显著差异。结论PTTG1基因能显著促进A549细胞的增殖,而对细胞凋亡没有影响。

关键词：垂体瘤转化基因1 真核表达载体 A549细胞增殖凋亡

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Separase上调对肿瘤细胞染色体分离作用的研究及条件表达载体的构建

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第三军医大学学报 2005年第6期27卷 497-499页

作者：由莉越刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　研究esp1在肺腺癌细胞株spc细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的方法。方法　将已有的含esp1基因的EGFP N1质粒转染spc细胞,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。同时构建能依赖四环素调控的含有esp1基因... 详细信息

目的　研究esp1在肺腺癌细胞株spc细胞中对染色体分离的作用,为肿瘤的基因治疗探索新的方法。方法　将已有的含esp1基因的EGFP N1质粒转染spc细胞,检测其转染效率及对染色体分裂相的影响。同时构建能依赖四环素调控的含有esp1基因的pTRE- d2EGFP质粒载体。结果　表达载体EGFP N1 esp1转染成功,染色体异常分裂相减少。表达载体pTRE -d2EGFP esp1构建成功。结论　esp1的上调表达对于肿瘤的异常染色体分裂相有一定的抑制作用,对于肿瘤治疗有潜在的应用价值。

关键词： spe细胞 esp1 转染四环素

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ICOS:一种重要的新型诱导共刺激分子

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第三军医大学学报 2003年第4期25卷 351-354页

作者：许雪青第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

抗原特异性T淋巴细胞免疫应答的有效产生及维持需要2种信号——MHC-肽提供的特异性的抗原信号，以及由APC表面共刺激分子提供的共刺激信号（Costimulatory signal）。随着研究的深入，这一观点逐渐得到广泛认可[1，2]。在T细胞活化的不... 详细信息

抗原特异性T淋巴细胞免疫应答的有效产生及维持需要2种信号——MHC-肽提供的特异性的抗原信号，以及由APC表面共刺激分子提供的共刺激信号（Costimulatory signal）。随着研究的深入，这一观点逐渐得到广泛认可[1，2]。在T细胞活化的不同时空阶段，多种共刺激分子发挥着不同的调控作用。CD28/CTLA-4-B7-1/B7-2共刺激途径是研究最早深入的共刺激途径之一，来自该途径的共刺激信号对T细胞的活化和耐受发挥着重要调节作用，但众多证据，例如CD28缺失的小鼠仍能产生一定的免疫应答[3]，表明CD28并不是惟一的共刺激分子.

关键词：综述抗原特异性T淋巴细胞免疫应答共刺激信号 IC0S

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人TNFRI cDNA的克隆及酵母表达载体的构建

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第三军医大学学报 2004年第17期26卷 1572-1572,1575页

作者：代佳平毛琼国王燕梁红刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

本实验利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以人单核淋巴细胞系U937细胞总RNA为模板,扩增出人TNFRI型受体胞外区约224个氨基酸残基的cDNA序列,将此片段为模板,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约180个氨基酸的DNA序列,将其克隆于载体PD... 详细信息

本实验利用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)以人单核淋巴细胞系U937细胞总RNA为模板,扩增出人TNFRI型受体胞外区约224个氨基酸残基的cDNA序列,将此片段为模板,采用剿式PCR技术扩增出编码TNFRI胞外区约180个氨基酸的DNA序列,将其克隆于载体PDM18-T进行序列测定,随后构建于新型酵母表达载体PGBKT7-DNA-BD,为进一步通过酵母双杂交获得拮抗TNFRI的具有生物学活性的多肽奠定了基础.

关键词： TNFRIcDNA RT-PCR 载体构建

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细菌16SrDNA基因T碱基特异的PCR产物片段化

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第三军医大学学报 2005年第4期27卷 317-319页

作者：黄正根刘昕高玉梅蔡瑜娇由莉越罗勇军第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法　设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片段 ,用尿嘧啶 DNA糖基化酶 (UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP... 详细信息

目的　探讨细菌 16SrDNA检测芯片杂交前的样本处理优化方法。方法　设计针对细菌 16SrDNA基因全长的通用引物 ,通过PCR时掺入一定比例的dUTP替代dTTP ,扩增长度为 1 5kb的片段 ,用尿嘧啶 DNA糖基化酶 (UDG)消化处理掺入到双链上的dUTP后 ,再经浓氨水特异性断开DNA双链上原dUTP处的磷酸二酯键 ,然后用聚丙烯酰胺凝受胶电泳 (PAGE)和琼脂糖电泳确认片段化的效果。结果　本实验选用的基因当dUTP与dTTP的比例在 3∶7～ 1∶1时 ,都能够获得比较理想的片段化结果。结论　通过控制一定的dUTP掺入比例再经UDG及氨水处理能够得到稳定的片段化结果。

关键词：尿嘧啶-DNA糖基化酶 16S rDNA 片段化 PCR dUTP dITP

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esp1基因上调表达对A549细胞凋亡影响的研究

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第三军医大学学报 2006年第8期28卷 828-830页

作者：刘丽莎刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A54... 详细信息

目的观察A549细胞转染esp1基因后细胞凋亡情况。方法将含esp1基因的IREEGFP质粒用FuGENE6脂质体转染到肺腺癌细胞A549,经G418筛选获得转染阳性的细胞系,检测转染细胞染色体数目及利用AnnexinV和TUNNEL试剂盒检测细胞凋亡的变化。结果A549细胞转入esp1基因后染色体异常分裂象减少,转染后细胞增殖减少,而去血清培养诱导的凋亡增加。结论esp1的上调表达不仅对于肿瘤的异常染色体分裂象以及肿瘤细胞的异常增殖有一定的抑制作用,且对A549细胞的凋亡有促进作用。

关键词： A549细胞 esp1 转染凋亡

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