检索结果-内蒙古大学图书馆

第三军医大学学报 2005年第8期27卷 710-712页

作者：罗勇军刘昕钱春荣第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨PTTG (pituitarytumortransforminggene)、ESP1(estradiol stimulatedprotein 1)在A5 49、SPC A 1细胞S、G2 M期的表达。方法　用双胸苷同步化法同步化A5 49、SPC A 1细胞及MRC 5细胞,分别收集S、G2 M期总RNA ,做Real timePCR。结果　PTTG在A5 49细胞和SPC A 1细胞的S期表达比G2 M期表达高,在MRC 5细胞的在S、G2 M期中PTTG均无表达;ESP1在A5 49细胞与SPC A 1细胞及MRC 5细胞的S期表达均比G2 M期表达低。结论　PTTG在MRC 5的S、G2 M期都无表达,在A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达增高,提示肿瘤细胞的染色体非整倍体与PTTG的表达增高有关;ESP1在MRC 5和A5 49、SPC A 1的S期比G2 M期表达低,说明细胞中姐妹染色体的分离主要依靠于ESP1在G2 M期被激活,而导致姐妹染色体的分离。

关键词： ESP1 PITG 实时荧光定量PCR 细胞同步化

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hIL-3突变体在大肠杆菌中的表达及纯化

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第三军医大学学报 2000年第1期22卷 33-35页

作者：王燕毛琼国万瑛纪贤文刘昕第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比... 详细信息

目的 :将天然型hIL 3蛋白经定点突变为hIL 3突变体蛋白 ,并在大肠杆菌中表达及纯化。方法 :超声破碎细菌得到包涵体 ,经DEAEFastFlow,SephaecrylS 200HR等层析步骤纯化。结果 :经以上一系列纯化 ,得到的人IL 3突变体蛋白纯度达90 % ,比活性为7.3×104 U/ml ,总回收率为100 %。结论 :突变体hIL 3在大肠杆菌中得到高效表达 ,并获得高纯度、高活性的hIL 3蛋白。

关键词： hIL-3突变体大肠杆菌纯化免疫分子遗传学

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内毒素刺激人脐静脉内皮细胞免疫相关分子的表达

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免疫学杂志 2006年第2期22卷 124-128页

作者：肖宇宏白云宋敏张利永黄钢第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细... 详细信息

目的了解内毒素(LPS)刺激活化人脐静脉内皮细胞(HUVEC)后,与免疫相关的膜分子和细胞因子表达及变化情况,以探讨LPS激活内皮细胞后对免疫应答可能的影响。方法胰蛋白酶法分离培养人脐静脉内皮细胞,用RT-PCR观测未刺激和用LPS刺激的内皮细胞HLA-DR,CD80、CD86、B7-H1、B7-H2、B7-H3、B7-H4、B7-DC、HVEM、TR6、LTβR、LIGHT、OX40、OX40L等免疫相关分子的mRNA表达情况;用流式细胞仪技术检测CD40、CD137I、CAM-1蛋白的表达情况;ELISA检测细胞因子IL-6I、L-8、TNF-αI、FN-γ的含量。结果①RT-PCR结果显示,未经刺激的人脐静脉内皮细胞表达B7-H2、B7-H3、TR6、LTβR,并在LPS刺激后表达上调;B7-DC、HUVEM虽呈组成性表达,但在LPS刺激后未见变化;B7-H1、B7-H4仅在内皮细胞上为诱导表达;而CD80、CD86、LIGHT、HLA-DR、OX40无论刺激与否均未表达。②流式细胞仪检测证实其细胞表面表达少量CD137、CD40及ICAM-1,LPS刺激后其表达水平明显提高;③ELISA检测发现,内皮细胞在未激活状态下就能够分泌IL-6I、L-8和TNF-α,且LPS刺激后提高其分泌量。结论人脐静脉内皮细胞组成性表达多种免疫相关分子,LPS激活内皮细胞可以显著上调其表达。人脐静脉内皮细胞由于缺少CD80、CD86的共刺激信号,不能活化初始T细胞而只能向活化及记忆性T细胞提供共刺激信号在调节特异性免疫应答的过程中,可能会起到负调控的作用。

关键词：人脐静脉内皮细胞内毒素免疫相关分子

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银染单链构象多态性技术检测人IL-3基因突变

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第三军医大学学报 2001年第11期23卷 1358-1359页

作者：毛琼国刘昕王燕梁红第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 ... 详细信息

目的　对人白细胞介素 3(hIL 3)基因突变体进行分析和进一步鉴定 ,建立一种灵敏、快捷的检测基因突变和DNA多态性的方法即银染单链构象多态性技术 (Singlestrandconformationpolymorphism ,SSCP)。方法　将野生型和突变型的人白介素 3(hIL 3)cDNA连接到PUC9和PUC19质粒载体上 ,转化入大肠杆菌 ,扩增质粒 ,用常规方法抽提 ,酶切 ,然后将酶切后的DNA片段进行PAGE胶电泳 ,银染检测野生型和突变型的异同。结果　以野生型hIL 3cDNA作为对照 ,连接到PUC9和PUC19上的电泳结果均为一致 ,突变型hIL 3cDNA的电泳带明显比野生型的电泳带靠后。结论　SSCP方法具有简便 ,快捷较灵敏的特点 ,对人白细胞介素 3(hIL 3)基因的点突变得到进一步的鉴定。

关键词：单链构象多态性人白细胞介素-3 基因突变基因诊断

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人重组CD137-Fc分子的构建与真核表达

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第三军医大学学报 2003年第24期25卷 2185-2188页

作者：黄钢黎万玲姜曼白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部免疫学研室所重庆400038

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc... 详细信息

目的　构建人CD13 7 Fc基因的真核表达质粒 ,并表达有生物学活性的纯化人CD13 7 Fc融合蛋白。方法　从cDNA文库中用PCR扩增CD13 7全长编码基因 ,并导入真核表达载体pcDNA3中。测序证实后 ,继续用PCR扩增其膜外区cDNA ,,酶切后与hIgG1Fc基因一起装入真核表达载体pcDNA3中 ,转染 2 93T细胞瞬时表达 ,用夹心ELISA检测其表达情况 ,经蛋白A亲和纯化 ,用SDS PAGE与免疫印迹进行鉴定。结果　测序证实构建的CD13 7与CD13 7 FccDNA阅读框完整 ,连接部位序列正确 ;ELISA证实CD13 7 Fc蛋白的表达 ;SDS PAGE与免疫印迹证实其为人CD13 7 Fc蛋白。结论　获得了纯化的hCD13 7 Fc融合蛋白 ,为探讨CD13 7在免疫自稳调节中的地位 ,以及探索CD13 7的其它生物学功能奠定了坚实的实验基础。

关键词：人 CD137 CD137-Fc 真核表达

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导入hLIGHT-Fc基因对人乳腺癌细胞体外增值的影响

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第三军医大学学报 2005年第24期27卷 2422-2424页

作者：熊刚吴蔚杨康白云第三军医大学西南医院胸心外科第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的探讨hLIGHTFc基因对人乳腺癌细胞的体外抑制效应。方法以DOTAP脂质体介导hLIGHTFc基因转染人乳腺癌细胞株MCF7,通过绘制细胞生长曲线、MTT比色法以及流式细胞仪检测观察hLIGHTFc转染对MCF7细胞生长的影响。结果hLIGHTFc基因的表达... 详细信息

目的探讨hLIGHTFc基因对人乳腺癌细胞的体外抑制效应。方法以DOTAP脂质体介导hLIGHTFc基因转染人乳腺癌细胞株MCF7,通过绘制细胞生长曲线、MTT比色法以及流式细胞仪检测观察hLIGHTFc转染对MCF7细胞生长的影响。结果hLIGHTFc基因的表达可以抑制MCF7细胞的体外生长。在5%血清培养时,MCF7/LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低;MTT比色显示MCF7/LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异(P<0.05);流式细胞检测显示,在IFNγ协同下基因转染使瘤细胞的生长滞留在G0+G1期,S期细胞明显减少,并观察到部分瘤细胞的凋亡。结论hLIGHTFc基因转染对MCF7细胞具有体外抑制作用,但全面评价有待进一步的研究。

关键词： hLIGHT-Fc 转染 MCF-7细胞基因治疗

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野生型及突变型survivin基因重组逆转录病毒的构建及表达研究

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第三军医大学学报 2005年第8期27卷 691-693页

作者：杨晓亚宋建勋白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学基础医学部全军免疫学研究所重庆400038

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴... 详细信息

目的　构建含绿色荧光蛋白和野生型及第3 4位氨基酸突变型survivin基因的双顺反子逆转录病毒载体,并进行真核细胞表达。方法　用PCR的方法由含survivin基因的真核表达载体扩增所需目的片段,然后将该片段插入逆转录病毒载体pMIG。酶切鉴定重组子,脂质体介导下转染包装细胞PhoenixE ,病毒上清感染NIH3T3细胞,RT PCR检测外源基因mRNA的表达、流式细胞仪检测GFP的表达从而确认外源基因的转录。结果　经琼脂糖凝胶电泳鉴定,目的片段成功的连接到pMIG载体上。载体转染NIH3T3细胞,RT PCR显示目的片段mRNA能够表达,流式细胞仪检测GFP获良好的表达。结论　成功构建了人survivin基因野生型及突变型逆转录病毒,并在NIH3T3细胞进行了表达,为下一步的研究工作提供了有效的分子工具,并且为将来能在体内应用抑制survivin基因表达的肿瘤治疗奠定基础。

关键词： survivin基因野生型突变型逆转录病毒载体

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草麻黄中补体抑制成分抑制大鼠异种心脏移植超急性排斥反应的实验研究

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第三军医大学学报 2005年第17期27卷 1773-1775页

作者：李军杨康白云吴蔚熊刚第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(comp lem ent inh ib iting component,C IC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用。方法按是否给予C IC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供... 详细信息

目的初步探讨草麻黄中补体抑制成分(comp lem ent inh ib iting component,C IC)对异种心脏移植超急性排斥反应的作用。方法按是否给予C IC灌胃处理,将动物模型分为对照组和实验组,观察对照组和实验组术后供心存活时间,在术后早期及供心失活时取两组心脏组织行光镜、电镜病理检查,并在术后固定时间分别抽鼠血行血清学检查,用微量法测定CH50、APH50,用透射比浊法测定C3。结果实验组移植心脏存活时间为(51.00±3.46)m in,与对照组(30.30±3.46)m in比较差异极显著(P<0.01)。结论豚鼠至大鼠异种心脏移植后,补体的经典途径和替代途径均被激活。C IC能明显抑制补体活性,延缓超急性排斥反应的发生,从而使移植心脏的存活时间延长。

关键词：异种心脏移植超急性排斥反应补体补体抑制剂草麻黄

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大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化研究

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第三军医大学学报 2006年第4期28卷 291-293页

作者：王燕郭乔楠章波刘昕白云第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038 第三军医大学西南医院病理科重庆400038

目的建立N-甲基-N’-硝基-N-亚硝基胍(N-METHYL-N’-NITRO-N-NITROSOGUANIDINE,MNNG)、佛波酯(12-O-TET-RADECANOYLPHORBOL-13-ACETATE,PMA)对大鼠肠上皮细胞系IEC-6的恶性转化模型。方法通过克隆形成率实验确定MNNG、PMA对IEC-6细胞转化浓度,对IEC-6细胞进行分阶段多次干预。用软琼脂集落形成实验和裸鼠体内致瘤实验鉴定细胞恶性转化程度。结果经MNNG、PMA多次处理IEC-6细胞至24次后,细胞生长速度加快,排列紊乱,失去接触抑制,出现复层生长,并可在软琼脂上生长,且呈剂量反应关系,但在第24次之前的细胞则不能在软琼脂上生长。转化细胞在裸鼠体内形成瘤,病理组织学证实为低分化肠上皮细胞癌。结论MNNG、PMA具有使IEC-6细胞发生恶性转化的能力。

关键词： MNNG PMA 肠上皮细胞系恶性转化大鼠

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LIGHT-Fc基因转染对食管癌细胞株Eca109抑制作用的初步研究

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第三军医大学学报 2004年第8期26卷 686-689页

作者：熊刚杨康白云第三军医大学西南医院胸心外科重庆400038 第三军医大学基础医学部分子遗传学教研室重庆400038

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上... 详细信息

目的　探讨LIGHT对人食管癌细胞的体外抑制效应。方法　以DOTAP脂质体介导LIGHT Fc基因转染人食管癌细胞株Eca10 9,通过绘制细胞生长曲线及MTT比色法观察LIGHT Fc转染对Eca10 9细胞生长的影响 ,用RT PCR法检测LIGHT受体在Eca10 9细胞上的表达。结果　LIGHT Fc基因的表达可以抑制Eca10 9细胞的生长。在低血清培养时 ,Eca10 9 LIGHT细胞的生长曲线较对照组明显降低 ;MTT比色显示Eca10 9 LIGHT的细胞活力与对照组相比有显著性差异 (P<0 .0 5 )。结论　LIGHT Fc基因转染对人食管癌Eca10 9细胞具有体外抑制作用。

关键词： LIGHT 转染 Eca109细胞基因治疗

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